動物病毒學試驗技術楊潤德動物病毒學試驗技術1通過病毒學的學習,我們了解到病毒沒有完整的酶系統,體內無核糖體等細胞器,因此不能在任何無生命的培養液中生長。所以要想增殖病毒必須在有生命的組織細胞內接種讓其增殖,如:動物、雞胚、細胞、器官。通過病毒學的學習,我們了解到病毒沒2實驗一、雞胚接種發育中的雞胚是病毒生長良好的環境,被廣泛用于病毒(特別是禽病毒)的分離培養和疫苗生產等。病毒在雞胚中的生長可以通過幾種方法加以測定,如:采集尿囊液、羊水、絨尿膜、雞胚作定量檢定;采集以上樣品作血凝滴定、血清學試驗等;檢査各部的病理學變化,如:雞胚死亡、矮小、出血、羽毛發育不良、內臟壞死灶、絨尿膜水腫或增厚、壞死性痘斑、出血。實驗一、雞胚接種3除雞胚外,根據病毒特點可以選用其他禽胚,如小鵝瘟病毒宜接種鵝胚,鴨瘟宜接種鴨胚等。影響病毒在雞胚中生長的因素,包括雞胚的日齡、接種途徑、接種劑量、接種濃度培養時間、培養溫度。培養溫度一般為35.5-37℃,有些病毒所需的溫度更低。但很多哺乳動物病毒不適合在雞胚中生長。除雞胚外,根據病毒特點可以選用其他4、受精卵的質量和孵化1選取SPF雞群所產的蛋;2受精卵在10℃左右保存不超過10d3最好選擇白色卵殼的受精卵;4.卵殼無污染,孵化前在0.1%的新潔爾滅中浸泡約15mn,最后用冷水沖洗,放卵架,或將卵放卵架用甲醛(1m2用13m甲醛、6.5gKMnO4熏蒸,而且在熏蒸時維持箱內溫度為37℃20min后驅散甲醛蒸汽5孵化溫度保持39-40℃,相對濕度60-65%,有風扇維持空氣流通,每天翻蛋3-4次、受精卵的質量和孵化5接種途徑根據不同病毒的嗜性,選擇適宜的接種途徑。最常用的途徑有卵黃囊、尿囊腔尿囊膜3種途徑,偶爾接種于羊膜腔、靜脈、胚體等。在分離一種未知病毒時,最好3種途經均用,如果沒有足夠的受精卵,首選絨尿膜接種途徑,因為大多數病毒都能適應。接種材料的處理:將組織置研缽磨碎加5-10倍鹽水并加入雙抗混均,20003000r/min離心20-30min。取上清待用。接種途徑6()卵黃囊卵黃是胚胎的營養物質,卵黃囊膜是由內胚層發育而來的,內層覆有一層絨毛病毒可在絨毛細胞內生長,并且可以由此擴散到胚胎的其他部位()卵黃囊7動物病毒學實驗技術課件8○尿囊腔接種尿囊是雞胚的排泄器官。腔內充滿排泄物尿囊液。液體的容量因卵的大小而異,一般6日齡雞胚時約1m,11日齡時約6m,13日齡可高達10ml,以后逐漸減少直到消失。13日齡時的尿囊液是無色透明的,14日齡后逐漸變渾濁,呈乳白色,有時淡黃色。○尿囊腔接種9接種方法1.取9-10日齡雞胚,照卵,畫出氣室,離氣室邊緣0.3-05cm用鉛筆作一記號;2.在氣室做記號處用碘酊消毒,打孔;3用注射器取毒液自接種孔斜刺入約1cm,注入毒液0.1-0.2ml;4.封孔繼續孵化,定時照蛋。接種方法10動物病毒學實驗技術課件11動物病毒學實驗技術課件12動物病毒學實驗技術課件13動物病毒學實驗技術課件14動物病毒學實驗技術課件15動物病毒學實驗技術課件16動物病毒學實驗技術課件17動物病毒學實驗技術課件18動物病毒學實驗技術課件19動物病毒學實驗技術課件20動物病毒學實驗技術課件21動物病毒學實驗技術課件22動物病毒學實驗技術課件23動物病毒學實驗技術課件24動物病毒學實驗技術課件25動物病毒學實驗技術課件26動物病毒學實驗技術課件27動物病毒學實驗技術課件28動物病毒學實驗技術課件29動物病毒學實驗技術課件30動物病毒學實驗技術課件31動物病毒學實驗技術課件32動物病毒學實驗技術課件33動物病毒學實驗技術課件34動物病毒學實驗技術課件35動物病毒學實驗技術課件36動物病毒學實驗技術課件37動物病毒學實驗技術課件38動物病毒學實驗技術課件39動物病毒學實驗技術課件40動物病毒學實驗技術課件41動物病毒學實驗技術課件42動物病毒學實驗技術課件43動物病毒學實驗技術課件44動物病毒學實驗技術課件45動物病毒學實驗技術課件46動物病毒學實驗技術課件47動物病毒學實驗技術課件48動物病毒學實驗技術課件49動物病毒學實驗技術課件50動物病毒學實驗技術課件51動物病毒學實驗技術課件52動物病毒學實驗技術課件53動物病毒學實驗技術課件54動物病毒學實驗技術課件55動物病毒學實驗技術課件56動物病毒學實驗技術課件57動物病毒學實驗技術課件58動物病毒學實驗技術課件59動物病毒學實驗技術課件60動物病毒學實驗技術課件61動物病毒學實驗技術課件62動物病毒學實驗技術課件63動物病毒學實驗技術課件64動物病毒學實驗技術課件65動物病毒學實驗技術課件66動物病毒學實驗技術課件67動物病毒學實驗技術課件68動物病毒學實驗技術課件69動物病毒學實驗技術課件70動物病毒學試驗技術楊潤德動物病毒學試驗技術71通過病毒學的學習,我們了解到病毒沒有完整的酶系統,體內無核糖體等細胞器,因此不能在任何無生命的培養液中生長。