ICS11220

B41.

中華人民共和國國家標準

GB/T18643—2021

代替

GB/T18643—2002

雞馬立克氏病診斷技術

DianostictechniuesforMareksdisease

gq’

2021-04-30發布2021-11-01實施

國家市場監督管理總局發布

國家標準化管理委員會

GB/T18643—2021

目次

前言

…………………………Ⅰ

引言

…………………………Ⅱ

范圍

1………………………1

縮略語

2……………………1

臨床診斷

3…………………1

病毒分離

4…………………3

瓊脂免疫擴散試驗檢測

5…………………4

檢測

6PCR…………………6

熒光定量檢測

7PCR(q-PCR)……………7

綜合判定

8…………………8

附錄規范性附錄病毒分離用溶液配制

A()……………9

附錄規范性附錄瓊脂免疫擴散試驗用溶液配制

B()…………………11

附錄規范性附錄檢測用引物反應條件及溶液配制

C()PCR、………12

附錄規范性附錄檢測用引物探針和反應條件

D()q-PCR、…………15

GB/T18643—2021

前言

本標準按照給出的規則起草

GB/T1.1—2009。

本標準代替雞馬立克氏病診斷技術本標準與相比主

GB/T18643—2002《》。GB/T18643—2002

要技術變化如下

:

修改了鑒別診斷部分的描述見年版的

———(3.4,20023.4);

增加了病毒分離檢測方法見第章附錄

———(4,A);

增加了檢測方法見第章附錄

———PCR(6,B);

增加了熒光定量檢測方法見第章附錄

———PCR(7,C)。

本標準的修訂參考了陸生動物診斷實驗和疫苗標準手冊版并結合國內外技術研究

OIE《》(2017),

新成果與國際先進技術保持一致

,。

請注意本文件的某些內容可能涉及專利本文件的發布機構不承擔識別這些專利的責任

。。

本標準由中華人民共和國農業農村部提出

。

本標準由全國動物衛生標準化技術委員會歸口

(SAC/TC181)。

本標準起草單位中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所中國動物衛生與流行病學中心

:、。

本標準主要起草人劉長軍龔振華張艷萍路平王笑梅李陽高玉龍祁小樂李凱王志亮

:、、、、、、、、、。

本標準所代替標準的歷次版本發布情況為

:

———GB/T18643—2002。

Ⅰ

GB/T18643—2021

引言

雞馬立克氏病是一種雞的高度傳染性以淋巴細胞增生為特征的腫瘤性疾

(Marek’sdisease,MD)、

病由雞皰疹病毒型即雞馬立克氏病病毒

,2(Gallidherpesvirus2,GaHV-2),(Marek’sdiseasevirus,

引起一般發生于周齡以上的禽只多發生于周齡周齡可引起多種嚴重的

MDV)。MD3,12~30。MD

病癥其中淋巴組織增生是最常見也是最重要的一種經典型主要侵害神經組織死亡率很少超

,。MD,

過可持續數周至數月急性型可使發病雞內臟器官產生淋巴瘤發病率一般為

10%~15%,。MD,10%~

暴發流行時發病率可高達死亡率可能在數周內迅速增加然后死亡停止也可能在數月內

30%,70%。,,

保持穩定的死亡率并逐漸下降目前最常見的是產生廣泛內臟器官淋巴瘤的急性型

,。,MD。

在臨床診斷上容易與雞的其他腫瘤性疾病禽白血病和禽網狀內皮組織

MD,(Avianleukosis,AL)

增生病發生混淆一般需要通過流行病學和病理組織學進行鑒別診斷

(Reticuloendotheliosis,RE),。。

可通過活疫苗免疫預防免疫屬于非清除性免疫不能清除病原也不能阻止環境中野毒的

MD,,,MDV

感染和感染雞排毒由于疫苗普遍應用以及疫苗的自身特點臨床上疫苗毒株的接種和野

。MD,,MD

毒株的感染情況復雜需要實驗室診斷技術進行確診

,。

從感染雞組織中分離可用于該病的檢測通常選用從抗凝血樣中分離的淋巴細胞腎細胞

MDV。、

或脾細胞懸液作為分離病毒用的材料也可以用羽髓組織漿液作為分離材料細胞懸液或羽髓

,MDV。

組織漿液可接種雞腎細胞鴨胚成纖維細胞

(Chickenkidneycells,CKC)、(Duckembryofibroblast,

或雞胚成纖維細胞進行病毒分離應用瓊脂免疫擴散試驗

DEF)(Chickenembryofibroblast,CEF)。

對羽髓抗原進行血清學檢測可以確定感染

(Agargelimmunodiffusion,AGID)MDV,MDV。AGID

是檢測抗體最常用的方法然而由于疫苗毒株也可以刺激機體產生相應的抗體抗體的檢測對于

,MD,

的臨床診斷僅具有參考價值方法可以用于檢測

MD。PCR(Polymerasechainreaction,PCR)MDV,

法還可以鑒別血清型野毒株和疫苗毒株

PCRMDVⅠ。

Ⅱ

GB/T18643—2021

雞馬立克氏病診斷技術

1范圍

本標準規定了雞馬立克氏病臨床診斷以及病毒分離瓊脂免疫擴散試驗檢測和熒光定量

,、、PCR

檢測等實驗室檢測的技術要求和綜合判定

PCR。

本標準適用于雞馬立克氏病的檢測診斷檢疫和流行病學調查等

、、。

2縮略語

下列縮略語適用于本文件

。

瓊脂免疫擴散試驗

AGID:(Agargelimmunodiffusion)

禽白血病

AL:(Avianleukosis)

雞胚成纖維細胞

CEF:(Chickenembryofibroblast)

雞腎細胞

CKC:(Chickenkidneycells)

鴨胚成纖維細胞

DEF:(Duckembryofibroblast)

致細胞病變效應

CPE:(Cytopathiceffect)

鴨胚成纖維細胞

DEF:(Duckembryofibroblast)

脫氧核糖核酸

DNA:(Deoxyribonucleicacid)

溴化乙錠

EB:(Ethidiumbromide)

胎牛血清

FBS:(Fetalbovineserum)

禽淋巴性白血病

LL:(Lymphoidleukosis)

培養基

M199:M199(M199Medium)

雞馬立克氏病

MD: