色譜聯(lián)用技術(shù)在生藥學(xué)研究中的應(yīng)用摘要：本文介紹了近年來HPLC–MS聯(lián)用技術(shù)在中藥指紋圖譜建立、結(jié)構(gòu)鑒定以及定量分析等方面的應(yīng)用及其發(fā)展前景。以及GC/MS在中藥材鑒定、中成藥分析、藥效學(xué)研究和藥動(dòng)學(xué)研究中的應(yīng)用極其發(fā)展前景。關(guān)鍵詞：HPLC–MSGC/MS鑒定分析Abstract:InrecentyearswereintroducedinthisarticleandHPLC-MSdetectionintraditionalChinesemedicine(TCM)fingerprintisestablished,thestructureidentificationandquantitativeanalysisoftheapplicationanddevelopmentprospect.AndtheanalysisoftheGC/MSintheidentificationofChinesemedicinalmaterials,proprietaryChinesemedicine,theapplicationofthepharmacodynamicandpharmacokineticresearchprospects.Keywords:HPLC-MSanalysisofGC/MSidentification色譜聯(lián)用技術(shù)，就是采用色譜技術(shù)將復(fù)雜體系加以分離，再用紅外光譜、質(zhì)譜或核磁共振等波譜學(xué)或光譜學(xué)等的技術(shù)分別提供其結(jié)構(gòu)信息，這為復(fù)雜體系的分離分析研究提供了一種具有發(fā)展前景的新技術(shù)。色譜聯(lián)用技術(shù)包含了多種聯(lián)用方式和技術(shù)，色譜方法主要包括高效液相色譜(HPLC)、氣相色譜(GC)、毛細(xì)管電色譜(CEC)和高效毛細(xì)管電泳(HPCE)等幾種分離手段同四大譜即質(zhì)譜、核磁共振、紅外、紫外光譜的分別聯(lián)用組成了色譜聯(lián)用技術(shù)的豐富內(nèi)涵，此外還有與其他技術(shù)的聯(lián)用應(yīng)用。由于對(duì)復(fù)雜體系分析信息量的要求日益增高，各種聯(lián)用均得到較大發(fā)展，其中最引人注目的是色譜與質(zhì)譜的成功聯(lián)用，主要包括氣相色譜—質(zhì)譜(GC／MS)和液相色譜—質(zhì)譜(LC／MS)。另外，正處于快速發(fā)展階段并廣泛應(yīng)用的色譜聯(lián)用技術(shù)包括氣相色譜／傅立葉變換紅外光譜(GC—FTIR)、氣相色譜／原子光譜(GC—AS)、液相色譜／電感耦合等離子體質(zhì)譜(HPLC-ICP—MS)、液相色譜／二極管陣列檢測／質(zhì)譜／質(zhì)譜聯(lián)用(LC—DAD—MS-MS)、毛細(xì)管電泳／質(zhì)譜聯(lián)用(CE-MS)等。色譜聯(lián)用技術(shù)在生物樣品分析、食品分析、環(huán)境分析、藥物方面等表現(xiàn)出了一定的優(yōu)越性。本文著重介紹液質(zhì)聯(lián)用與氣質(zhì)聯(lián)用。1液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)HPLC-MS主要由高效液相色譜儀、接口、質(zhì)量分析器、真空系統(tǒng)和計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成。混合樣品通過液相色譜系統(tǒng)進(jìn)樣,由色譜柱分離。從色譜儀流出的被分離組分依次通過接口進(jìn)入質(zhì)譜儀的離子源處并被離子化,然后離子被聚焦于質(zhì)量分析器中,根據(jù)質(zhì)荷比而分離,分離后的離子信號(hào)被轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?hào),傳送至計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng),根據(jù)質(zhì)譜峰的強(qiáng)度和位置對(duì)樣品的成分和結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析[1,2]。