第11章

補體和循環(huán)免疫復(fù)合物的檢測

第11章

補體和循環(huán)免疫復(fù)合物的檢測

1補體（C）：是一組存在于人和動物血清與組織液中的具有酶活性的不耐熱的糖蛋白。補體（C）：2補體性質(zhì)不穩(wěn)定0~10℃條件下活性只能保持3~4d56℃、30min滅活

多種理化因素（射線、機械振蕩、酒精）均可破壞補體所以：補體活性檢測要快，保存在－20℃補體性質(zhì)不穩(wěn)定3第一節(jié)補體活性和組分的檢測第一節(jié)補體活性和組分的檢測4一、血清補體總活性測定（CH50試驗）原理：在溶血反應(yīng)中，當(dāng)紅細(xì)胞和溶血素定量時，在規(guī)定的反應(yīng)時間內(nèi)，溶血程度與補體的活性呈正相關(guān)。（但非直線關(guān)系）Ag激活補體溶血紅細(xì)胞溶血素一、血清補體總活性測定（CH50試驗）原理：Ag激活補體溶血5應(yīng)用：正常值：50-100U/ml

增高：急性炎癥、組織損傷、惡性腫瘤等降低：嚴(yán)重肝病、某些自身免疫性疾病（如腎小球腎炎、SLE等)以引起50%溶血所需要的最小補體量為1U溶血率7050300（%）血清補體應(yīng)用：正常值：50-100U/ml以引起50%溶血所需溶血率650％溶血標(biāo)準(zhǔn)管2%綿羊紅細(xì)胞懸液0.5mlH2O2.0ml1.8%NaCl溶液2.0ml2%SRBC懸液0.5ml50％溶血標(biāo)準(zhǔn)管2%綿羊紅細(xì)胞懸液0.5ml7CH50測定方法試管號1：20稀釋血清緩沖液2U溶血素2%SRBE0.101.400.50.50.151.350.50.50.201.300.50.50.251.250.50.5

0.301.200.50.50.351.150.50.50.401.100.50.50.451.050.50.50.501.000.50.50.001.500.50.5選擇溶血程度與50%溶血標(biāo)準(zhǔn)管最為接近的兩管，測定OD值，以O(shè)D值最接近標(biāo)準(zhǔn)管的定為最高有效反應(yīng)管。CH50測定方法試管號1：20稀釋血清850％溶血的總補體值CH50（U/ml）＝1/血清用量×稀釋倍數(shù)1u

0.3ml×20總補體活性參考范圍：50~100U/ml50％溶血的總補體值CH50（U/ml）＝1u9CH50試驗方法評價1、測定的是補體9種成分的綜合水平2、方法簡便、快速，但敏感性較低3、影響因素多CH50試驗方法評價1、測定的是補體9種成分的綜合水平10(一)

免疫溶血法C4活性測定：去C4血清+致敏紅細(xì)胞——不溶血+

待測血清——溶血溶血程度與待測血清中的C4活性成正相關(guān)二、補體成分測定(一)免疫溶血法C4活性測定：去C4血清+致敏紅細(xì)胞——不11C3含量檢測1、方法：單擴法

免疫比濁法2、應(yīng)用：正常值(二)

免疫化學(xué)法C3含量檢測1、方法：單擴法(二)免疫化學(xué)法12第二節(jié)

