第三章生物制品的質量管理、檢定與標準化01二月20231第一節生物制品的GMP管理一、GMP概況即（GoodManufacturingPracticesforDrugs,GMP）是用科學、合理、標準化的條件和方法來控制藥品生產的全過程，將差錯發生的可能性降到最低，從而保證生產出優質藥品的一套管理制度。GMP根據適用范圍可分為三類：國際性的GMP國家性質的GMP行業性的GMP01二月20232第一節生物制品的BMP管理二、GMP的基本內容不同國家和組織頒布的GMP在具體條款上有差異，但基本內容是一致的，涉及到以下三個方面的內容：人員硬件軟件01二月20233第一節生物制品的BMP管理三、GMP的作用和特點：1、GMP的實施涉及兩個方面：1）政府藥政管理部門從管理角度把GMP看成是政府對制藥廠提出的最低要求，并作為藥品質量監督員檢查藥廠和藥品質量的依據；2）生產單位應把GMP視為本廠所必須具備的技術水平，即生產管理、質量管理和質量監測應達到的必需水平。01二月20234第一節生物制品的BMP管理三、GMP的作用和特點：2、GMP是根據通用性的規定，針對本國所有藥廠而制定的。各藥廠應按GMP的要求，制定更具體的實施條例。3、GMP是為了防患于未然，應把管理的重點放在生產過程中，通過對生產過程的嚴格控制來保證生產出安全有效的藥品。4、GMP強調有效性的證實。對一個工序或一件用具、設備在用于生產之前，要經過驗證，證明是符合要求的、有效的，以確保產品質量。01二月20235第一節生物制品的BMP管理三、GMP的作用和特點：5、在管理系統上，GMP要求有生產管理部門和質量管理部門兩權分立的特點，在組織上兩者的地位是惡行的，在人事上兩部門的負責人不能互相兼任。6、GMP強調人員素質、衛生要求、無菌要求、核對制度以及質量監督檢查制度。01二月20236第一節生物制品的BMP管理四、實施GMP的目的和意義實施GMP是我國醫藥產品進入國際市場的先決條件。實施GMP是企業及其產品增強競爭力的重要保證實施GMP，才能使藥品質量得到最大限度的保證。01二月20237第一節生物制品的BMP管理五、生物制品GMP檢查要點保護環境和操作者防止交叉污染，嚴格分區，獨立空調局部負壓盡可能一個產品、一個車間徹底消毒和清場嚴格動物使用及動物管理環境溫度01二月20238第一節生物制品的BMP管理六、生物制品GMP認證檢查要點1．強毒與弱毒“強毒”系指生物制品生產及檢定用細菌株及病毒株，其致病力強，傳染性強，感染的機率高，感染后癥狀較重，可危及生命健康，甚至引起傳染病爆發流行的細菌菌株及病毒株。“弱毒”系指生物制品生產及檢定用細菌株及病毒株，經過天然或人工改造方法，去除或封閉其毒力因子，使其致病力減弱，一般不引起感染或發病的細菌菌株及病毒株。強毒株與弱毒株，不允許混放在一起，其生產及檢定操作場所須嚴格分開，并有專用設備。