1、青少年特發性脊柱側凸患者凸凹側椎體生長板構造形態學研究王守豐，邱勇，王斌，俞揚，朱澤章，朱鋒【摘要】目的探究AIS患者椎體生長板凸、凹側構造學及軟骨細胞增殖與凋亡差異在AIS產生、生長中的作用。要領本研究中取AIS患者椎體生長板，應用HE染色評估生長板凸、凹側的構造學分級差異，應用免疫構造化學要領及TUNEL要領評估生長板凸、凹側軟骨細胞增殖與凋亡指數，并對其舉行比力。效果光鏡下椎體生長板凸側可見正常分層布局，生長板凹側分層布局擺列雜亂。頂椎椎體生長板凸、凹側構造學分級差異有統計學意義0.05。終椎凹側生長板和頂椎凹側生長板構造學分級有顯著差異且有統計學意義P0.05。頂椎生長板凸側軟骨細胞增

2、殖指數和凋亡指數顯著高于凹側，其差異有統計學意義P0.05。在上終椎椎體生長板凸、凹側軟骨細胞PNA增殖指數有顯著差異且有統計學意義(P0.05)。上、下終椎椎體生長板和頂椎椎體生長板凹側軟骨細胞增殖和凋亡指數有差異且有統計學意義(P0.05)。在上、下終椎和頂椎椎體生長板凸側軟骨細胞TUNEL凋亡指數有差異且有統計學意義(P0.05)。結論AIS患者上、下終椎和頂椎椎體生長板凸、凹側構造學分級的差異和軟骨細胞的增殖與凋亡指數差異大概表白椎體生長板凸、凹側存在生長動力學差異，這大概影響側凸的希望。【關鍵詞】特發性脊柱側凸；構造學分級；軟骨細胞；增殖；凋亡Abstrat:bjetiveTinve

3、stigatethedifferenefhistlgialgradesandhndrytiprliferatinandapptsisbeteennvexandnavesidesinvertebralgrthplatesfAISpatientsanditsrleinthedevelpentandprgressinfslisis.ethdInthepresentstudy,thegrthplatesfrthenvexandnavesidefthevertebraeereharaterizedbytheethdfhistlgyandiunhistheistrytevaluatethegrthativ

4、ity,ellprliferatinandapptsis.ResultNralznedarhitetureserebservedinthenvexsidefthegrthplateanddisrganizedarhiteturesinthenaveside.Thehistlgialgradeseresignifiantlydifferentbeteenthenvexandthenavesidefthegrthplateintheapexvertebrae(P0.05).Thehistlgialdiffereneasalsfundsignifiantstatistiallybeteenendve

5、rtebraeandapexvertebraeinthenavesidefvertebralgrthplates(P0.05).Theprliferativeptentialindexesandapptsisindexesfhndrytesintheprliferativeandhypertrphizneinthenvexsideeresignifiantlyhigherthanthatinthenavesideintheapexvertebralgrthplate(P0.05).Thereasasignifiantdiffereneftheprliferativeptentialindex(

6、prliferatingellnulearantigen,PNAindex)beteennvexsideandnavesideattheupperendvertebra(P0.05).Thediffereneftheprliferativeptentialindexandapptsisindexerefundsignifiantstatistiallyinthenavesidefthevertebralgrthplatebeteenendvertebraeandapexvertebrae(P0.05).Thesaeresultasalsfundfrtheapptsisindex(terinal

7、dexynuletidyltransferaseediateddexyuridinetriphsphatebitinnikendlabelingassay,TUNELindex)inthenvexsidefvertebralgrthplatebeteenendvertebraeandapexvertebrae(P0.05).nlusinThediffereneinhistlgialgradesandellularativitybeteenthenvexandnavesideayindiatethatthebilateralsidesfvertebralgrthplateinAISpatient

8、shavedifferentgrthkinetishihayaffettheurveprgressin.Keyrds：idipathislisis；histlgialgrades；hndryte；prliferatin；apptsis青少年特發性脊柱側凸(adlesentidipathislisis,AIS)是龐大的脊柱三維畸形。由于特發性脊柱側凸的產生和希望通常出現于青少年快速生恒久，椎體的非對稱性生長被以為是這種疾病的發病機制之一1。椎體的生長重要泉源于椎體生長板，作用雷同于長骨的骨骺。在生恒久間，生長板內的軟骨細胞受制于局部生長因子和滿身激素的調治，從而包管生長板內軟骨細胞增殖與凋亡的平