目前常用的HPLC-MS聯(lián)用儀具有兩大分類系統(tǒng),一種是從質(zhì)譜的離子源角度來劃分,包括電噴霧離子(electrosprayionization,ESI),大氣壓化學(xué)電離(atmosphericpressurechemicalionization,APCI)和基質(zhì)輔助激光解吸離子化(matrixassistedlaserdesorptionionization,MALDI)等;另一種是從質(zhì)譜的質(zhì)量分析器角度來劃分,包括四級(jí)桿質(zhì)譜儀(quadrupole-MS,Q-MS),離子阱質(zhì)譜儀(iontrap-MS,IT-MS),飛行時(shí)間質(zhì)譜儀(timeofflight-MS,TOF-MS),傅立葉變換質(zhì)譜儀(fouriertransform-MS,FT-MS)[3]。從離子源角度來看,ESI從去除溶劑后的帶電液滴形成離子,具有多電荷能力,所以其分析的分子量范圍很大,既可用于小分子分析,又可用于多肽、蛋白質(zhì)和寡聚核苷酸分析,尤其適用于在溶液中已形成離子的化合物或能夠帶多電荷的生物大分子的分析。APCI是在大氣壓下利用電暈放電來使氣相樣品和流動(dòng)相電離的一種離子化技術(shù),要求樣品有一定的揮發(fā)性,適用于非極性或低、中等極性的化合物。由于極少形成多電荷離子,分析的分子量范圍受到質(zhì)量分析器質(zhì)量范圍的限制。MALDI是將溶于適當(dāng)基質(zhì)中的樣品涂布于金屬靶上,用高強(qiáng)度的紫外或紅外脈沖激光照射可實(shí)現(xiàn)樣品的離子化。由于MALDI的靈敏度很高,且對(duì)高濃度的非易失性鹽的響應(yīng)不如ESI靈敏,因此將MALDI與液體樣品的引入進(jìn)行聯(lián)用引起了廣泛的興趣。MALDI與TOF-MS聯(lián)用測定高質(zhì)量數(shù)的分子,其靈敏度高,樣品制備簡單,現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于分析蛋白質(zhì)、肽類、核苷酸、多糖類物質(zhì)。從質(zhì)量分析器角度來看,Q-MS中樣品在第一個(gè)四極質(zhì)量分析器中進(jìn)行質(zhì)量分析,然后按質(zhì)荷比選擇離子,選定的離子在第二個(gè)四極質(zhì)量分析器中進(jìn)行碰撞誘導(dǎo)裂解產(chǎn)生一系列新的產(chǎn)物離子。產(chǎn)物離子被第三個(gè)四極質(zhì)量分析器檢測,進(jìn)行兩極分析,從而提高分析選擇性和靈敏度。IT-MS由中間的類似四級(jí)桿的環(huán)形電極和兩個(gè)端蓋電極構(gòu)成,端蓋電極施加直流電壓,環(huán)電極施加射頻電壓,通過施加適當(dāng)電壓就可以形成一個(gè)勢能阱(離子阱)。根據(jù)射頻電壓的大小,離子阱就可捕獲某一質(zhì)量范圍的離子。離子阱可以儲(chǔ)存離子,待離子累積到一定數(shù)量后,升高環(huán)電極上的射頻電壓,離子按質(zhì)量從高到低的次序依次離開離子阱,被電子倍增監(jiān)測器檢測。離子阱既能直接用于質(zhì)荷比離子的檢測,又能實(shí)現(xiàn)串聯(lián)質(zhì)譜。TOF-MS應(yīng)用不同質(zhì)量的離子不同飛行速度,離子飛行通過相同的距離到達(dá)檢測器的時(shí)間不同而獲得質(zhì)量分離,與MALDI聯(lián)用,具有較大的質(zhì)量分析范圍和較高的質(zhì)量分辨率。FT-MS應(yīng)用快速傅立葉變換方法將離子的頻率信號(hào)轉(zhuǎn)換為質(zhì)譜信號(hào),其優(yōu)點(diǎn)為分辨率高[4]。1.1在中藥指紋圖譜研究中的應(yīng)用張尊建[5]等采用HPLC-UV-MS法對(duì)密花石斛進(jìn)行指紋圖譜研究，標(biāo)示了9個(gè)共有峰，對(duì)其部分色譜峰進(jìn)行了初步定性，有澤蘭內(nèi)酯、鼓槌聯(lián)芐、大黃素或蘆薈大黃素等。此外，他們[6]還采用HPLC-UV-MS法對(duì)忍冬和山銀花藥材進(jìn)行指紋圖譜的研究，確認(rèn)了忍冬指紋圖譜中的8個(gè)色譜峰(熊果酸、綠原酸、十三烷酸、香芥酚、corymbosin、3-甲基-4-羥基肉桂酸、異綠原酸、丁香酚等)和山銀花圖譜中的5個(gè)色譜峰(綠原酸、香芥酚、丁香酚、異綠原酸、咖啡酸等)，并比較了2種藥材指紋圖譜的差異。