1、病毒感染和實驗診療病毒感染和實驗診療病毒感染和實驗診療培訓課件病毒感染和實驗診療培訓課件 據衛生部統計，中國自1985年出現第一例艾滋病病人以來，截至2009年10月底，累計報告艾滋病病毒感染者和病人319877例，其中艾滋病病人 102323 例；報告死亡 4 9845例。 據衛生部統計，中國自1985年出現第一例艾滋病病人以病毒感染和實驗診療培訓課件病毒感染和實驗診療培訓課件病毒的基本性狀和分類7病毒感染和實驗診療病毒的基本性狀和分類7病毒感染和實驗診療病毒的大小與形態 一、病毒的大小與測量單位 極其微小，測量單位為納米 （nanometer，nm），20nm-300nm觀察及測量：電鏡、

2、濾過、超速離心、X線衍射二、病毒的形態 球形，磚形，桿形，彈形，長絲狀， 蝌蚪形8病毒感染和實驗診療病毒的大小與形態 一、病毒的大小與測量單位 8病毒感染病毒感染和實驗診療培訓課件狂犬病毒 (100-300 x75nm)乳頭瘤病毒 (70-90nm)狂犬病毒 (100-300 x75nm)乳頭瘤病毒 (70-9輪狀病毒 (60-80nm)輪狀病毒 (60-80nm)乙型肝炎病毒(42nm)流感病毒 (80-120nm)乙型肝炎病毒(42nm)流感病毒 (80-120nm)病毒的結構與化學組成 一、病毒的結構 核酸，衣殼，包膜 二、病毒的化學組成 核酸，蛋白質，脂質和糖類 13病毒感染和實驗診療

3、病毒的結構與化學組成 一、病毒的結構 二、病毒的化學組核酸（DNA/RNA) 蛋白質 保護核酸 結構蛋白： 參與感染 具有抗原性 非結構蛋白：病毒酶類（病毒復制， 抑制宿主相應功能）脂類和糖：主要存在于包膜中維護病毒體結構完整性與宿主細胞有親和及融合的性能表現病毒種、型抗原性與病毒引起機體中毒癥狀有關核酸（DNA/RNA) 蛋白質脂類和糖：主病毒的增殖 吸附，穿入，脫殼，生物合成，組裝成熟釋放 一、病毒的復制周期15病毒感染和實驗診療病毒的增殖 吸附，一、病毒的復制周期15病毒感染和實驗診療病毒感染和實驗診療培訓課件病毒感染和實驗診療培訓課件病毒受體(viral receptor,VP)是指存

4、在于細胞表面，能被病毒特異識別并與之結合，促進病毒感染的一組分子復合物。受體是病毒侵入的門戶，它決定了病毒的宿主范圍，組織及細胞嗜性。 病毒受體(viral receptor,VP)是指存在于細胞 二、病毒的異常增殖 缺陷病毒:是指因病毒基因組不完整或者因基因某一點改變而不能進行正常增殖的病毒。 缺陷病毒不能復制，但卻能干擾同種成熟病毒體進入易感細胞，故又稱為缺陷干擾顆粒(defective interfering particles ） 頓挫感染:病毒進入宿主細胞，若細胞缺乏病毒復制所需的酶、能量和原料等，則病毒不能合成本身成分；或雖合成部分或全部成分，不能裝配和釋放，稱為頓挫感染。 構成頓

5、挫感染的細胞被稱為非容納性細(non-permissive cells) 。 二、病毒的異常增殖 病毒的遺傳與變異 一、病毒性狀的變異 毒力變異 抗原性變異 空斑變異 對理化因素抵抗力或依賴性的變異 二、病毒變異的機制 基因突變 基因重組 20病毒感染和實驗診療病毒的遺傳與變異 一、病毒性狀的變異 20病毒感染和實驗診遺傳物質變異的類型1. 基因突變突變株指病毒基因堿基序列改變，導致表型性狀改變的毒株條件致死性突變株（conditional-lethal mutant） 溫度敏感突變株（temperature sensitive mutant,ts株 ） 為條件致死性突變株中應用最廣泛的缺陷型

6、干擾突變株（defective inhibition mutant，DIM）宿主范圍突變株（host range mutant,hr突變株）耐藥突變株（drug-resistant mutant）遺傳物質變異的類型 2. 基因重組與重配 兩種不同病毒感染同一細胞時，可發生基因交換而形成新性狀的重組體。 基因重組（recombination）不分節段基因組病毒 基因重配（reassortment）分節段基因組的病毒 類型：活病毒之間：N0H0 + N1H1N0H1活病毒與滅活病毒之間（交叉復活）滅活病毒 之間（多重復活） 2. 基因重組與重配 兩 3. 基因整合（gene integration