補體結(jié)合實驗（CFT)第二節(jié)補體結(jié)合實驗（CFT)13補體結(jié)合試驗CFTcomplementfixationtest原理：用已知的指示系統(tǒng)檢測試驗系統(tǒng)是否結(jié)合補體。試驗系統(tǒng)：待測樣品和已知抗原（或抗體）指示系統(tǒng)：SRBC和溶血素溶血—陰性；不溶血—陽性補體補體結(jié)合試驗原理：用已知的指示系統(tǒng)檢測試驗系統(tǒng)是否結(jié)合補體。14補體參與的抗原抗體反應(yīng)補體參與的抗原抗體反應(yīng)15方法評價①靈敏度高。比沉淀反應(yīng)和凝集反應(yīng)的靈敏度高得多，能測定0.05μg/ml的抗體。②特異性強。各種成分都事先滴定，選擇最佳比例，出現(xiàn)交叉反應(yīng)的機率小。③易于普及，試驗結(jié)果顯而易見；④試驗條件要求低，不需要特殊儀器或只用分光光度計。方法評價①靈敏度高。比沉淀反應(yīng)和凝集反應(yīng)的靈敏度高得多，能測16方法評價但參與反應(yīng)的成分多，影響因素復(fù)雜，操作步驟繁鎖，所以常常被其他方法所取代。但對于免疫學(xué)技術(shù)的基本訓(xùn)練仍是一個很好的試驗。方法評價但參與反應(yīng)的成分多，影響因素復(fù)雜，操作步驟繁鎖，所以17第三節(jié)循環(huán)免疫復(fù)合物的檢測第三節(jié)循環(huán)免疫復(fù)合物的檢測18概述

免疫復(fù)合物是機體內(nèi)抗原抗體形成的抗原抗體復(fù)合物，沉積在血管壁、皮膚、臟器的免疫復(fù)合物稱為局部免疫復(fù)合物，隨血液循環(huán)的稱為循環(huán)免疫復(fù)合物。局部免疫復(fù)合物用免疫組化法檢測，而循環(huán)免疫復(fù)合物檢測技術(shù)分為抗原特異性檢測技術(shù)和非抗原特異性檢測技術(shù)兩類。概述免疫復(fù)合物是機體內(nèi)抗原抗體形成的抗原抗體復(fù)合19一、PEG（聚乙二醇）沉降法：1、

原理：低濃度的PEG能選擇性地沉淀IC，一般PEG的最終濃度選擇3.5％，PEG＞5％將失去對IC的選擇性。2、

方法：PEG（7％）+等量待檢血清→4℃16-18小時后離心沉淀→NaOH溶解→280nm測定A值，A＞0.21判為陽性。3、

評價：簡單方便，既可檢測又可以用于分離；但特異性差，血清中的大分子蛋白質(zhì)易造成假陽性。一、PEG（聚乙二醇）沉降法：1、

原理：低濃度的PEG能20C1q固相法1、

原理；固相C1q+待測血清（IC）+酶標(biāo)抗人IgG+底物——根據(jù)顏色深淺判斷IC含量2、

評價：敏感度較高重復(fù)性好結(jié)果穩(wěn)定性易受影響二、ELISA測定循環(huán)免疫復(fù)合物

：C1q固相法二、ELISA測定循環(huán)免疫復(fù)合物：21免疫復(fù)合物檢測的臨床意義1、

可作為評價疾病的活動情況及其對治療的反應(yīng)性、惡化預(yù)兆和疾病分期的指標(biāo)。2、

可幫助診斷某些疾病。3、

可協(xié)助研究疾病的發(fā)病機理。免疫復(fù)合物檢測的臨床意義1、

可作為評價疾病的活動情況及其22思考題簡答題：1、CFT的原理2、CH50的原理思考題簡答題：23第11章

補體和循環(huán)免疫復(fù)合物的檢測

第11章

補體和循環(huán)免疫復(fù)合物的檢測

24補體（C）：是一組存在于人和動物血清與組織液中的具有酶活性的不耐熱的糖蛋白。補體（C）：25補體性質(zhì)不穩(wěn)定0~10℃條件下活性只能保持3~4d56℃、30min滅活

多種理化因素（射線、機械振蕩、酒精）均可破壞補體所以：補體活性檢測要快，保存在－20℃補體性質(zhì)不穩(wěn)定26第一節(jié)補體活性和組分的檢測第一節(jié)補體活性和組分的檢測27一、血清補體總活性測定（CH50試驗）原理：在溶血反應(yīng)中，當(dāng)紅細(xì)胞和溶血素定量時，在規(guī)定的反應(yīng)時間內(nèi)，溶血程度與補體的活性呈正相關(guān)。（但非直線關(guān)系）Ag激活補體溶血紅細(xì)胞溶血素一、血清補體總活性測定（CH50試驗）原理：Ag激活補體溶血28應(yīng)用：正常值：50-100U/ml