李松林[7]等應(yīng)用HPLC-DAD-MS聯(lián)用技術(shù)測定四川GAP示范基地3個(gè)公司的9個(gè)川芍樣品，結(jié)果有21個(gè)共有峰，通過參考文獻(xiàn)資料鑒定l1個(gè)色譜峰對(duì)應(yīng)之化合物：阿魏酸、川芎釅內(nèi)酯Ⅰ和H、Coniferylferulate、藁本內(nèi)酯等。所建立的液相色譜指紋譜特征性和專屬性強(qiáng)，可作為川芎藥材內(nèi)在質(zhì)量控制的有效方法。余靜[7]等采用HPLC-UV-MS法分別對(duì)刺五加藥材水溶性和脂溶性成分進(jìn)行指紋圖譜研究，并分別對(duì)水溶性成分指紋譜中5個(gè)色譜峰和脂溶性成分指紋圖譜中8個(gè)色譜峰進(jìn)行了初步定性。根據(jù)化合物的質(zhì)荷比、提取離子色譜(EIC)以及相關(guān)文獻(xiàn)，對(duì)圖中主要色譜峰進(jìn)行了初步歸屬，主要成分為丁香苷、綠原酸、異綠原酸、咖啡酸、刺五加苷Bl、芥子醛等。兩張指紋圖譜相互補(bǔ)充，為剌五加藥材的相關(guān)研究提供了較全面的參考。由于中藥復(fù)方制劑成分復(fù)雜，現(xiàn)行的各種單一測定法提供的信息量少，無法建立較完善的指紋圖譜，因此有人提出建立多維指紋譜嘗試解決該問題。其建立既能較系統(tǒng)、完整地解決中藥復(fù)方制劑質(zhì)量控制難題，又可為中藥研究中缺乏標(biāo)準(zhǔn)品的難題提供一種新的解決途徑[8]。馬欣[9]等應(yīng)用HPLC-DVD-MS2法建立了銀杏葉提取物的多維指紋圖譜，同時(shí)建立了質(zhì)譜總離子流(TIC)指紋圖譜，檢測了銀杏葉中四種有效成分(黃酮和內(nèi)酯類化合物)。樣品經(jīng)前處理后，應(yīng)用AgilentHPLC色譜條件和API-ES-MS條件分析了法國、香港、山東等10個(gè)廠家樣品。結(jié)果提取物的HPLC有33個(gè)峰，MS總離子流有51個(gè)峰。并以蘆丁為參照物，計(jì)算了樣品的相似度。戴德舜[10,11]等在研究桂枝湯指紋圖譜時(shí)，采HPLC-MS-MS等法對(duì)其中具有雙向調(diào)節(jié)作用的A部分、5種單味藥A部分及各單味藥按收率和組方用量配比制得的A部分進(jìn)行指紋圖譜測定，并將其闡述為多維全息化學(xué)特征譜，對(duì)桂枝湯A部分產(chǎn)生雙向調(diào)節(jié)作用的物質(zhì)基礎(chǔ)作了初步討論，說明多維化學(xué)特征譜提供的大量信息可較好地反映復(fù)方及單味藥物信息，所顯示的各項(xiàng)參數(shù)如能配合一定指標(biāo)的成分信息，將成為復(fù)方質(zhì)量控制的有效指標(biāo)，并可在一定程度上作為藥效特征的有力佐證。多維指紋圖譜專屬性強(qiáng)，因?yàn)閷?duì)中藥中某成分有保留時(shí)間、UV圖譜、相對(duì)分子量和特征碎片4種信息，為中藥研究中缺乏對(duì)照品提高了可能性。1.2在中藥結(jié)構(gòu)鑒定中的應(yīng)用采用HPLC-MS聯(lián)用技術(shù)，在對(duì)未知成分的研究中，質(zhì)譜檢測器可以給出大量的結(jié)構(gòu)信息，結(jié)合同類已知結(jié)構(gòu)化合物的裂解規(guī)律，或結(jié)合其它檢測方法，即可對(duì)未知成分結(jié)構(gòu)進(jìn)行直接分析。孫秀燕等[12]采用HPLC-MS聯(lián)用儀，ESP-IT-MS對(duì)濱蒿中利膽保肝活性成分進(jìn)行了分離和結(jié)構(gòu)鑒定，鑒定出濱蒿中的利膽有效成分除含有綠原酸、對(duì)羥基苯乙酮、6，7-二甲氧基香豆素外，還首次分離鑒定出具有保肝活性的茵陳色原酮。Miketova等[13]利用HPLC-ESI-MS技術(shù)對(duì)綠茶提取物直接進(jìn)行分析，結(jié)合不同化合物的相對(duì)分子質(zhì)量和保留時(shí)間信息，可對(duì)所含的兒茶酸類進(jìn)行有效鑒定。He等[14]同時(shí)利用HPLC-MS、HPLC-DAD成功地對(duì)姜的辛辣成分與含油樹脂提取物進(jìn)行了成分分析，根據(jù)紫外吸收光譜和質(zhì)譜結(jié)果，成功地鑒定了其中7個(gè)化合物結(jié)構(gòu)，并分析推測了其他2個(gè)未知成分的結(jié)構(gòu)。