01二月20239第一節生物制品的BMP管理六、生物制品GMP認證檢查要點2．死毒與活毒“活毒”是制備滅活疫苗的第一階段或減毒活疫苗生產時，將生產用細菌或病毒株進行大規模培養制備，其生產過程和生產場所、生產設備、器材含有大量活的細菌或活的病毒生物體，稱之為“活毒”。“死毒”是制備滅活疫苗時，第一階段生產出大量活細菌或或病毒后，到第二階段，對活生物體加入一定量甲醛或適宜滅活劑，將全部細菌或病毒殺死，稱之為“死毒”。“活毒”與“死毒”的生產場所、生產設備及器材，須嚴格分開。01二月202310第一節生物制品的BMP管理六、生物制品GMP認證檢查要點3．“脫毒前”與“脫毒后”“脫毒前”系指破傷風梭狀菌、白喉桿菌繁殖培養時，生產大量破傷風毒素及白喉毒素，對人體有致病性，這一階段為“脫毒前”。“脫毒后”系指毒素中加入一定量甲醛或適宜脫毒劑，將毒素去掉毒性，不再具有致病性，仍保留其抗原性和免疫原性，稱之為“脫毒后”。“脫毒前”與“脫毒后”的生產場所、生產設備及器材須嚴格分開。01二月202311第一節生物制品的BMP管理六、生物制品GMP認證檢查要點4．血液制品、抗血清、人和動物組織制備的制品，其生產所用的原材料，為人血漿、動物免疫血清、人和動物器官、組織及組織液等，均含有大量的人和動物的異種蛋白質或細胞活性物質，具有較強的致敏原物質，不經過相應處理和加工，可致人體過敏反應或血清病。因此，血液制品、抗血清、人和動物組織生產制備制品時，須有專用生產場所、生產設備及器材，不可與其他生物制品混用。01二月202312第一節生物制品的BMP管理六、生物制品GMP認證檢查要點5．芽孢菌制品，系用炭疽桿菌、破傷風梭菌、肉毒梭菌等含有芽孢菌來生產制備的制品，芽孢菌是微生物對外周環境抵抗力最強的生命單位。芽孢菌在自然界可存活數十年及百年之久，100℃可耐受2小時以上，在70％酒精中存活20年，低溫和干燥對其毫無作用。生產芽孢菌制品的生產場所、生產設備和器材須專用，與其他制品生產嚴格分開。01二月202313第一節生物制品的BMP管理六、生物制品GMP認證檢查要點6．卡介苗與結核菌制品生產場所，必須嚴格分開，其生產設備、器材、生產用菌種必須專用，不能混用。01二月202314第二節生物制品的質量檢定生物制品的基本屬性和特點其起始材料均為生物活性物質；生物制品生產加工全過程是生物學過程，是無菌操作過程；有些生物制品的生產過程是有毒或有菌的過程;生物制品多為蛋白質或多肽類物質，分子量較大，并具有復雜的分子結構,較不穩定，易失活，易被微生物污染，易被酶解破壞。01二月202315第二節生物制品的質量檢定生物制品的基本屬性和特點其質量控制和質量檢定是采用生物學分析方法，其效價或生物活性檢定有其變異性；生物制品原材料、中間品、成品、運輸、貯存、甚至使用保持在“冷鏈”系統中；特別是預防制品使用對象不是病人，而是健康人群；生物制品的質量控制實行生產全過程監控;

