1、第一節 細菌感染的實驗室診斷第二節 細菌感染的特異性防治第三節 細菌感染的抗菌藥物治療原則第一節 細菌感染的實驗室診斷第二節 細菌感染的特異性防治重點難點熟悉了解掌握1. 細菌感染的實驗診斷方法的原理與應用2. 疫苗的種類1. 細菌感染的實驗室檢驗流程2. 常用疫苗的特點 細菌感染的抗菌藥物治療原則醫學微生物學（第9版）重點難點熟悉了解掌握1. 細菌感染的實驗診斷方法的原理與應用細菌感染的實驗室診斷laboratory diagnosis of bacterial infection第一節細菌感染的實驗室診斷第一節含菌標本可疑細菌感染血液（雙份）形態學檢查細菌分離培養與鑒定細菌成分檢測特異性抗

2、體檢測免疫學技術分子生物學技術質譜分析法生物芯片技術細菌培養生物化學檢查血清學鑒定藥物敏感試驗動物（毒力）試驗等凝集試驗免疫熒光試驗酶聯免疫吸附試驗免疫印跡試驗等核酸雜交聚合酶鏈反應高通量測序技術等基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜（MALDI-TOF MS）固態芯片、液態芯片蛋白質芯片、基因芯片等凝集試驗補體結合試驗中和試驗免疫熒光試驗酶聯免疫吸附試驗等細菌感染的實驗室檢測方法含菌標本可疑細菌感染血液（雙份）形態學檢查細菌分離培養與鑒定醫學微生物學（第9版）一、臨床標本的采集與運送原則早期采集無菌操作 選感染部位最佳時間采集雙份血清 標本采集 做好標記置于密閉容器內盡快送檢標本運送 醫學微生物

3、學（第9版）一、臨床標本的采集與運送原則早期采集標醫學微生物學（第9版） 二、細菌的形態學檢查暗視野顯微鏡相差顯微鏡主要用于檢查在生活狀態下細菌的動力及其運動情況不染色標本醫學微生物學（第9版） 二、細菌的形態學檢查暗視野相差主要用 二、細菌的形態學檢查細菌的染色革蘭染色抗酸染色熒光金胺O染色其他特殊染色醫學微生物學（第9版） 二、細菌的形態學檢查細菌的染色革蘭抗酸熒光金胺O染色其他醫葡萄球菌（革蘭染色陽性）大腸埃希菌（革蘭染色陰性）醫學微生物學（第9版）革蘭染色結果（張力平提供） 葡萄球菌（革蘭染色陽性）大腸埃希菌（革蘭染色陰性）醫學微生物細菌檢查的一般程序 三、細菌的分離培養與鑒定標本膿/

4、痰/尿等血液/腦脊液涂片、染色、鏡檢分離培養純培養染色鏡檢生化反應血清學鑒定藥敏試驗增菌醫學微生物學（第9版）細菌檢查的一般程序 三、細菌的分離培養與鑒定標本膿/痰/尿等1.細菌的分離培養：是微生物學診斷的金標準，是最可靠的傳統診斷技術（1）培養基的營養成分（2）酸堿度（pH）（3）培養時間（4）溫度（5）氣體環境 三、細菌的分離培養與鑒定在血平板上的肺炎鏈球菌菌落（張力平提供）醫學微生物學（第9版）血平板上的完全溶血環 【引用資源ID 678481】1.細菌的分離培養：是微生物學診斷的金標準，是最可靠的傳統診 細菌對糖類和蛋白質的分解產物不完全一樣，故有關酶類和代謝產物可作為鑒別細菌的重要依

5、據之一2.生化試驗三、細菌的分離培養與鑒定腸道感染細菌在含鐵雙糖培養基上的生化反應（張力平提供）醫學微生物學（第9版） 細菌對糖類和蛋白質的分解產物不完全一樣，故有關酶3.血清學鑒定 三、細菌的分離培養與鑒定（1）利用已知的特異性抗體檢查未知的純培養細菌（2）對細菌進行種、群、型的鑒定 沙門菌血清學鑒定（倪語星 尚紅 臨床微生物檢驗第5版 PPT）醫學微生物學（第9版）3.血清學鑒定三、細菌的分離培養與鑒定（1）利用已知的特異性4.藥物敏感試驗（antimicrobial susceptibility test）最低抑菌濃度（minimum inhibitory concentration,

6、MIC）能夠完全抑制培養基中細菌生長的最低藥物濃度最低殺菌濃度（minimum bactericidal concentration, MBC）能夠殺死培養基中細菌的最低藥物濃度方法：紙片擴散法、稀釋法、E-test法 三、細菌的分離培養與鑒定醫學微生物學（第9版）4.藥物敏感試驗（antimicrobial suscept4.藥物敏感試驗（1）紙片擴散法在瓊脂平板上接種待檢病原菌；貼含有定量抗生素的紙片后培養；紙片上的抗生素向周圍瓊脂中擴散，形成了逐漸減小的藥物濃度梯度；根據藥物紙片周圍抑菌環的有無和大小來判定試驗菌對該抗菌藥物耐藥或敏感。 三、細菌的分離培養與鑒定醫學微生物學（第9版）4.

