1、利用液相色譜法測定中藥的柚皮苷含量摘要】目的建立HPLC法測定常見中藥中柚皮苷的方法，測定常見中藥中柚皮苷 含量。方法 Waters Symmetry C18柱(4.6x150mm,3.5um)，流動相為甲醇:乙腈： 磷酸緩沖液(0.01mol/L pH3.5)=9:3:8，檢測波長為280nm。結果柚皮苷的出峰 時間為2min,柚皮苷1.80350mg/L范圍內具有良好的線性關系，R2值為 0.9999，平均回收率分別為 99.5%-102.5%，相對標準偏差小于 5%；香櫞、枳實和 橘紅的柚皮苷含量分別為 2.89-5.67%、0.21-0.26%、11.97-2.44%，不同產地的香 櫞

2、、枳實、橘紅中柚皮苷含量的相對標準偏差分別為28.88%、10.63%和26.42%; 四磨湯、胃痛丸、橘紅丸顆粒和抗骨增生丸中柚皮苷的含量分別為 5.99mg/g、 2.25mg/g、1.71mg/g、0.30mg/g，不同廠家生產的四磨湯、胃痛丸、橘紅丸顆粒 和抗骨增生丸中柚皮苷濃度的相對標準偏差分別為8.43%、 14.72%、 9.90%和 3 . 42% 。結論建立了一種簡便、準確、適用性廣泛地測定中藥中柚皮苷的方法， 產地對香櫞及橘紅中柚皮苷含量的影響較大，而不同廠家生產的中成藥中柚皮苷 的含量偏差相對較小。【關鍵詞】高效液相色譜法 柚皮苷 中藥 原料 中成藥Determinati

3、on of naringin in Chinese medicine byhigh-performance Liquid Chromatographic Method(XUE Bai-yun, DUAN Ci-qun)(Peopleshospital of Yingtan City, Jiangxi Province, Yingtan, 335000) 【Abstract】 Aim: To set up a quantitativehigh-performance liquid chromatographic method for determination of naringin and t

4、o investigation naringin content in common Chinese medicine. Method: An RP-HPCL method was set up, using Symmetry C18 column, methyl alcohol: acetonitrile:PBS(containing 0.01mol/L postassium dihydrogan phospate pH=3.5)= 18:3:14 as mobile phase with a flow rate of 1.0ml/min at the detection wavelengt

5、h of 210nm. Result: retain time was about 2min, naringin well separated with other compositions. The Calibration curve was ofgood linearity in the range of 1.80350 mg/L with R2 0.999, recoveries were range from 99.5%-102.5%, relative standard derivation was less than 5%. Naringin content in Citron,

6、Citrus aurantium, and orange-red were 2.89-5.67%, 0.21-0.26%, and 11.97-2 .44%, respectively. Relative standard derivation of naringin contents from different origin were 28.88 for citron, 10.63 for citrus aurantium, 26.42 for orange-red. Naringin content in 4 soup, stomach pain pill, orange pill bo

7、ne particles and anti-proliferative Pill were 5.99 mg /g, 2.25mg /g, 1.71mg /g, and 0.30mg /g repectively. Relative standard derivation of naringin contents from different factory were 8.43 for 4 soup, 14.72 for stomach pain pill, 9.90 for orange pill bone and 3.42 for anti-proliferative pill. Concl

8、usion: This method is accurate, sensitive and convenient for detecting naringin content of Chinese medicine, Origingreatly effects naringin content of the citron and orange-red ,whereas, naringin content of Chinese patent medicine are little affected by origin.【Key words】 High-performance Liquid Chr

9、omatographic Method, naringin, Chinese medicine, raw material, Chinese patent medicine柚皮苷是一種二氫黃酮類化合物，它又稱柚苷、柑桔苷、異橙皮苷、柚皮素- 7-O-新橙皮糖苷，學名為柚皮素-7-B-D-葡萄糖(2T1)-a-L-鼠李糖，分子式 C27H32O14，分子量580.551。相關研究表明，研究表明，柚皮苷在降血脂2、 抗氧化3、抗菌消炎4、抗腫瘤5、抗過敏6、抗關節炎鎮痛7、抗心血管疾 病8及其他多方面9具有較強的生物活性，是骨碎補、枳實、枳殼、化橘紅等中 藥10的主要有效成分之一。柚皮苷的含量是衡

