電話：400-998-2324郵箱：service_uplc_ms@163.com網址：本產品僅供科學研究使用！請勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測等用途！-上海液質檢測技術有限公司第第頁植物中酰脲含量檢測試劑盒說明書貨號：UPLC-MS-4284規格：50T/24S

可見分光光度法產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系工作人員。試劑名稱規格保存條件提取液A液液體30mL×1瓶（自備）常溫保存提取液B液液體30mL×1瓶4℃保存試劑一液體4mL×1瓶4℃保存試劑二液體4mL×1瓶4℃保存試劑三液體4mL×1瓶4℃保存試劑四液體10mL×1瓶4℃保存試劑五粉劑×2瓶-20℃保存試劑六液體50mL×1瓶（自備）常溫保存試劑七液體10mL×1瓶4℃保存標準品粉劑×1支4℃保存溶液的配制：1、提取液A液：自備無水乙醇；2、試劑五：臨用前取1瓶加入5mL蒸餾水溶解備用，可分裝后-20℃保存，-20℃保存一周；3、試劑六：自備濃鹽酸；4、標準品：10mg尿囊素。臨用前加入632.5μL蒸餾水配制成100μmol/mL酰脲標準液。產品說明：選育高固氮活性豆科植物品種是提高豆科植物固氮能力的一個有效途徑。豆科植物根瘤菌固氮的最初輸出產物主要是酰脲（尿囊素和尿囊酸）。酰脲是豆科植物一根瘤菌共生固氮中的氮代謝產物，是氮素貯藏和運輸的主要形式，在豆科植物氮代謝中起著重要作用。可通過測定豆科植物組織中酰脲的含量，從而評估其固氮能力。尿囊素在過酸或堿條件下水解產生乙醛酸，然后在苯肼和強酸條件下可被氧化，生成紅色絡合物，在535nm處有特殊吸收峰，據此可由吸光值計算出樣本中酰脲的含量。注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。需自備的儀器和用品：/1mL30~50EP管。操作步驟：一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）65℃30~50目篩。按質量（g）︰提取液體積（mL）1︰10~20比例（0.1g1.0mLA1.0mLB，禁止將提取液A與提取液B混勻待用），80℃5min3500rpm15棄沉淀，取上清液置于冰上待測。二、測定步驟1、分光光度計預熱30min以上，調節波長至535nm，蒸餾水調零。2、將試劑六與試劑七置于冰水浴中預冷30min以上，并置于冰上待用。3100μmol/mL251.56250.78125nmol/mL的標準溶液備用。4、操作表：（在1.5mLEP管中操作）對照管尿囊酸測定管酰脲測定管標準管空白管樣本（μL）400400400--標準溶液（μL）400-蒸餾水（μL）400試劑一（μL）50-505050試劑三（μL）-100充分混勻，沸水浴7min，冷卻至室溫。試劑二（μL）50-505050-充分混勻，100℃水浴加熱6min，冷卻至室溫試劑四（μL）100100100100100試劑五（μL）100100100100100充分混勻，室溫下靜置6min，然后轉移至冰水浴中，冷卻至4℃試劑六（μL）500500500500500試劑七（μL）100100100100100充分混勻，室溫下靜置15min1mL1mL535nmAA對照管、A尿囊酸測定管、AAAΔA尿囊酸=A尿囊酸測定管-A酰脲=A酰脲測定管-A對照管，ΔA標準A標準管-A空白管。注意：對照管不進行水浴加熱處理；尿囊酸測定管只需進行第二次的沸水浴；測定管、標準管及空白管在沸水浴加熱時，EP管蓋緊并用封口膜密封，避免液體蒸發影響試驗數據。三、植物中酰脲含量的計算1、標準曲線的繪制：xΔAyy=ΔA尿ΔAx1（nmol/mL）x2（nmol/mL）。2、豆科植物中酰脲含量的計算：尿囊酸含量（nmol/g質量）=x1×V提取÷W=2×x1÷W酰脲含量（nmol/g質量）=x2×V提取÷W=2×x2÷WV提取：加入提取液體積，2.0mL；W：樣本質量，g。注意事項：1、