關于生物制藥分離純化設計第1頁，共31頁，2022年，5月20日，8點51分，星期五文獻綜述目標物研究進展生物藥物制備方案設計線路簡介研究目的材料選擇細胞破碎建立分析方法預備實驗固液分離濃縮色譜分離脫鹽凍干產品分析沉降離心過濾機械法、物理法化學法、生物法沉淀、吸附、超濾離心濃縮吸附色譜離子交換色譜凝膠色譜親和色譜疏水色譜逆流色譜提取溶劑萃取水相萃取溶解性能溶液穩定性固體穩定性物理性質化學性質生物活性、酶活力、比活組成和純度分析分子量、pI其它理化性質分析透析、凝膠過濾冷凍干燥第2頁，共31頁，2022年，5月20日，8點51分，星期五

一、原材料選擇的原則：

原料有效成分含量高、來源豐富、產地較近、雜質含量少、成本低。

生物藥物提取、分離、純化技術基礎第3頁，共31頁，2022年，5月20日，8點51分，星期五

生物材料的選擇：

1．生物活性物質存在部位：胞內、胞外、胞漿、質膜、器膜、周質

2．生物材料的采集與質控（1）品種鑒定；（2）防止污染與感染；（3）選擇富集目的物材料；（4）冷凍保存

第4頁，共31頁，2022年，5月20日，8點51分，星期五第5頁，共31頁，2022年，5月20日，8點51分，星期五第6頁，共31頁，2022年，5月20日，8點51分，星期五第7頁，共31頁，2022年，5月20日，8點51分，星期五第8頁，共31頁，2022年，5月20日，8點51分，星期五第9頁，共31頁，2022年，5月20日，8點51分，星期五

二、生物藥物常用的提取方法與優化

（一）幾種常用提取方法

1．酸、堿、鹽水溶液提取方法

2．表面活性劑提取方法與反膠束提取方法

3．有機溶劑提取

4.雙水相萃取法

5．超臨界萃取法

第10頁，共31頁，2022年，5月20日，8點51分，星期五（二）提取方法優化

1.溶劑選擇

2.選擇添加劑①保護劑；②酶抑制劑

3.提取條件①溫度；②pH；③鹽；④表面活性劑第11頁，共31頁，2022年，5月20日，8點51分，星期五三．濃縮與干燥

1.濃縮方法：①鹽析；②有機溶劑沉淀；③高分子脫水④超濾；⑤真空濃縮或薄膜濃縮；

第12頁，共31頁，2022年，5月20日，8點51分，星期五2.干燥：

①低溫真空干燥；

②噴霧干燥；

③冷凍干燥

第13頁，共31頁，2022年，5月20日，8點51分，星期五四、分離純化1.生化制藥工藝中分離純化特點:

(1)生物材料組成復雜

(2)目的物含量低

(3)易變性、失活

(4)分離方法有很大經驗成分

(5)步驟多，逐級分離

(6)產品驗證與化學上純度概念不完全相同第14頁，共31頁，2022年，5月20日，8點51分，星期五2.分離純化原理

(1)根據分子形狀與分子大小

(2)根據電荷差異

(3)根據分子極性與溶解度大小

(4)根據吸附特性

(5)根據生物配基特性第15頁，共31頁，2022年，5月20日，8點51分，星期五3.分離純化方法選擇原則（1）粗品分離：大處理量,相對低分辨率鹽析，分級沉淀，萃取，超濾（2）精制：高分辨率多種色譜層析法,親和層析，HPLC，FPLC，電泳或等電聚焦第16頁，共31頁，2022年，5月20日，8點51分，星期五4、在分離純化的設計中需要考慮的因素：抑制宿主細胞或分泌產物中相應的酶活性，防止其消化降解待提純產物。使目標產物成分有較高的純度，降低對人體有害的非目標成分的含量。保證生物藥物的安全、有效。注意每個生產環節的時效性，對每一步驟的質量進行監控。盡可能優化分離純化工藝，減少分離步驟，降低生產成本。第17頁，共31頁，2022年，5月20日，8點51分，星期五第二部分

天然產物的提取分離鑒定第18頁，共31頁，2022年，5月20日，8點51分，星期五

水親水性有機溶劑親脂性有機溶劑一、提取方法超臨界流體萃取法（SFE）水蒸氣蒸餾法溶劑提取法升華法壓榨法溶劑第19頁，共31頁，2022年，5月20日，8點51分，星期五溶劑提取的方法連續回流提取法回流提取法煎煮法（煎中藥）滲漉法浸漬法（泡藥酒）第20頁，共31頁，2022年，5月20日，8點51分，星期五

影響溶劑提取法的因素（1）生物材料的粉碎度材料細，面積大，擴散快，效果好。但是太細，吸附作用大，易糊化，擴散慢，同時植物細胞也會遭受破壞，大量蛋白質、淀粉被提出，產生沉淀或膠束狀，影響提取?；ā⑷~可適當粗些，皮、莖、根宜細些。第21頁，共31頁，2022年，5月20日，8點51分，星期五

（2）提取溫度一般使用常溫，在不破壞有效成分的條件下加熱不要超過80?C。溫度低提取時的雜質少，溫度高時提取效率高；但含淀粉、粘液質較多的材料，水提時避免熱提。第22頁，共31頁，2022年，5月20日，8點51分，星期五

（3）提取時間以提完為準，是否完全可以提取也做定性實驗，或薄層層析檢測，或以液體顏色判斷。根據檢測結果確定是否需要延長提取時間。第23頁，共31頁，2022年，5月20日，8點51分，星期五

（4）濃度差根據擴散原理，造成提取液的濃度差可以提高提取的效率。可采取的措施有：攪拌、更換溶劑。第24頁，共31頁，2022年，5月20日，8點51分，星期五

（5）新技術的使用超聲波、微波促提技術的應用，可以加快提取速度，提高提取效率。第25頁，共31頁，2022年，5月20日，8點51分，星期五二、天然產物的分離與精制方法溶劑萃取法色譜法：紙色譜、柱色譜、薄層色譜沉淀法：乙醇沉淀法、酸堿沉淀法、鉛鹽沉淀法鹽析法透析法結晶、重結晶和分步結晶第26頁，共31頁，2022年，5月20日，8點51分，星期五螺旋藻多糖提取第27頁，共31頁，2022年，5月20日，8點51分，星期五三、天然產物的鑒定鑒定天然產物所需做的工作1、元素分析由哪些元素組成，各占多少。2、物理常數熔、沸點3、比旋光度4、分子量、凝膠過濾法、光散射法、粘度測定法5、結構測定法：紅外光譜、核磁共振（13C譜、1H譜和二維譜）第28頁，共31頁，2022年，5月20日，8點51分，星期五鑒定常用方法化學方法儀器方法1、紫外光譜：用于是否含有共軛體系的鑒定2、紅外光譜：測定分子中存在的官能團種類3、質譜：確定分子量4、氫核磁共振譜：確定氫的個數及相互關系5、旋光光譜：具有旋光性的天然產物，測定其構型和構象6、元素分析：測定C、H、N、S元素含量。7、核磁共振譜：確定分子骨架。第29頁，共31頁，2022年，5月20日，8點51分，星期五

酚UV280nm，IR1500~1600、3300cm-1，溶于NaOH黃酮

黃色或淡黃結晶，UV240~285nm及300~400nm各一峰，IR在1500~1700cm-1有吸收。皂甙1H譜在高場有山峰