10、量這類中藥的重要指標之一，目前定量測定柚皮苷的方法 有分光光度計法11，高效液相色譜法12，分光光度計法不能排除結構類似物的 干擾，很難精確定量；密度較差，干擾因素過多；雖然液相色譜已經廣泛用于測 定中藥中的柚皮苷，但這些方法大多數都是針對某一種中藥中的柚皮苷含量的測 定，方法的適用性受到限制。因此，開發一種具有較廣泛用途的中藥柚皮苷測定 方法，對于利用液相色譜法分析定量柚皮苷含量，以此評價中藥質量的具有重要 的意義。材料與方法1.1 儀器與試劑Waters 高效液相色譜儀（包括 Waters 1525 BinaryhPLC 泵， Waters 2487 紫外 檢測器，Waters Syste

11、m Breeze數據處理工作站）；旋轉蒸發儀（上海亞榮生化儀 器廠）；eppendorf離心機。香櫞、枳實、橘紅購于樟樹藥材市場；四磨湯、胃痛丸、橘紅丸顆粒和抗骨增生 丸分別購自不同的醫藥批發公司。柚皮苷標準品（sigma公司）；甲醇、乙腈、四氫咲喃（色譜純，美國TEDIA 公司）。樣品處理標準品溶液的制備精確稱取柚皮苷標準品0.0048g,溶于甲醇并定容至10ml，分別用甲醇稀釋制成一定濃度的標準溶液。樣品溶液的制備稱取一定量的實驗樣品，粉碎過100 目篩，烘干至恒重，稱取 1g 先用乙醚進 行索氏抽提去除脂肪類物質，再用 50mL 丙酮浸提，共浸提3 次，合并 3 次浸提 液，旋轉蒸發濃縮

12、至干，加入50mL的甲醇溶解并定容至200mL，再經0.45ym針 頭式微孔過濾器過濾后備用。色譜條件色譜柱為Symmetry C18柱，流動相是甲醇:乙腈:磷酸緩沖液（0.01mol/L pH3.5）=9:3:8 （V/V），流速 1.0ml/min，檢測波長 280nm，柱溫 35C。結果與分析方法的定性分析圖1 是柚皮苷標準品及7 種分析樣品的色譜圖。由圖1 可知，柚皮苷的出峰 時間為 2min 左右，所試驗的 7 種中藥的雜質峰與柚皮苷的峰得到了較好的分離 說明方法的適用性較好。圖1 樣品的 HPLC 色譜圖Fig 1.HPLC chromatogram of samples注：圖中

13、A、 B、 C、 D、 E、 F、 G、 H 分別是柚皮苷標準品，枳實、橘紅、香 櫞、四磨湯、橘紅丸顆粒、胃痛丸、抗骨增生丸的液相色譜圖。標準工作曲線及檢測限精密吸取柚皮苷的標準樣品的梯度稀釋樣，在選定的色譜條件下進樣20山進 行分析，以柚皮苷的濃度（mg/L ）為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線， 并計算其回歸方程。結果表明，在 1.8-350mg/L 的濃度范圍內，柚皮苷分析測定 的標準工作曲線的回歸計算方程為y=42381x，回歸方程的R2值為0.9999，說明 在此濃度范圍內線性關系良好。基線噪音峰面積響應值為6110，以3 倍噪聲計算 檢測限，則柚皮苷的檢測限為0.43mg/L；

14、以10倍噪聲計算方法的定量檢測限， 則最低定量檢測濃度為 1.44mg/L。準確度 采用回收率進行方法準確度的評價，分別稱取不同柚皮苷標準品，用丙酮提 取，濃縮后用甲醇溶解定容，用液相色譜測定其濃度，以計算其回收率,結果如表 1 所示。由表 1 可知，在 1.44-328.75mg/L 濃度范圍內，柚皮苷的回收率處于 99.53%-102.14%之間。表1回收率試驗結果Table 1 Result of recovery test2.4精密度分別以 4 種中成藥為本底，加入一定的柚皮苷，用液相色譜檢測，每個樣品 溶液 5 個平行樣，計算相對標準偏差，結果如表 2 所示。相對標準偏差都小于 5%