Ndjoko等[15]利用HPLC-TSP-MS并結(jié)合HPLC-TSP-MS-MS方法對(duì)大麻樹脂提取物中的大麻酚類進(jìn)行定性分析，在3份不同的大麻樹脂提取物樣品中，共鑒定分析了Δ9THC(m/z3l5)等l1個(gè)成分。Fuzzati等[16]利用HPLC-MS直接分析了人參根提取物中含有的人參皂苷，共檢測到25種人參皂苷，獲得人參皂苷所連的糖基和苷元結(jié)構(gòu)。Wolfender等[17]分別對(duì)熱噴霧接口、恒流快原子轟擊接口和ESI接口技術(shù)，對(duì)提取物進(jìn)行HPLC–MS分析的應(yīng)用研究中，認(rèn)為HPLC-TSP-MS適用于中等極性的化合物，如多酚類，萜類化合物；恒流快原子轟擊接口及ESI接口更適合于分析相對(duì)分子質(zhì)量和極性較大的化合物。由于粗提物中通常含有不同類型的化合物，應(yīng)用不同類型的離子化方式對(duì)其進(jìn)行分析，以取各組分完整的信息。1.3在中藥定量分析中的應(yīng)用HPLC-MS與多級(jí)反應(yīng)監(jiān)測技術(shù)結(jié)合可進(jìn)行天然藥物提取物中成分的定量分析。其具有高靈敏度、高選擇性，適用于對(duì)熱不穩(wěn)定化合物的分析等特點(diǎn)。徐智秀[18]等采用惠普公司HypersilODS色譜柱，以乙腈一水梯度洗脫,分離出9種人參皂甙，用二極管陣列檢測器檢測并在202nm下提取色譜圖。利用三極四極質(zhì)譜研究了9種人參皂甙的一級(jí)質(zhì)譜和二級(jí)質(zhì)譜，采用內(nèi)標(biāo)、外標(biāo)法對(duì)人參皂甙進(jìn)行了定量分析。Chauvaux等[19]HPLC-ESI-MS-MS對(duì)植物組織中微量成分氨基環(huán)丙烷羧酸進(jìn)行了定量分析，并對(duì)煙草的根、莖、葉提取物中的氨基環(huán)丙烷羧酸進(jìn)行了定量分析。由于測定方法的高度特異性，測定內(nèi)源性的氨基環(huán)丙烷羧酸不需提純。盡管樣品的成分非常復(fù)雜，色譜條件仍可優(yōu)化至被分析成分與干擾成分很好地分離，并能l2min內(nèi)完成分析測試。1.4在中藥代謝產(chǎn)物鑒定中應(yīng)用HPLC-MS聯(lián)用技術(shù)在分析中藥代謝產(chǎn)物時(shí),由于其選擇性強(qiáng)、靈敏度高且可以獲得復(fù)雜混合物中單一成分的質(zhì)譜圖,有利于中藥、中藥藥物代謝產(chǎn)物和內(nèi)源性化合物的分離和鑒定。HPLC-MS聯(lián)用技術(shù)能夠直接分析溶液樣品,特別適合分析復(fù)雜介質(zhì)中強(qiáng)極性、難揮發(fā)或熱不穩(wěn)定的化合物,在中藥代謝產(chǎn)物研究中得到廣泛應(yīng)用。MutoR等[20]利用HPLC-ESI-MS,以電化學(xué)檢測器作檢測裝置分析黃芩苷在體內(nèi)的代謝產(chǎn)物,結(jié)果達(dá)到了很好的分離鑒別目的。郭繼芬等[21]利用高效液相色譜與電子噴霧離子阱質(zhì)譜聯(lián)用,對(duì)士的寧、馬錢子堿及其主要代謝物進(jìn)行鑒定,證明樣品中含有大量士的寧、馬錢子堿,并根據(jù)色譜和質(zhì)譜,推測士的寧在人體內(nèi)的主要代謝產(chǎn)物為葡糖苷酸結(jié)合物,馬錢子堿的代謝途徑為去甲基化,最低檢測限為5ng。邢杰等[22]采用液相色譜-電噴霧離子阱串聯(lián)質(zhì)譜測定大鼠尿樣中黃芩苷及其異構(gòu)體的化學(xué)結(jié)構(gòu)以及其排泄情況。根據(jù)代謝物的多級(jí)質(zhì)譜和紫外吸收光譜數(shù)據(jù)推測,兩種給藥途徑均檢測到原形藥黃芩苷及其異構(gòu)體黃芩素6-O-葡萄糖苷酸。孫江浩等[23]采用HPLC-ESI-MS研究何首烏中二苯乙烯苷在小鼠體內(nèi)的代謝產(chǎn)物時(shí)發(fā)現(xiàn),二苯乙烯苷在體內(nèi)的代謝物為葡萄糖醛酸結(jié)合物。杜玥等[24]采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定大鼠血漿中漢黃芩素濃度,針對(duì)黃酮類化合物在生物體內(nèi)多與葡萄糖醛酸結(jié)合,消除半衰期較長的特點(diǎn),靈敏度提高,使血漿中的漢黃芩素最低定量濃度為0.25ng/ml。