傳代培養(yǎng)細胞的染色體標本的制備課件_第1頁
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文檔簡介

傳代培養(yǎng)細胞染色體

標本的制備

原理在細胞的生長周期中，中期染色體的長短、大小、恒定性正適合對其進行分析、研究。因此利用人工的方法，使細胞分裂處于中期而不向后期轉(zhuǎn)化，并收獲細胞，經(jīng)處理，制片后觀察分析。器材與試劑

培養(yǎng)箱、普通光學顯微鏡、離心機、水浴箱、天平等。試管架、刻度離心管、滴管和滴頭、酒精燈、冰載玻片等。乙酸

優(yōu)點：乙酸具有很強的穿透性能，甚至比乙醇的穿透性要高。能使核酸沉淀，阻止染色體收縮，使染色體結(jié)構(gòu)免于破壞。經(jīng)乙酸固定的物質(zhì)，還能抵消甲醇的硬化作用。

缺點：不能固定細胞質(zhì)蛋白，并導致染色體片段的過分膨脹，故如要形成染色體的詳細結(jié)構(gòu)，必須把它與甲醇或類似的化學物質(zhì)一道使用，后者能使組織收縮和硬化。甲醇

作用：迅速穿透組織，沉淀蛋白質(zhì)，具有脫水性。蛋白質(zhì)的不可逆轉(zhuǎn)的變性，使組織硬化、脫水，固縮作用能迅速進入細胞。操作1、細胞培養(yǎng)2、秋水仙素處理：加秋水仙素20ul（5微克/毫升），混勻，37℃，4h。3、收集細胞：胰酶消化細胞（方法同細胞傳代---胰酶處理前用PBS洗一次），用培養(yǎng)液將細胞收集到離心管中，1500r/min離心，10min。5、低滲處理：棄上清，加8ml（視細胞量多少而定）0.075MKCl溶液，充分混勻（注意吹打不要過猛），置37℃水浴20min。（KCl：使細胞和核膨脹，染色體松軟，迅速分散。0.075MKCl：染色體輪廓清晰，可染性強，染色時間短，充分顯示帶型）

操作6、預(yù)固定：低滲處理后，加0.5-1ml固定液輕輕混勻，1500r/min離心，10min。（預(yù)固定可以固定染色體結(jié)構(gòu)，并使細胞慢慢脫水，防止細胞離心破裂）。

7、固定：棄上清，加8ml（視細胞量多少而定）固定液，充分混勻，室溫靜置15min，1500r/min離心，10min。8、制備細胞懸液：棄上清，視細胞數(shù)量多少加適量固定液制成細胞懸液。9、制片：取細胞懸液2-3滴，滴于冰玻片上，并迅速吹片，酒精燈火焰烤干。10、

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