7、） 病毒基因組（DNA病毒與逆轉錄病毒）與細胞細胞基因組的重組過程。 整合可引起宿主細胞基因改變細胞遺傳性改變細胞轉化個別可發生細胞惡化腫瘤 3. 基因整合（gene integration） 病毒感染和實驗診療培訓課件病毒對理化因素的抵抗力 一、物理因素 溫度，電離輻射，紫外線 二、化學因素 氧化劑，脂溶劑，酚，甲醛，甘油, 酸堿等25病毒感染和實驗診療病毒對理化因素的抵抗力 一、物理因素25病毒感染和實驗 病毒的分類與命名原則 1.病毒體特征 顆粒大小，顆粒形狀，有無包膜，衣殼對稱性和結構2.基因組特征 核酸類型（DNA或RNA），核酸鏈數（單鏈/雙鏈），核酸極性（正鏈/負鏈），核酸片段數

8、3.蛋白質特征 蛋白質數目，大小，蛋白質功能（轉錄酶，血凝素，蛋白融合） 4.復制特征 核酸復制類型，轉錄特征5.理化特征 pH穩定性，離子強度，抵抗力 6.生物學特征 血清學關系，宿主范圍，致病性，組織嗜性，傳播途徑，媒介關系，地理分布 26病毒感染和實驗診療 病毒的分類與命名原則 1.病毒體特征 顆粒大小，顆粒形狀病毒的感染與免疫 27病毒感染和實驗診療病毒的感染與免疫 27病毒感染和實驗診療1.殺細胞性感染：病毒在宿主細胞內復制完畢，短時間內釋放大量子代病毒即造成細胞死亡，多見于無包膜殺傷性強的病毒。 抑制宿主細胞代謝（阻斷細胞的核酸和蛋白質合成）某些衣殼蛋白具有直接殺傷宿主細胞的作用細

9、胞病變效應（CPE）對細胞的影響1.殺細胞性感染：病毒在宿主細胞內復制完畢，短時間內釋放大量ABL929 cells + EMCVABL929 cells + EMCV 2. 穩定狀態感染： 某些病毒進入細胞后能夠復制，卻不引起細胞裂解、死亡，在相當長的一段時間內細胞和病毒并存，同時增殖，細胞病變緩慢且輕。多見于有包膜病毒，出芽方式釋放子代。有些病毒蛋白有融膜特性，細胞膜融合使病毒擴散，結果形成多核巨細胞。細胞膜成份改變，嵌合有病毒特異性抗原，被機體抗體或CTL所識別并清除。對細胞的影響 2. 穩定狀態感染： 某些病毒進入細胞后能夠復制，卻不引起細胞融合細胞融合 3. 包涵體形成概念：某些受病

10、毒感染的細胞內，用普通光學顯微鏡可看到與正常細胞結構和著色不同的圓形或橢圓形斑塊。位置意義胞質內（痘病毒）胞核內（皰疹病毒）兩者都有（麻疹病毒）具有診斷意義，如內基小體 3. 包涵體形成概念：某些受病毒感麻疹病毒包涵體 麻疹病毒包涵體 4. 細胞凋亡： 病毒感染細胞后，直接由病毒本身的作用或間接地作為誘導因子引發細胞凋亡。4. 細胞凋亡：細胞凋亡后基因組DNA梯狀電泳條帶細胞凋亡后基因組DNA梯狀電泳條帶5. 基因整合與細胞轉化： 少數病毒感染細胞后病毒的DNA整合到宿主細胞的染色體上，促進細胞的DNA合成，促進細胞增生或細胞轉化即細胞形態轉變，增殖加快，失去細胞間的接觸抑制等。 是病毒致腫瘤

11、的原因之一5. 基因整合與細胞轉化：病毒致腫瘤的原因宮頸癌肝癌鼻咽癌惡性淋巴瘤白血病病毒致腫瘤的原因宮頸癌（二）病毒感染的免疫病理作用抗體介導的免疫病理作用：、型超敏反應細胞介導的免疫病理作用：CTL、自身抗原免疫抑制作用：HIV、CMV（二）病毒感染的免疫病理作用抗體介導的免疫病理作用：、型二、病毒感染的傳播方式二、病毒感染的傳播方式傳播方式水平傳播 病毒在人群不同個體間的傳播，也包括從動物到動物再到人的傳播垂直傳播 通過胎盤或產道，病毒由宿主的親代傳給宿主的子代的方式HBV、CMV、 HIV、風疹病毒（其他微生物種少見）。傳播方式水平傳播 傳播途徑呼吸道消化道創傷感染接觸感染血液傳播性傳播