生產現場檢查時要充分考慮這些特點01二月202316第二節生物制品的質量檢定生物制品實行國家批簽發

《藥品管理法實施辦法》中規定，國家對所規定的生物制品實行國家批簽發制度。國家批簽發——國家藥品監督管理部門授權國家藥品檢定機構，對所規定的生物制品，在出廠前或進口時，按批進行審查和簽發，凡審查或檢定不合格的不允許銷售或者進口。01二月202317第二節生物制品的質量檢定生物制品國家批簽發分為三種類型一、僅對某種制品每批的批記錄摘要進行審查，符合要求發給批簽發證；二、審查批記錄摘要＋對部分批次制品進行抽檢檢定、審查和檢定符合要求發給批簽發證；三、審查批記錄摘要＋批批檢定，審查和批批檢定符合要求發給批簽發證。01二月202318第二節生物制品的質量檢定

生物制品必須具備兩個重要條件，即安全性和有效性。為保證生物制品質量，世界衛生組織要求各國生產的制品必須有專門的檢定機構負責成品的質量檢定，并且規定檢定部門有熟練的高級技術人員和精良的設備條件，以保證檢定工作的質量。未經檢定審批發給正式檢定合格證的制品，不準出廠。生物制品檢定的依據《中華人民共和國藥典》《中國生物制品規程》01二月202319第二節生物制品的質量檢定生物技術藥物質量標準研究的依據一、主要依照《重組DNA產品質量控制要點》、《中國生物制品規程》、《中國藥典》等要求進行。二、參考世界衛生組織（WHO）和美國FDA頒布的指南、ICH文件和《歐洲藥典》。檢定標準、檢定方法：準確可靠、切實可行；保證產品安全、有效。01二月202320生物技術藥物質量標準研究的內容1、目標產品的均一性2、建立目標產品生物學活性或免疫學效價測定方法3、研究建立目標產品的免疫學活性的測定方法及質控標準4、研究建立國家標準品或參考品5、建立目標產品生產相關雜質的限量分析方法和標準6、制定出保證上述生物技術產品臨床安全、有效、與WHO標準相一致的質量控制標準和規范化的檢定方法第二節生物制品的質量檢定01二月202321第二節生物制品的質量檢定

研究建立靈敏、穩定的理化性質、純度、含量的測定方法及質控標準。研究建立目標產品的生物學功效的測定方法及質控標準；建立用于藥物生物學功效檢定用的細胞系和動物模型。

運用生化標準化原則，以WHO國際標準品為對照，研制出國家標準品或參考對照品。在效價定義上要求與國際單位一致；沒有國際標準品的新藥，則根據標準品要求自行研制國家參比品。

外源DNA、菌體蛋白質、細菌內毒素以及病毒、支原體、細菌等在工藝中加入有害物質的檢測。

01二月202322重組產品質量控制上存在的難點建立重組藥物的生物學活性測定方法；理化測定標準品的穩定性；人源化單抗中的人源化程度檢測方法及標準研究；重組人白蛋白等大劑量重組產品安全性評價問題；反義核酸藥物理化特性測定和效力測定，即如何評價反義核酸的體內及體外活力；基因治療藥物的安全性評價包括反轉錄病毒、生物分布和效力測定；DNA疫苗的安全性和效力檢測方法研究；干細胞治療產品的質量標準的建立（干細胞鑒定及活力測定）。01二月202323我國基因工程產品安全管理

法規和技術指南《傳代細胞系生產生物制品的規程》《人用鼠源性單克隆抗體質量控制要點》《預防用新生物制品臨床研究的技術要求》《人用重組DNA制品質量控制要點》《人的體細胞治療申報臨床試驗指導原則》《人基因治療申報臨床試驗指導原則》《藥理毒理檢查指導原則》《藥品生產質量管理辦法》《藥品注冊管理辦法》01二月202324生物技術藥物的質量控制生物技術藥物的特點：1、來源：活的生物體（細菌或細胞）；2、結構：復雜（包括組成、空間結構）；3、生產：涉及生物材料和生物學過程（發酵、細胞培養，分離純化等），有其固有的易變性。01二月202325生物技術藥物的質量控制質量控制包括兩個方面：1、生產過程中質量控制GMP（硬件、軟件）2、最終目標產品的質量控制（方法學研究）01二月202326質量控制方法學研究具體內容一、生物學活性測定和比活性二、蛋白質純度檢查三、蛋白質含量測定四、蛋白質藥物理化性質的鑒定五、蛋白質的二硫鍵分析六、對糖蛋白的特殊要求七、殘余雜質檢查八、安全性及其他檢測項目九、生物技術藥物待測樣品保存01二月202327一、生物學活性測定和比活性

1、意義：1）基因工程產品的化學本質為蛋白質、多肽，其活性由產品的氨基酸序列或其空間結構所形成的活性中心所決定的，與其絕對質量不一致。2）基因工程產品的生物學活性與藥效學基本相一致。3）利用生物學活性建立的測定效價體系，是給藥品定量的依據，保證產品藥效的重要手段。01二月202328效價測定一般原則1、國際通用方法；2、測定結果須用國際或國家標準品校正，以國際單位表示。01二月202329生物學活性測定方法分類1）體外細胞培養測定法

a、促進細胞生長作用（G-CSF:NFS-60）

b、抑制細胞生長作用(TNF:L929)

c、間接保護細胞作用(IFN:VISH;VSV)2）離體動物器官測定法采用家兔主動脈條測定重組腦利鈉肽生物活性。3）體內測定法4）生化酶促反應測定法5）免疫學活性測定法01二月202330

