犐犆犛１１．２２０

犅４１

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

犌犅／犜１７９９９．５—２００８

代替ＧＢ／Ｔ１７９９９．４—１９９９

犛犘犉雞微生物學(xué)監(jiān)測

第５部分：犛犘犉雞瓊脂擴散試驗

犛犘犉犮犺犻犮犽犲狀—犕犻犮狉狅犫犻狅犾狅犵犻犮犪犾狊狌狉狏犲犻犾犾犪狀犮犲—

犘犪狉狋５：犃犵犪狉犵犲犾狆狉犲犮犻狆犻狋犪狋犻狅狀狋犲狊狋犳狅狉犛犘犉犮犺犻犮犽犲狀

２００８１２３１發(fā)布２００９０５０１實施

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局

發(fā)布

中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會

書

犌犅／犜１７９９９．５—２００８

前言

ＧＢ／Ｔ１７９９９《ＳＰＦ雞微生物學(xué)監(jiān)測》分為１０個部分：

———第１部分：ＳＰＦ雞微生物學(xué)監(jiān)測總則；

———第２部分：ＳＰＦ雞紅細(xì)胞凝集抑制試驗；

———第３部分：ＳＰＦ雞血清中和試驗；

———第４部分：ＳＰＦ雞血清平板凝集試驗；

———第５部分：ＳＰＦ雞瓊脂擴散試驗；

———第６部分：ＳＰＦ雞酶聯(lián)免疫吸附試驗；

———第７部分：ＳＰＦ雞胚敏感試驗；

———第８部分：ＳＰＦ雞雞白痢沙門氏菌檢驗；

———第９部分：ＳＰＦ雞試管凝集試驗；

———第１０部分：ＳＰＦ雞間接免疫熒光試驗。

本部分為ＧＢ／Ｔ１７９９９的第５部分。

本部分修訂參照了ＧＢ／Ｔ１８９３６—２００３《高致病性禽流感診斷技術(shù)》、ＮＹ／Ｔ５４０—２００２《雞病毒性

關(guān)節(jié)炎瓊脂凝膠免疫擴散試驗方法》、ＮＹ／Ｔ５５６—２００２《雞傳染性喉氣管炎診斷技術(shù)》、ＯＩＥ《陸生動物

（哺乳動物、禽鳥和蜜蜂）診斷試驗和疫苗手冊》（第五版）中的有關(guān)規(guī)定。

本部分代替ＧＢ／Ｔ１７９９９．４—１９９９《ＳＰＦ雞瓊脂擴散試驗》。

本部分與ＧＢ／Ｔ１７９９９．４—１９９９相比主要變化如下：

———增加了加樣示意圖、結(jié)果判定示意圖以示說明；

———增加了附錄Ａ“馬立克氏病病毒抗原瓊脂擴散檢驗的程序”；

———增加了附錄Ｂ“試劑的配制”。

本部分的附錄Ａ、附錄Ｂ為規(guī)范性附錄。

本部分由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出。

本部分由全國動物防疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會（ＳＡＣ／ＴＣ１８１）歸口。

本部分起草單位：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所、中國動物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心、濟南斯帕法

斯家禽有限公司。

本部分主要起草人：曲連東、姜騫、韓凌霞、邵衛(wèi)星、朱果、單忠芳、劉家森、司昌德、郭東春、于海波、

孟慶文。

本部分所代替標(biāo)準(zhǔn)的歷次版本發(fā)布情況為：

———ＧＢ／Ｔ１７９９９．４—１９９９。

Ⅰ

書

犌犅／犜１７９９９．５—２００８

犛犘犉雞微生物學(xué)監(jiān)測

第５部分：犛犘犉雞瓊脂擴散試驗

１范圍

ＧＢ／Ｔ１７９９９的本部分規(guī)定了瓊脂擴散試驗的技術(shù)要求。

本部分適用于對ＳＰＦ雞進(jìn)行以下病原微生物的血清抗體檢測：禽流感病毒（ＡｖｉａｎＩｎｆｌｕｅｚａ

Ｖｉｒｕｓ）、傳染性支氣管炎病毒（ＩｎｆｅｃｔｉｏｕｓＢｒｏｎｃｈｉｔｉｓＶｉｒｕｓ）、傳染性法氏囊病病毒（ＩｎｆｅｃｔｉｏｕｓＢｕｒｓａ

ＤｉｓｅａｓｅＶｉｒｕｓ）、傳染性喉氣管炎病毒（ＩｎｆｅｃｔｉｏｕｓＬａｒｙｎｇｏｔｒａｃｈｅｉｔｉｓＶｉｒｕｓ）、禽痘病毒（ＦｏｗｌＰｏｘ

Ｖｉｒｕｓ）、禽腦脊髓炎病毒（ＡｖｉａｎＥｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓＶｉｒｕｓ）、網(wǎng)狀內(nèi)皮增生癥病毒（Ｒｅｔｉｅｕｌｏｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓｉｓ

Ｖｉｒｕｓ）、禽呼腸孤病毒（病毒性關(guān)節(jié)炎）（ＡｖｉａｎＲｅｏｖｉｒｕｓ）、馬立克氏病病毒（Ｍａｒｅｋ’ｓＤｉｓｅａｓｅＶｉｒｕｓ）、禽

腺病毒Ⅰ群（ＡｖｉａｎＡｄｅｎｏｖｉｒｕｓＧｒｏｕｐⅠ）、多殺性巴氏桿菌（犘犪狊狋犲狌狉犲犾犾犪犿狌犾狋狅犮犻犱犪）。本部分同樣適用

于對ＳＰＦ雞進(jìn)行馬立克氏病病毒（Ｍａｒｅｋ’ｓＤｉｓｅａｓｅＶｉｒｕｓ）抗原的檢測（見附錄Ａ）。

２原理

抗原、抗體在含有電解質(zhì)的瓊脂凝膠中，可以向四周自由擴散，二者互相結(jié)合，在最適比例處出現(xiàn)沉

淀線。采用已知抗原檢測相應(yīng)的抗體，或已知抗體鑒定相應(yīng)的抗原。

３試劑和材料

３．１試劑

３．１．１瓊擴抗原或抗體。

３．１．２標(biāo)準(zhǔn)陽性血清。

３．１．３被檢血清或羽髓。

３．１．４０．０１ｍｏｌ／Ｌ、ｐＨ７．２的８％氯化鈉磷酸鹽緩沖溶液（見附錄Ｂ）。

３．１．５０．０１ｍｏｌ／Ｌ、ｐＨ６．４的８％氯化鈉磷酸鹽緩沖溶液（檢測禽流感病毒抗體時使用，見附錄Ｂ）。

３．１．６優(yōu)質(zhì)瓊脂粉或瓊脂糖。

３．２材料

瓊擴板，打孔器，移液器。

４操作程序

４．１瓊脂板制備

將１ｇ優(yōu)質(zhì)瓊脂粉或０．８ｇ～１．０ｇ瓊脂糖加入１００ｍＬ的０．０１ｍｏｌ／Ｌ、ｐＨ７．２的８％氯化鈉磷酸緩

沖液中（檢測禽流感病毒抗體時使用），水浴加熱融化，稍涼（６０℃～６５℃），倒入瓊擴板內(nèi)（厚度為

３ｍｍ），待瓊脂凝固后，４℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

４．２打孔

用打孔