12、節肢動物媒介 傳播途徑呼吸道三、臨床感染類型 隱性感染顯性感染急性感染持續性感染慢性感染潛伏性感染慢發病毒感染急性感染的遲發并發癥三、臨床感染類型 隱性感染顯性感染急性感染持續性感染慢性感染隱性感染 病毒感染后不引起臨床癥狀顯性感染病毒感染后引起臨床癥狀隱性感染 病毒感染后不引起臨床癥狀顯性感染病毒感染后 病毒在體內持續數月至數年，甚至數十年，且經常反復間斷地向外排毒，可出現癥狀，引起慢性進行性疾病，也可不出現癥狀而長期帶病毒。 攜帶者為重要的傳染源持續性感染 病毒在體內持續數月至數年，甚至數十年，且經 病毒感染后有很長的潛伏期，經數年，數十年后，可發生某些進行性疾病，最終死亡。（HIV） 病

13、程長，病毒可檢出（HBV）潛伏感染：病毒的基因存在于一定的組織或細胞中并不產生感染性的病毒體，但在一定的條件下，病毒被激活而進入復制狀態，引起臨床癥狀（皰疹病毒）慢發病毒感染 持續性感染 慢性感染 潛伏感染急性病毒感染的遲發并發癥急性感染后1年或數年，發生致死性的病毒病，如亞急性硬化性全 腦炎（SSPE）。 病毒感染的實驗診斷 46病毒感染和實驗診療病毒感染的實驗診斷 46病毒感染和實驗診療兒童腮腺炎病毒感染兒童腮腺炎病毒感染HSV-I 感染引起的唇皰疹HSV-I 感染引起的唇皰疹乳頭瘤病毒感染引起的各種癥狀乳頭瘤病毒感染引起的各種癥狀病毒感染診斷的意義病毒診斷是治療的前提用于判斷預后用于疾病

14、的預防用于疾病的監測指導用藥病毒感染診斷的意義病毒診斷是治療的前提病毒學實驗室診斷的四個方面 檢測病毒體極其所致宿主細胞的病理改變（直接檢測和分離鑒定） 檢測病毒蛋白抗原和核酸 檢測抗體 其他非特異性物質病毒學實驗室診斷的四個方面 檢測病毒體極其所致宿主細胞的病理一、標本采集與送檢標本采集時間的選擇發病早期 標本的儲存和運送 低溫、含抗生素培養基標本采集部位及種類的選擇血液、腦脊液、宮腔拭子、糞便、含漱液、咽喉拭子、尿液或尿道拭子、尸檢標本一、標本采集與送檢標本采集時間的選擇標本的儲存和運送 標本采病毒感染和實驗診療培訓課件甲型肝炎標本采集及時間的選擇甲型肝炎標本采集及時間的選擇常規分離與鑒定

15、動物接種雞胚接種組織培養器官培養移植培養 細胞培養 原代細胞培養二倍體細胞培養傳代細胞培養三大培養方法常規分離與鑒定動物接種雞胚接種組織培養器官培養移植培養 細胞病毒感染和實驗診療培訓課件病毒在細胞內增殖的指標1、CPE2、紅細胞吸附正常細胞病變細胞病毒在細胞內增殖的指標1、CPE2、紅細胞吸附正常細胞病變細內基氏小體內基氏小體病毒感染和實驗診療培訓課件病毒的鑒定形態學鑒定：細胞病變效應（CPE）、包含體血吸附和血凝作用干擾作用病毒成分的直接檢測病毒的鑒定形態學鑒定：細胞病變效應（CPE）、包含體電鏡技術標本制備：超薄切片法（正染法）和負染法病毒的識別：有包膜和無包膜的病毒電鏡技術的應用：分類

16、及診斷電鏡技術標本制備：超薄切片法（正染法）和負染法病毒的免疫學診斷方法標記法不標記法免疫酶法、免疫熒光法血凝法、乳膠凝集法免疫轉印法SPA法、凝集抑制法放射免疫法補體結合法、中和試驗法化學發光法沉淀反應、免疫電鏡測熱及其他其他顆粒凝集法免疫PCR法病毒的免疫學診斷方法標記法不標記法免疫酶法、免疫熒光法血凝法 病毒的血清學診斷中和試驗補體結合試驗血凝抑制試驗免疫擴散等免疫熒光免疫酶技術病毒的血清學診斷中和試驗補體結合試驗血凝抑制試驗免疫擴散等免血凝抑制試驗血凝抑制試驗雙向免疫擴散試驗雙向免疫擴散試驗病毒的快速診斷光鏡-包涵體電鏡免疫熒光ELISA分子生物學技術雜交Southern blotPCRNorthern blotbiochip病毒的快速診斷光鏡-包涵體電鏡免疫熒光ELISA分子免疫酶技術免疫酶技術免疫熒光技術免疫熒光技術Western blot技術Western blot技術病毒感染和實驗診療培訓課件123bp246bp369bp492bpM 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13PCR技術123bp246bp369bp492bpM 1 病毒感染和實驗診療培訓課件Integrated