所以要想增殖病毒必須在有生命的組織細胞內接種讓其增殖,如:動物、雞胚、細胞、器官。通過病毒學的學習,我們了解到病毒沒72實驗一、雞胚接種發育中的雞胚是病毒生長良好的環境,被廣泛用于病毒(特別是禽病毒)的分離培養和疫苗生產等。病毒在雞胚中的生長可以通過幾種方法加以測定,如:采集尿囊液、羊水、絨尿膜、雞胚作定量檢定;采集以上樣品作血凝滴定、血清學試驗等;檢査各部的病理學變化,如:雞胚死亡、矮小、出血、羽毛發育不良、內臟壞死灶、絨尿膜水腫或增厚、壞死性痘斑、出血。實驗一、雞胚接種73除雞胚外,根據病毒特點可以選用其他禽胚,如小鵝瘟病毒宜接種鵝胚,鴨瘟宜接種鴨胚等。影響病毒在雞胚中生長的因素,包括雞胚的日齡、接種途徑、接種劑量、接種濃度培養時間、培養溫度。培養溫度一般為35.5-37℃,有些病毒所需的溫度更低。但很多哺乳動物病毒不適合在雞胚中生長。除雞胚外,根據病毒特點可以選用其他74、受精卵的質量和孵化1選取SPF雞群所產的蛋;2受精卵在10℃左右保存不超過10d3最好選擇白色卵殼的受精卵;4.卵殼無污染,孵化前在0.1%的新潔爾滅中浸泡約15mn,最后用冷水沖洗,放卵架,或將卵放卵架用甲醛(1m2用13m甲醛、6.5gKMnO4熏蒸,而且在熏蒸時維持箱內溫度為37℃20min后驅散甲醛蒸汽5孵化溫度保持39-40℃,相對濕度60-65%,有風扇維持空氣流通,每天翻蛋3-4次、受精卵的質量和孵化75接種途徑根據不同病毒的嗜性,選擇適宜的接種途徑。最常用的途徑有卵黃囊、尿囊腔尿囊膜3種途徑,偶爾接種于羊膜腔、靜脈、胚體等。在分離一種未知病毒時,最好3種途經均用,如果沒有足夠的受精卵,首選絨尿膜接種途徑,因為大多數病毒都能適應。接種材料的處理:將組織置研缽磨碎加5-10倍鹽水并加入雙抗混均,20003000r/min離心20-30min。取上清待用。接種途徑76()卵黃囊卵黃是胚胎的營養物質,卵黃囊膜是由內胚層發育而來的,內層覆有一層絨毛病毒可在絨毛細胞內生長,并且可以由此擴散到胚胎的其他部位()卵黃囊77動物病毒學實驗技術課件78○尿囊腔接種尿囊是雞胚的排泄器官。腔內充滿排泄物尿囊液。液體的容量因卵的大小而異,一般6日齡雞胚時約1m,11日齡時約6m,13日齡可高達10ml,以后逐漸減少直到消失。13日齡時的尿囊液是無色透明的,14日齡后逐漸變渾濁,呈乳白色,有時淡黃色。○尿囊腔接種79接種方法1.取9-10日齡雞胚,照卵,畫出氣室,離氣室邊緣0.3-05cm用鉛筆作一記號;2.在氣室做記號處用碘酊消毒,打孔;3用注射器取毒液自接種孔斜刺入約1cm,注入毒液0.1-0.2ml;4.封孔繼續孵化,定時照蛋。接種方法80動物病毒學實驗技術課件81動物病毒學實驗技術課件82動物病毒學實驗技術課件83動物病毒學實驗技術課件84動物病毒學實驗技術課件85動物病毒學實驗技術課件86動物病毒學實驗技術課件87動物病毒學實驗技術課件88動物病毒學實驗技術課件89動物病毒學實驗技術課件90動物病毒學實驗技術課件91動物病毒學實驗技術課件92動物病毒學實驗技術課件93動物病毒學實驗技術課件94動物病毒學實驗技術課件95動物病毒學實驗技術課件96動物病毒學實驗技術課件97動物病毒學實驗技術課件98動物病毒學實驗技術課件99動物病毒學實驗技術課件100動物病毒學實驗技術課件101動物病毒學實驗技術課件102動物病毒學實驗技術課件103動物病毒學實驗技術課件104動物病毒學實驗技術課件105動物病毒學實驗技術課件106動物病毒學實驗技術課件107動物病毒學實驗技術課件108動物病毒學實驗技術課件109動物病毒學實驗技術課件110動物病毒學實驗技術課件111動物病毒學實驗技術課件112動物病毒學實驗技術課件113動物病毒學實驗技術課件114動物病毒學實驗技術課件115動物病毒學實驗技術課件116動物病毒學實驗技術課件117動物病毒學實驗技術課件118動物病毒學實驗技術課件119動物病毒學實驗技術課件120動物病毒學實驗技術課件121動物病毒學實驗技術課件122動物病毒學實驗技術課件123動物病毒學實驗技術課件124動物病毒學實驗技術課件125動物病毒學實驗技術課件126動物病毒