9、衡2。文獻陳訴在生恒久間，生長板內軟骨細胞的活性是權衡生長率的指標3。然而，對付AIS患者椎體凸、凹側生長板生長活性及凸、凹側生長板內軟骨細胞的增殖與凋亡的差異未見報道。本文對AIS患者椎體凸、凹側生長板的構造學分級及軟骨細胞的增殖與凋亡指數舉行比力研究，從而探究椎體凸、凹側生長板構造學改變在椎體楔變中作用及其在側凸希望中的大概作用。1質料與要領：1.1臨床資料與標本網羅2022年9月2022年4月，網絡本院行前路松解手術或前路結實交融手術的21例AIS患者椎體生長板126枚。病人年事1118歲，均勻13.5歲。bbs角為43117，均勻65.1。此中Lenke1A3例，Lenke1B5例，L

10、enke17例，Lenke54例，Lenke62例。生長板取自頂椎、上終椎及下終椎，然后按凸、凹側分成2組。全部標本網絡后經結實、脫鈣、標本白臘包埋、切片，然后舉行HE(heatxylinesin)染色，免疫構造化學染色和TUNEL染色。1.2HE染色取白臘切片于二甲苯中脫蠟、酒精梯度水化、HE染色、脫水、透明和封片，不雅察光鏡下椎體生長板和下樞紐突軟骨布局改變。構造學分級：根據Nrdeen等4對椎體生長板構造學分級為：0級、1級、2級、3級。見圖1。1.3免疫構造化學染色每份標本取4張切片，通例切片脫蠟，抗原修復，滅活，滴加正常山羊血清關閉液，至37，10in后棄去多余液體。滴加抗細胞增殖核

11、抗原(prliferatinellnulearantigen,PNA)(180)鼠抗人單克隆抗體(克隆號P10，Dak，丹麥)和抗聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(plyADP-ribseplyerase,PARP)兔抗人抗體labvisin,USA，4留宿，漂洗3次。滴加二抗，3715in，漂洗4次。DAB顯色，鏡下操縱。蘇木素襯染，封片不雅察。同時設置陰性比較。按照染色程度將陽性細胞分為三級:弱陽性(+);陽性(+);強陽性(+)。統計時以強陽性表達的細胞為有增殖本領或凋亡細胞。光鏡下按照染色深度將PNA陽性細胞分為S期和非S期。由于S期陽性細胞更能反響細胞增殖狀態，本實行僅統計S期陽性細胞。與P

12、NA陽性細胞雷同，PARP陽性細胞也見于靜止和增殖胖大層。光鏡下丈量軟骨細胞PNA指數和PARP指數。詳細如下:40倍鏡下每個視野數100個細胞共數10個視野，計數此中陽性細胞數量，換算成PNA指數和PARP指數(陽性細胞數/1000100)。1.4TUNEL染色不雅察軟骨細胞凋亡，用TUNEL原位末了標識表記標幟檢測試劑盒(rhe,annhEi,gerany)，按其操縱說明舉行實行，別的步調同“1.3。1.5統計學處置懲罰計量資料以算術均勻數尺度差表現。應用SPSS10.0統計軟件舉行統計闡發。椎體生長板凸、凹側PNA指數、PARP指數和TUNEL指數比力應用t查驗。上下終椎與頂椎生長板的P

13、NA指數、PARP指數和TUNEL指數應用單因素方差闡發。構造學分級比力應用Fisher確切概率法。P0.05為差異有明顯性。2效果2.1構造學分級構造切片HE染色后，光鏡下不雅察椎體凸、凹側生長板布局，包羅靜止層、增殖層、胖大層和鈣化層。椎體生長板凹側靜止層、增殖層和胖大層高度相對付凸側顯著落落，且擺列不規矩，細胞叢集，分層不顯著，有些地區增殖層和胖大層分界不清。在頂椎區，椎體凸側生長板的構造學分級顯著高于凹側生長板(P0.05)。椎體凹側生長板的構造學分級在頂椎與端椎椎體生長板之間也有顯著區別(P0.05)(見表1)。表1AIS患者椎體生長板凸、凹側構造學分級比力部位2.2增殖指數與凋亡指