7、藥物敏感試驗（1）紙片擴散法三、細菌的分離培養與鑒定醫學4.藥物敏感試驗（2）稀釋法以一定濃度的抗菌藥物與含有待檢細菌的培養基進行一系列不同倍數稀釋（通常為雙倍稀釋），經培養后觀察其最低抑菌濃度。 方法瓊脂稀釋法使用瓊脂培養基肉湯稀釋法使用肉湯培養基 三、細菌的分離培養與鑒定醫學微生物學（第9版）4.藥物敏感試驗（2）稀釋法三、細菌的分離培養與鑒定醫學微生4.藥物敏感試驗（3）濃度梯度瓊脂擴散法（E-test法）：簡稱濃度梯度法將稀釋法和擴散法的原理相結合，使用預先設定的穩定且連續的抗菌藥物濃度梯度，采用瓊脂培養基培養以確定不同抗菌藥物對微生物的最低抑菌濃度（MIC）。 三、細菌的分離培養與鑒

8、定醫學微生物學（第9版）E-test試驗結果（張力平提供）4.藥物敏感試驗三、細菌的分離培養與鑒定醫學微生物學（第9版5.自動微生物鑒定及藥敏分析系統將培養基上分離的可疑致病菌配制成純菌液，放入自動微生物鑒定及藥敏分析系統中，通過計算機自動掃描、讀數、分析、最后報告鑒定及藥敏結果。 三、細菌的分離培養與鑒定自動微生物鑒定及藥敏分析系統（張力平提供）醫學微生物學（第9版）5.自動微生物鑒定及藥敏分析系統將培養基上分離的可疑致病菌配藥敏檢測原理微型化的肉湯稀釋試驗根據CLSI標準得到相應敏感度：敏感、中度敏感和耐藥微生物數碼鑒定原理計算并比較數據庫內每個細菌條目對系統中每個生化反應出現的頻率總和性

9、能特點自動化程度較高、檢測速度快、可鑒定細菌種類及藥敏試驗種類多、數據處理軟件功能強大、結果準確可靠系統組成測試卡（板）、菌液接種器、培養和監測系統、數據管理系統自動微生物鑒定及藥敏分析系統醫學微生物學（第9版）藥敏檢測原理微型化的肉湯稀釋試驗微生物數碼鑒定原理計算并比較四、細菌成分的檢查 1.免疫學檢驗技術醫學微生物學（第9版）用已知抗體檢測待檢標本中未知的顆粒性抗原。IgG的Fc段與金葡菌的SPA結合，Fab段與細菌抗原結合后，可使金葡菌發生肉眼可見的凝集現象。用已知的熒光抗體檢測待檢標本中的未知抗原，借助熒光顯微鏡觀察。用酶標抗體檢測特異性可溶性抗原。利用雙向瓊脂擴散與電泳技術相結合的方

10、法。由于電泳和電滲作用，抗原向正極移動，抗體向負極移動，在比例合適處形成肉眼可見的沉淀線。凝集試驗 協同凝集試驗 免疫熒光試驗酶免疫技術對流免疫電泳四、細菌成分的檢查 1.免疫學檢驗技術醫學微生物學（第9版）2.分子生物學檢驗技術四、細菌成分的檢查醫學微生物學（第9版）PCR技術 可用于常規培養困難或耗時太長的病原體以及細菌毒素基因的檢測核酸雜交技術可從標本中直接檢出病原菌基因，對尚不能或難以分離培養的病原菌尤為適用高通量測序技術可用于病原菌的分類鑒定、菌群結構和物種多樣性的分析和系統發育研究，具有檢測未知病原體的應用前景2.分子生物學檢驗技術四、細菌成分的檢查醫學微生物學（第9版3.質譜分析