增高：急性炎癥、組織損傷、惡性腫瘤等降低：嚴(yán)重肝病、某些自身免疫性疾病（如腎小球腎炎、SLE等)以引起50%溶血所需要的最小補體量為1U溶血率7050300（%）血清補體應(yīng)用：正常值：50-100U/ml以引起50%溶血所需溶血率2950％溶血標(biāo)準(zhǔn)管2%綿羊紅細(xì)胞懸液0.5mlH2O2.0ml1.8%NaCl溶液2.0ml2%SRBC懸液0.5ml50％溶血標(biāo)準(zhǔn)管2%綿羊紅細(xì)胞懸液0.5ml30CH50測定方法試管號1：20稀釋血清緩沖液2U溶血素2%SRBE0.101.400.50.50.151.350.50.50.201.300.50.50.251.250.50.5

0.301.200.50.50.351.150.50.50.401.100.50.50.451.050.50.50.501.000.50.50.001.500.50.5選擇溶血程度與50%溶血標(biāo)準(zhǔn)管最為接近的兩管，測定OD值，以O(shè)D值最接近標(biāo)準(zhǔn)管的定為最高有效反應(yīng)管。CH50測定方法試管號1：20稀釋血清3150％溶血的總補體值CH50（U/ml）＝1/血清用量×稀釋倍數(shù)1u

0.3ml×20總補體活性參考范圍：50~100U/ml50％溶血的總補體值CH50（U/ml）＝1u32CH50試驗方法評價1、測定的是補體9種成分的綜合水平2、方法簡便、快速，但敏感性較低3、影響因素多CH50試驗方法評價1、測定的是補體9種成分的綜合水平33(一)

免疫溶血法C4活性測定：去C4血清+致敏紅細(xì)胞——不溶血+

待測血清——溶血溶血程度與待測血清中的C4活性成正相關(guān)二、補體成分測定(一)免疫溶血法C4活性測定：去C4血清+致敏紅細(xì)胞——不34C3含量檢測1、方法：單擴法

免疫比濁法2、應(yīng)用：正常值(二)

免疫化學(xué)法C3含量檢測1、方法：單擴法(二)免疫化學(xué)法35第二節(jié)

補體結(jié)合實驗（CFT)第二節(jié)補體結(jié)合實驗（CFT)36補體結(jié)合試驗CFTcomplementfixationtest原理：用已知的指示系統(tǒng)檢測試驗系統(tǒng)是否結(jié)合補體。試驗系統(tǒng)：待測樣品和已知抗原（或抗體）指示系統(tǒng)：SRBC和溶血素溶血—陰性；不溶血—陽性補體補體結(jié)合試驗原理：用已知的指示系統(tǒng)檢測試驗系統(tǒng)是否結(jié)合補體。37補體參與的抗原抗體反應(yīng)補體參與的抗原抗體反應(yīng)38方法評價①靈敏度高。比沉淀反應(yīng)和凝集反應(yīng)的靈敏度高得多，能測定0.05μg/ml的抗體。②特異性強。各種成分都事先滴定，選擇最佳比例，出現(xiàn)交叉反應(yīng)的機率小。③易于普及，試驗結(jié)果顯而易見；④試驗條件要求低，不需要特殊儀器或只用分光光度計。方法評價①靈敏度高。比沉淀反應(yīng)和凝集反應(yīng)的靈敏度高得多，能測39方法評價但參與反應(yīng)的成分多，影響因素復(fù)雜，操作步驟繁鎖，所以常常被其他方法所取代。但對于免疫學(xué)技術(shù)的基本訓(xùn)練仍是一個很好的試驗。方法評價但參與反應(yīng)的成分多，影響因素復(fù)雜，操作步驟繁鎖，所以40第三節(jié)循環(huán)免疫復(fù)合物的檢測第三節(jié)循環(huán)免疫復(fù)合物的檢測41概述

免疫復(fù)合物是機體內(nèi)抗原抗體形成的抗原抗體復(fù)合物，沉積在血管壁、皮膚、臟器的免疫復(fù)合物稱為局部免疫復(fù)合物，隨血液循環(huán)的稱為循環(huán)免疫復(fù)合物。