1.5在中藥藥物動(dòng)力學(xué)研究中應(yīng)用中藥藥物的有效性和安全性與藥物及其代謝物在體液和組織中的濃度有關(guān),藥物動(dòng)力學(xué)研究要求對(duì)生物樣本中的微量乃至痕量成分進(jìn)行定量分析。而目前藥物研制日趨低劑量,使常規(guī)的分離檢測技術(shù)難以滿足復(fù)雜介質(zhì)中痕量成分準(zhǔn)確定量的要求。采用HPLC-MS聯(lián)用技術(shù)進(jìn)行藥物動(dòng)力學(xué)研究,具有高靈敏度和高專屬性特點(diǎn),不僅簡化工作過程,減少樣品制備和色譜分離的時(shí)間,而且能夠同時(shí)測定樣品中復(fù)方制劑的多組分濃度,達(dá)到常規(guī)分析中的高樣品通量。DanielL.Gustafson等[25]利用LC-MS法,研究從歐州紅豆杉Taxusbaccata提取出的多烯紫杉醇在人體內(nèi)發(fā)生轉(zhuǎn)運(yùn)和轉(zhuǎn)化的藥代動(dòng)力學(xué)規(guī)律。居文政等[26]利用HPLC-ESI-MS,測定人血漿中燈盞乙素總苷元,線性范圍為0.0126～3.24mg/l,發(fā)現(xiàn)燈盞花素片口服藥代動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)達(dá)峰時(shí)間較長,約占受試者總?cè)藬?shù)45%的藥時(shí)曲線有雙峰現(xiàn)象。楊漢煜等[27]應(yīng)用HPLC-MS-MS法測定人血漿中偽麻黃堿濃度,以SRM掃描方式,以準(zhǔn)分子離子(m/z166)作為母離子,利用生成的主要碎片離子m/z147進(jìn)行定量分析,血漿中的內(nèi)源性物質(zhì)不干擾待測物的測定,其定量下限可達(dá)5ng/ml,具有高度的專屬性和靈敏度。符旭東等[28]利用HPLC-MS法,測定Beagle狗血漿中石杉?jí)A甲,線性范圍為0.1～12ng/ml,最低定量濃度為0.1ng/ml,可以檢測到Beagle狗靜注和口服100μg石杉?jí)A甲后12h的血藥濃度。2GC-MS在中藥研究中的應(yīng)用氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)聯(lián)用利用了色譜的高分離能力和質(zhì)譜的高鑒別特性,可對(duì)復(fù)雜的混合樣品進(jìn)行分離、定性、定量分析的一次完成,是一種完美的現(xiàn)代分析方法。GC-MS的常用測定方法:總離子流色譜法(TIC)類似于GC圖譜,用于定量。反復(fù)掃描法(RSM)按一定間隔時(shí)間反復(fù)掃描,自動(dòng)測量、運(yùn)算,制得各個(gè)組分的質(zhì)譜圖,可進(jìn)行定性。質(zhì)量色譜法(MC)記錄具有某質(zhì)荷比的離子強(qiáng)度隨時(shí)間變化圖譜。在選定的質(zhì)量范圍內(nèi),任何一個(gè)質(zhì)量數(shù)都有與總離子流色譜圖相似的質(zhì)量色譜圖。GC-MS技術(shù)隨著儀器的不斷完善與發(fā)展,檢測技術(shù)的成熟與推廣,其應(yīng)用范圍越來越廣。由于GC-MS技術(shù)檢測靈敏度高,分離效能好,使之在中藥研究領(lǐng)域的應(yīng)用越來越受到重視。在揮發(fā)油、生物堿、糖類、脂肪酸類、甾類化合物分析方面均有廣泛應(yīng)用。在質(zhì)量控制方面GC-MS也得到了越來越廣泛的應(yīng)用。2.1在中藥材的鑒定中的應(yīng)用利用GC/MS聯(lián)用技術(shù)對(duì)不同炮制品的揮發(fā)油成分進(jìn)行比較分析,了解其含量與組成有何不同之處。如通過對(duì)蔓荊子各炮制品的分析研究,表明其炮制后揮發(fā)油含量有所減少,質(zhì)量亦發(fā)生了變化,其生品與微炒品、炒焦品及炒炭品的組分與含量均有所不同[29];生沒藥與炒沒藥及醋沒藥的比較結(jié)果亦說明炮制后揮發(fā)油含量降低了一半,多數(shù)組分的相對(duì)含量亦相應(yīng)下降,但個(gè)別組分在炮制后被大量提出[30];而對(duì)生乳香、炒乳香、烘乳香、醋乳香及酒乳香的揮發(fā)油測定結(jié)果卻表明其揮發(fā)油含量無顯著變化,但各組分含量有一定變化,分子量大的組分含量有所下降,分子量小的組分含量有所增加[31]。因此,可利用GC/MS聯(lián)用技術(shù)考察不同炮制條件對(duì)藥材質(zhì)量或揮發(fā)油含量的影響,以確定最佳炮制條件或選擇入藥品種。