11、法（mass spectrometry）質譜法是將有機化合物的分子電離、碎裂，然后按照離子的質荷比（m/z）大小把生成的各種離子分離，檢測其強度并排列成譜；根據細菌的蛋白質質譜圖，與數據庫中的細菌參考譜圖比對，對細菌的屬、種，甚至不同亞種進行鑒定與分類；常用基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜（MALDI-TOF MS）。該技術具有簡便快速、準確度高、重復性好、低成本、自動化和高通量等特點。四、細菌成分的檢查醫學微生物學（第9版）3.質譜分析法（mass spectrometry）質譜法是4. 生物芯片技術（biochip technology）將核酸片段、蛋白質或酶、抗原或抗體、細胞及組織等生物

12、樣品有序地固定于硅片、尼龍膜等固相支持物上，在一定的條件下進行生化反應。用化學熒光法、酶標法或同位素法顯示反應結果，通過特定的儀器讀取與收集數據，并用軟件進行數據分析，從而判斷樣品中靶分子的種類和數量。分類：液態芯片/固態芯片、蛋白芯片/基因芯片/糖芯片/細胞芯片等 四、細菌成分的檢查醫學微生物學（第9版）4. 生物芯片技術（biochip technology）將4. 生物芯片技術用途微生物感染的快速診斷：對某些病原體多重快速檢查與鑒別；微生物變異機制和耐藥機制的研究；微生物基因分型及分子流行病學的調查；微生物基因組及后基因組的研究：可研究病原體基因的序列、轉錄表達及抗原的表達；抗微生物感染

13、藥物的研制等。 四、細菌成分的檢查醫學微生物學（第9版）4. 生物芯片技術用途四、細菌成分的檢查醫學微生物學（第9版用已知的細菌或其特異性抗原檢測病人血清或其他體液中的抗體及其效價的變化，可以作為感染性疾病的輔助診斷。由于本實驗多采取病人血清檢測抗體，故常稱為血清學診斷（serological diagnosis）。一般適用于抗原性較強的細菌，以及病程較長的感染性疾病。也可用于調查人群對某病原菌的免疫應答水平以及檢測疫苗接種后的預防效果。 五、細菌感染的血清學診斷醫學微生物學（第9版）用已知的細菌或其特異性抗原檢測病人血清或其他體液中的抗體及其血清學試驗應用舉例直接凝集試驗腸熱癥（肥達試驗）間

14、接凝集試驗鉤體病、梅毒免疫熒光技術炭疽、立克次體病、恙蟲病等多種細菌感染性疾病補體結合試驗慢性布魯氏菌病中和試驗風濕熱（抗O試驗）酶聯免疫吸附試驗鼠疫、梅毒、Q熱等多種細菌感染性疾病細菌性感染的血清學診斷醫學微生物學（第9版）血清學試驗應用舉例直接凝集試驗腸熱癥（肥達試驗）間接凝集試驗細菌感染的特異性防治specific prevention and treatment of bacterial infection第二節細菌感染的特異性防治第二節機體獲得特異性免疫力的方式醫學微生物學（第9版）自然免疫主動免疫：隱性或顯性感染被動免疫：獲得母體的Ab(胎盤/初乳)人工免疫析主動免疫：疫苗被動免疫

15、：抗毒素或丙種球蛋白等機體獲得特異性免疫力的方式醫學微生物學（第9版）自然免疫主動人工主動免疫（artificial active immunization）是將疫苗接種于人體，刺激機體免疫系統產生特異性免疫應答，機體主動產生獲得性免疫力的一種防治微生物感染的措施，主要用于特異性預防。采用人工主動免疫方法通常稱為預防接種（prophylactic inoculation）或疫苗接種（vaccination） 一、人工主動免疫醫學微生物學（第9版）人工主動免疫（artificial active immun疫苗的種類死疫苗（killed vaccine）：亦稱滅活疫苗（inactivated v

16、accine）用物理、化學方法殺死病原微生物，但仍保持其免疫原性的生物制劑；常用的有：傷寒、霍亂、流行性腦膜炎、鉤端螺旋體病等?；钜呙纾╨iving vaccine ）：亦稱減毒活疫苗（attenuated vaccine）是通過毒力變異或人工選擇法（如溫度敏感株）而獲得的減毒或無毒株，或從自然界直接選擇出來的弱毒或無毒株經培養后制成的疫苗。常用的有：卡介苗、鼠疫、炭疽等細菌性減毒活疫苗。 一、人工主動免疫醫學微生物學（第9版）疫苗的種類 一、人工主動免疫醫學微生物學（第9版）區別點活疫苗死疫苗制品特點減毒或無毒的細菌，可在體內增殖死菌，在體內不增殖，但仍保持免疫原性 制備方法通過自然篩選/非