利用動物體內某些指標變化，定出產品的單位，如EPO活性測定，體內注射EPO后，計算小鼠網織紅細胞增加的數量與標準品比較，確定其活性單位。01二月202331生物學活性測定方法選擇體內測定和體外測定方法

a、體內測定：即整體動物測定，能為較大范圍的重組產品的效價提供有用信息，但費時、昂貴、難操作及同時存在倫理問題，大多數情況下傾向于選擇體外測定方法。

b、體外測定：可使用分離的器官或組織、原代細胞或傳代細胞系，目前最常用方法是連續生長、因子依賴的、克隆化的細胞系的方法，其測定結果比較準確、重現性好、經濟、容易使用和便于統計分析。01二月202332生物學活性測定方法選擇2、定量、半定量、定性方法

a、通過研究首先選擇能夠定量評價的方法，最好的選擇是背景較低的反應，并且對相關產品有陡峭的、可重復的劑量-反應曲線；其次考慮半定量方法（如NGF），最后考慮定性（如BMP）方法。

b、對生產工藝穩定，生物學活性測定方法復雜，可采用其他替代方法（如重組人生長激素用HPLC定量方法代替復雜生物活性測定方法）。01二月202333第二節生物制品的質量檢定一、生物制品的理化檢定(附常規的檢定方法)生物制品的檢定一般分理化檢定、安全檢定和效力檢定三個方面1、物理性狀檢定1）外觀檢定：通過特定的人工光源檢測生物制品的外觀，其顏色、狀態及加入蒸餾水后的澄清度應符合藥物的規程要求。（1）透明液制品：不得含有異物、白點、凝塊、渾濁或搖不散的沉淀物。01二月202334第二節生物制品的質量檢定一、生物制品的理化檢定(附常規的檢定方法)1、物理性狀檢定1）外觀檢定：（2）懸濁液制品：應為乳白色渾懸液，不得有搖不散的菌塊或其他異物。（3）凍干制品：應為淡黃色或白色疏松體，呈海綿狀或結晶狀，應無融化現象。01二月202335第二節生物制品的質量檢定2）真空度凍干制品進行真空封存，可進一步保證制品的生物活性和穩定性。可用高頻火花真空測定器檢查其真空程度，凡有真空度者瓶內應出現藍紫色光輝。3）溶解時間按規程要求，加適量溶劑，檢查溶解時間，其溶解速度應在規定時限內。01二月202336第二節生物制品的質量檢定2、化學檢定：除水分檢定外，按規定加入一定量無菌注射用水后進行檢定1）pH值測定：常用電極法2）水分含量測定：常用卡爾.費休水分測定法，一般水分不能高于3％，卡爾.費休法的基本原理是：依據卡爾非休法測定水份含量時，在存在甲醇和堿的情況下，水會按照下列化學反應式與碘和二氧化硫進行化學反應：

H2O+I2+SO2+CH30H+3RN→[RHN]SO4CH3+2[RHN]I

方法：卡爾費休容量法測定樣品中的水含量是根據滴定過程中消耗的卡氏試劑的量，計算出樣品中的水含量。該方法具有操作簡單、速率快、精度高等優點。01二月202337第二節生物制品的質量檢定3）蛋白質含量測定（1）凱氏定氮法（2）酚試劑法（3）雙縮脲法（4）紫外分光光度法（5）考馬斯亮藍法4）防腐劑含量測定（1）氣相色譜法（2）液相色譜法（3）薄層層析法2、化學檢定01二月202338第二節生物制品的質量檢定2、化學檢定5）等電點的測定用等電聚焦電泳法6）分子量的測定a、滲透壓法b、超速離心法c