通過GC/MS聯(lián)用技術(shù)考察了不同產(chǎn)地、不同引種藥材的揮發(fā)油或脂肪油含量及組分相對(duì)含量有何不同,明確藥材的價(jià)值及其不同質(zhì)量與作用。如考察了廣東、海南及云南引種的大風(fēng)子仁脂肪油的含量,并與進(jìn)口泰國大風(fēng)子仁(對(duì)照藥材)進(jìn)行了比較,結(jié)果認(rèn)為引種品的主要脂肪酸含量均與對(duì)照藥材接近,確定了引種品種的質(zhì)量及應(yīng)用價(jià)值,可替代進(jìn)口品[32];對(duì)不同產(chǎn)地的川芎中揮發(fā)油成分的研究中,結(jié)果認(rèn)為仍以有悠久歷史的灌縣川芎的質(zhì)量最優(yōu),上海及麗江引種的川芎主成分與灌縣川芎接近,而撫芎因其不含蛇床內(nèi)酯類成分被認(rèn)是川芎的栽培變種,西芎亦因異地引種的變異,其成分發(fā)生了較大變化。日本產(chǎn)和芎則因其土壤與氣候的不同,與國產(chǎn)品組分差別較大[33];從湛江、汕頭和梅州3個(gè)產(chǎn)地的高良姜揮發(fā)油各組分的鑒定結(jié)果中了解到,其揮發(fā)油的含量及化學(xué)成分均與產(chǎn)地有關(guān)。湛江及汕頭產(chǎn)的高良姜其主成分的含量高于梅州產(chǎn)品,而梅州產(chǎn)的高良姜卻含有3-蒈烯、樟腦等獨(dú)有組分[34]。通過對(duì)不同品種藥材的比較,了解其藥材的成分及含量。如對(duì)進(jìn)口天然沒藥與膠質(zhì)沒藥的揮發(fā)油含量進(jìn)行了比較,表明天然沒藥主成分為呋喃桉葉二烯(1,3),而膠質(zhì)沒藥主成分為β-反式羅勒烯[35];對(duì)假鷹爪屬植物的假鷹爪、大葉鷹爪、云南鷹爪和毛葉鷹爪中的植物油狀物通過GC/MS分析比較,認(rèn)為前3種含苯甲酸乙酯和苯甲酸苯甲酯的含量很高,而在毛葉鷹爪中含量較低[36];對(duì)新疆阿魏、阜康阿魏、多傘阿魏和園錐莖阿魏分別用水蒸汽蒸餾得揮發(fā)油成分,經(jīng)GC-MS-DS聯(lián)用儀分析,分離鑒定出51種不同成分,比較了各成分的相對(duì)含量[37];采用GC-MS-DS測定隱孔菌菌絲的揮發(fā)油成分,結(jié)果表明可以考慮將發(fā)酵培養(yǎng)的隱孔菌菌絲作為野生隱孔菌新藥源的替代品[38];分析了不同采收部位的南玉桂中揮發(fā)油的含量,結(jié)果認(rèn)為其上皮質(zhì)量優(yōu)于下皮[39]。對(duì)不同貯存期朱橘陳皮的揮發(fā)油進(jìn)行了TLC及GC/MS鑒定研究,結(jié)果表明不同貯存期的陳皮揮發(fā)油組分及其相對(duì)含量均有差異[40];不同季節(jié)開花座果的栝樓種子脂肪酸的GC/MS分析,發(fā)現(xiàn)秋果種子雖然出油率較低,但其不飽和脂肪酸含量卻最高,這一結(jié)果對(duì)棄為廢物的栝樓秋果種子的開發(fā)利用很有意義[41];研究了空間環(huán)境對(duì)藿香揮發(fā)油成分的影響,結(jié)果表明其微重力和強(qiáng)宇宙線對(duì)藿香子代的代謝產(chǎn)物無顯著影響,星載組藿香中愛草腦及薄荷酮含量有所增加,地面組胡薄荷酮的含量較高[42]。2.2在中成藥的分析中的應(yīng)用中藥成分復(fù)雜,而中成藥又多為中藥復(fù)方組成,其組分雖然較多,但每一組分的含量卻相對(duì)較低,靈敏度低的分析方法難以達(dá)到要求。應(yīng)用GC/MS聯(lián)用技術(shù)進(jìn)行中成藥的分析,是中藥分析手段現(xiàn)代化的重要體現(xiàn)和嘗試,利用GC/MS的高靈敏度與高分離效能進(jìn)行成藥的分析,是值得推廣與應(yīng)用的。如對(duì)中成藥大承氣湯的揮發(fā)油進(jìn)行了分析測定,鑒定出56種化合物,并測定了各化合物在揮發(fā)油中的相對(duì)百分含量[43];對(duì)祛感靈膠囊原生藥的易揮發(fā)性物質(zhì)進(jìn)行了分析,鑒定出其主要成分為長鏈脂肪酸類及鄰苯二甲酸酯類化合物,這些在室溫下變化不大,但受熱易分解,提示在生產(chǎn)時(shí)應(yīng)注意成分的適時(shí)收集[44];另外,亦有利用GC/MS對(duì)中成藥中當(dāng)歸、川芎的化學(xué)成分進(jìn)行分析,結(jié)果可認(rèn)為,若在質(zhì)譜圖中找到藁本內(nèi)酯可說明成藥中含有當(dāng)歸或川芎,而若質(zhì)譜中蛇床內(nèi)酯及新蛇床內(nèi)酯與藁本內(nèi)酯的比值均大于0.04及0.08,經(jīng)查證明其含有川芎,文章報(bào)道了杜仲虎骨丸、眼安寧等14種中成藥的分析結(jié)果[45]。