17、正常培養得到減毒株通過物理和/或化學方法使病原體失活接種次數和接種量1次，量小23次，量大接種反應類似輕型感染或隱性感染可出現發熱、全身或局部腫痛等反應免疫應答的類型體液免疫和細胞免疫體液免疫免疫維持時間15年或更長0.51年毒力回升與安全性有可能，對免疫缺陷者有風險不可能，安全性好疫苗的穩定性相對不穩定相對穩定保存不易保存，存活2周，真空凍干可長期保存易保存，可保存1年以上活疫苗與死疫苗的比較區別點活疫苗死疫苗制品特點減毒或無毒的細菌，可在體內增殖死菌疫苗的種類類毒素（toxoid）外毒素經0.3%0.4%甲醛處理后，失去了毒性但仍保持免疫原性的生物制品。加入吸附劑（佐劑）氫氧化鋁后便制成精

18、制類毒素。吸附劑可延緩類毒素在體內的吸收時間，刺激機體產生足量的抗毒素。舉例：白喉類毒素、破傷風類毒素 一、人工主動免疫醫學微生物學（第9版）疫苗的種類 一、人工主動免疫醫學微生物學（第9版）疫苗的種類多糖疫苗（carbohydrate vaccine）提取純化細菌中能引起特異性保護作用的多糖成份制備而成；成分單一，不存在易引起免疫副反應的物質，更為安全有效，已成為應用最多的疫苗之一；在臨床上被廣泛使用的莢膜多糖疫苗包括：肺炎鏈球菌、腦膜炎奈瑟菌、流感嗜血桿菌莢膜多糖疫苗等。 一、人工主動免疫醫學微生物學（第9版）疫苗的種類 一、人工主動免疫醫學微生物學（第9版）疫苗的種類多糖結合疫苗將細菌的

19、聚糖共價連接到適當的蛋白載體上而制備形成；TI-Ag轉變TD-Ag， 抗體IgM為主向IgG為主轉變，抗體親和力更強，效價更高，持續時間也更長；目前上市的細菌多糖蛋白結合疫苗有：b型流感嗜血桿菌、腦膜炎球菌和肺炎球菌等多糖結合疫苗。 一、人工主動免疫醫學微生物學（第9版）疫苗的種類 一、人工主動免疫醫學微生物學（第9版）疫苗的種類聯合疫苗（combined vaccines）：由不同抗原組分混合制成的疫苗，包括多聯疫苗與多價疫苗；多聯疫苗：由兩種或兩種以上疫苗原液按特定比例配合制成的具有多種免疫原性的疫苗，可同時預防多種疾病。如：百白破疫苗（DTP）；多價疫苗：由同一種細菌的不同亞型或不同血清

20、型抗原合并組成的含多價抗原成分的一種疫苗，典型的如23價肺炎球菌多糖疫苗。 一、人工主動免疫醫學微生物學（第9版）疫苗的種類 一、人工主動免疫醫學微生物學（第9版）疫苗的種類基因工程疫苗（gene engineered vaccine）是利用基因工程技術將編碼病原體保護性抗原表位的目的基因導入原核或真核表達系統中，利用表達的抗原產物或重組體本身制成的疫苗；基因工程亞單位疫苗、基因工程載體疫苗、核酸疫苗、基因缺失活疫苗等。 一、人工主動免疫醫學微生物學（第9版）疫苗的種類 一、人工主動免疫醫學微生物學（第9版）抗毒素（antitoxin）將類毒素或外毒素給馬免疫制成；用途：外毒素所致疾病的治療和

21、緊急預防；精制破傷風、白喉和肉毒抗毒素以及多價精制氣性壞疽抗毒素等；使用這些異種抗毒素時應注意避免型超敏反應的發生。 二、人工被動免疫醫學微生物學（第9版）抗毒素（antitoxin） 二、人工被動免疫醫學微生物學（丙種球蛋白（gammaglobulin）血清丙種球蛋白、胎盤丙種球蛋白；用途：某些感染性疾病的緊急預防、燒傷患者預防感染、丙種球蛋白缺乏癥患者、經長期化療或放療的腫瘤患者等?？咕澹╝ntisera）已基本被淘汰；對于由銅綠假單胞菌多重耐藥菌株所引起的嚴重燒傷疾病感染的治療，尚可以考慮試用。 二、人工被動免疫醫學微生物學（第9版）丙種球蛋白（gammaglobulin） 二、人工被動免疫醫兩種人工免疫方法的比較醫學微生物學（第9版）區別點人工主動免疫人工被動免疫免疫物質抗原抗體或細胞因子等接種次數13次1次免疫出現時間慢（注射后24周）快（注射后立即出現）免疫維持時間長（數月數年）短（2