15、，說明樣品的精密性良好。表 2 樣品精密度實驗結果Table 2 Result of precision experiment注：樣品 1 是以抗骨增生丸為本底；樣品 2 是以四磨湯為本底；樣品 3 是以 橘紅丸顆粒為本底，樣品4是以胃痛丸為本底。幾種原料中藥柚皮苷含量的測定對市售的幾種原料中的柚皮苷含量進行測定，結果如表 3 所示。由表 3 可知 不同原料藥中的柚皮苷濃度差別較大，香楷中柚皮苷含量為2.89-5.67%，不同產 地香櫞的柚皮苷含量差別較大，其相對標準為 28.88%；枳實中柚皮苷的含量為 0.21-0.26%，不同產枳實中柚皮苷含量的相對標準偏差為10.63%；橘紅中柚皮苷

16、的含量為 1.97-3.31%，不同產地橘紅中柚皮苷含量的相對標準偏差為 26.42；這說 明，產地不同的原料藥中柚皮苷的濃度具有較大的差異，這種差異在香櫞及橘紅 中非常明顯。表3幾種原料藥中柚皮苷含量測定結果Table 3 analysis results of naringin content of law Chinese medicine幾種中成藥柚皮苷含量的測定對市售的幾種原料中的柚皮苷含量進行測定，結果如表 4 所示。由表 4 可知 四磨湯中柚皮苷的含量為5.99mg/g，胃痛丸中柚皮苷含量為2.25mg/g，橘紅丸顆 粒中柚皮苷含量為1.71mg/g，抗骨增生丸中柚皮苷的含量為0.

17、30左右。不同廠家 生產的四磨湯、胃痛丸、橘紅丸顆粒和抗骨增生丸中柚皮苷濃度的相對標準偏差 分別為 8.43%、14.72%、9.90%和3.42%，與中藥原料中柚皮苷的含量差異較大相 比，不同廠家生產的中成藥中柚皮苷含量相對穩定。表4幾種中成藥中柚皮苷含量測定結果Table 4 analysis results of naringin content of Chinese medicine結論3.1建立了利用液相色譜法測定中藥中柚皮苷的方法，用Symmetry C18柱， 在甲醇：乙腈：磷酸緩沖液(0.01mol/L pH3.5)=9:3:8 (V/V)、流速 1.0ml/min、 柱溫35

18、C的條件下進行分離，在280nm波長條件下檢測，柚皮苷的出峰時間為 2mi n,柚皮苷與雜質得到了很好的分離。方法的標準曲線回歸方程為：y=42381x； 方法的檢測限為0.43mg/L，定量檢測濃度為1.44mg/L；柚皮苷的回收率在99.5%- 102.5%之間,相對標準偏差小于 5%。幾種含柚皮苷的中藥原料中，香櫞中的柚皮苷含量最高，枳實中含量相對 較低；不同產地的中藥原料中柚皮苷的含量并不相同。幾種中成藥中柚皮苷的含量差別較大，其中四磨湯中柚皮苷含量相對較高 不同廠家生產的中成藥中柚皮苷的含量相對較穩定。參考文獻賈冬英.柚皮苷提取純化及其絡合改性研究D.四川大學碩士論文,2002.Bo

19、k SH, Lee SH, Park YB, et al. Plasma andhepatic cholesterol andhepatic activities of 3-hydroxy- 3-methyl-glutaryl-CoA reductase and ethyl CoA: cholesterol transferase are lower in rats fed citrus Peel extract or a mixture of citrus bioflavonoidJ. J Nutr., 1999, 129(6):1182-1185.Limasset B， Doucen CL, Dore JC, et al. Effects of flavonoids on the release of reactive oxygen species by stimulatedhuman neutrophils: Multivariate analysis of structure-activity relationships J. Biochemical Pharmacology, 1993， 46(7):1257-1271.Jeon SM, Bok SH, Jang MK, et al. Comparison of antioxidant eff