還對(duì)含有20個(gè)組分的烏雞白鳳丸的揮發(fā)油進(jìn)行了分析,分離出61個(gè)成分,并鑒定出36種化合物[46];對(duì)中藥咳喘鼻聞安揮發(fā)性成分進(jìn)行了GC-MS聯(lián)用分析,從中分離出50個(gè)成分,初步鑒定出15種化合物,占總量的98.53%[47]。2.3在與藥效學(xué)相結(jié)合的應(yīng)用研究通過GC/MS聯(lián)用技術(shù)對(duì)雷公藤的脂肪油進(jìn)行了分析,鑒定出了12個(gè)化合物,并從中分離和鑒定出了P和P-DDT,進(jìn)而討論了雷公藤中抗炎免疫和雄性抗育成分—雷公藤氯內(nèi)酯醇的生物來源[48]。對(duì)天然產(chǎn)物無花果抗腫瘤成分檢測分析,以HPLC及GC/MS分析具有顯著抗癌療效的無花果抽提物有效部位的有效化學(xué)成分,分析結(jié)果推斷其抗癌作用與其芳環(huán)類化合物有關(guān)[49]。對(duì)芫荽子揮發(fā)油進(jìn)行了GC/MS分析,并利用Ames標(biāo)準(zhǔn)菌株TA～98加與不加S～9代謝系統(tǒng)對(duì)其揮發(fā)油進(jìn)行了體外致突變性檢測,未發(fā)現(xiàn)芫荽子揮發(fā)油有致突變性[50];用GC/MS分析了長葉榧葉揮發(fā)油成分,分離到64個(gè)峰,鑒定了54個(gè)成分,并觀察了其抗菌作用,證實(shí)其具有抑制真菌和細(xì)菌的作用[51]。研究了4種來源于植物藿香和廣藿香揮發(fā)油對(duì)16種皮膚細(xì)菌的體外抑制作用,發(fā)現(xiàn)中國廣藿香油的活性最強(qiáng),它可以完全抑制大部分皮膚細(xì)菌的生長繁殖,尤其是與人體腋臭和腳氣有關(guān)的負(fù)責(zé)菌[52]。分析了香葉樹葉精油的化學(xué)組成,測定了23種成分的結(jié)構(gòu)與相對(duì)含量[53]。鑒定了野生東北刺人參莖揮發(fā)油成分并觀察其抗皮膚癬菌活性。用GC/MS和GC/IR鑒定化學(xué)成分,采用試管內(nèi)藥基法進(jìn)行抗皮膚癬菌試驗(yàn)。結(jié)果從野生東北刺人參莖中提得3.1%的揮發(fā)油,鑒定了其中32種化合物,有25種為首次從該植物中鑒定[54]。2.4在藥物代謝動(dòng)力學(xué)的研究的應(yīng)用建立了用GC/MS同時(shí)測定血漿中冰片和川芎嗪血藥濃度的方法,冰片和川芎嗪濃度在10～300ng/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,最低檢測濃度為2ng/ml,應(yīng)用本法成功地進(jìn)行了動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和健康人含服速效救心丸后冰片的藥代動(dòng)力學(xué)研究[55];用GC-MS聯(lián)用技術(shù)對(duì)海南粗榧新堿衍生物HH07A在大鼠體內(nèi)代謝轉(zhuǎn)化進(jìn)行了研究,尿樣經(jīng)XAD-2固相提取、酶水解、濃縮并硅烷化,用GC/MS分離鑒定尿中HH07A及其4個(gè)代謝物,推斷4個(gè)代謝物結(jié)構(gòu)及其體內(nèi)代謝途徑[56];以氘標(biāo)川芎哚為內(nèi)標(biāo)及GC-MS為檢測手段,定量測定大鼠體內(nèi)川芎哚的含量及其藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù),為臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)[57];用氣相-質(zhì)譜聯(lián)用法測定大耳白兔中銀杏內(nèi)酯的血藥濃度,計(jì)算其藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù),結(jié)果表明大耳白兔靜脈注射銀杏內(nèi)酯A,B后的代謝符合二房室模型[58]。3小結(jié)與展望HPLC-MS聯(lián)用技術(shù)已在中藥化學(xué)成分分析、中藥質(zhì)量控制、中藥代謝產(chǎn)物鑒定和中藥藥物動(dòng)力學(xué)研究等方面廣泛應(yīng)用。HPLC-MS聯(lián)用技術(shù)解決了傳統(tǒng)液相檢測器靈敏度和選擇性不夠的缺點(diǎn),提供了可靠、精確的相對(duì)分子質(zhì)量及結(jié)構(gòu)信息,簡化了試驗(yàn)步驟,節(jié)省了樣品準(zhǔn)備時(shí)間和分析時(shí)間,特別是適合親水性強(qiáng)、熱不穩(wěn)定化合物及生物大分子的分離分析。GC/MS聯(lián)用技術(shù)已越來越趨于成熟,它結(jié)合了氣相色譜的高柱效、高分離性能與質(zhì)譜的定性功能,同時(shí)隨著計(jì)算機(jī)技術(shù)的飛速發(fā)展,質(zhì)譜譜庫檢索功能亦越來越強(qiáng)大與精確,對(duì)可揮發(fā)性未知成分與微量成分的結(jié)構(gòu)確定有其獨(dú)到之處。隨著國家對(duì)中藥藥品質(zhì)量越來越規(guī)范的管理與要求,對(duì)中藥指紋圖譜的鑒別要求也將全面展開,指紋圖譜工作是國際上認(rèn)可的一種控制多組分藥品的檢查方法。GC/MS聯(lián)用技術(shù)在中藥指紋圖譜的研究上也將發(fā)揮其應(yīng)有的作用,對(duì)今后中藥現(xiàn)代化研究中質(zhì)量控制的規(guī)范化與現(xiàn)代化發(fā)展有著重要意義。參考文獻(xiàn)：[1]孫毓慶.儀器分析[M].北京:科學(xué)出版社,2005[2]姜艷艷,劉斌,石任兵.高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在天然產(chǎn)物分離鑒定中的應(yīng)用[J].藥品評(píng)價(jià),2005,2(1):11-16[3]張志斐,張?zhí)m桐.高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在藥學(xué)研究中的應(yīng)用[J].河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2005,26(3):226-229[4]劉祥東,梁瓊麟,羅國安,等.液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)在醫(yī)藥領(lǐng)域中的應(yīng)用[J].藥物分析雜志,2005,25(1):110-116[5]張尊建等.密花石斛的HPLC/UV/MS指紋圖譜研究[J].中草藥,2004,35(4):393-395[6]張尊建等.忍冬、山銀花HPLC/UV/MS指紋圖譜研究[J].中成藥,2003,25(11):863-865[7]余靜等.刺五加HPLC/UV/MS指紋圖譜研究[J].中國藥科大學(xué)學(xué)報(bào),2003,34(2):148-150[8]楊秀嶺等.色譜聯(lián)用技術(shù)在中藥研究領(lǐng)域的應(yīng)用[J].中國藥房,2006,1(17):62-64。[9]馬欣等.銀杏葉提取物的多維指紋圖譜的研究[J].色譜,2003,21(6):562[10]戴德舜等.桂枝湯A部分指紋圖譜的確定及比較(一)[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2001,7(2):1[11]曹進(jìn)等.桂枝湯A部分指紋圖譜的確定及比較(二)[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2001,7(3):1[12]孫秀燕等.用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測定濱蒿中的茵陳色原酮[J].沈陽藥科大學(xué)學(xué)報(bào),2000,17(2):110-113[13]MiketobvaP,SchramKH,WhitneyJL,etal.Massspectrometryofselectedcomponentsofbiologibalinterestingreenteaextracts[J].JNatProd,1998,64(4):461-467[14]HeXG,BernartM,lianL,etal.High-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