14、數在上、下端椎及頂椎椎體凸、凹側生長板靜止層內軟骨細胞的增殖指數與凋亡指數差異沒有統計學意義(P0.05)。由于部門椎體凹側生長板的增殖層與胖大層沒有明白的分界，將增殖層與胖大層作為一層舉行盤算。在上終椎和頂椎凸側生長板，其PNA指數均高于雷同地區的椎體凹側生長板軟骨細胞的增殖指數(P0.05)。頂椎椎體凹側生長板增殖-胖大層軟骨細胞的增殖指數低于上、下終椎椎體凹側生長板增殖-胖大層軟骨細胞增殖指數(P0.05)(見表2和圖2)。頂椎椎體凸側生長板增殖-胖大層軟骨細胞凋亡指數為41.23%，高于凹側生長板凋亡指數26.13%(P0.05)。上、下終椎椎體凸側生長板增殖-胖大層軟骨細胞凋亡指數低

15、于頂椎椎體凸側生長板凋亡指數(P0.05)。然而，與其相反的是，上、下終椎椎體凹側生長板增殖-胖大層軟骨細胞的凋亡指數卻高于頂椎椎體凹側生長板增殖-胖大層軟骨細胞的凋亡指數(P0.05)(見表3和圖3)。頂椎椎體生長板增殖-胖大層軟骨細胞凋亡指數高于凹側生長板凋亡指數(P0.05)。上、下終椎椎體凹側生長板增殖-胖大層軟骨細胞凋亡指數高于頂椎椎體凹側生長板凋亡指數(P0.05)(見表4和圖4)。表2AIS患者椎體凸、凹側軟骨細胞增殖指數(PNA指數)表3AIS患者椎體生長板凸、凹側軟骨細胞增殖指數注:*代表凸、凹側差異有統計學意義(P0.05);#代表上終椎與頂椎差異有統計學意義(P0.05)

16、;+代表下終椎與頂椎間差異有統計學意義(P0.05)表4AIS患者椎體生長板凸、凹側軟骨細胞增殖指數+注:*代表凸、凹側差異有統計學意義(P0.05);#代表上終椎與頂椎差異有統計學意義(P0.05);+代表下終椎與頂椎間差異有統計學意義(P0.05)3討論脊柱擺布兩側不服衡性生長導致脊柱的不合錯誤稱已在文獻中闡述5。這種非對稱性生長大概導致畸形的希望。這些學者研究創造軟骨天生落落、生長板內柱狀布局擺列紊亂、椎體生長板早期的生長停滯。arrll和sten等6在對特發性脊柱側凸患者行單側骨骺停滯手術時接納的椎體凸側生長板舉行構造學不雅察創造軟骨構造紊亂及軟骨生長緩慢。本研究中，AIS患者椎體生長

17、板增殖層與胖大層軟骨細胞致密，叢集，與正常長骨生長板顯著差異。在上、下端椎及頂椎椎體凸、凹側生長板，構造學分級存在顯著差異。這種生長板軟骨構造學分級的差異大概影響椎體骨的生長及在冠狀面上椎體兩側生長速率，從而導致椎體楔形變，在AIS的希望發揮緊張作用。長骨或椎體骨的生長泉源于生長板軟骨細胞的增殖和在生長標的目的的胖大及其合成的終極骨化的基質。ilsan等7對28天Lng-Evans大鼠4個差異部位長骨生長板舉行研究創造差異部位生長板天天產生的新的軟骨細胞數量差異，新生的軟骨細胞數量與長骨的生長速率呈正相干。但是這些研究均來自于動物模子，側凸患者椎體生長板軟骨細胞的增殖和凋亡的研究很少報道。本研

18、究創造頂椎椎體凸側生長板增殖-胖大層的軟骨細胞增殖指數高于凹側，這說明在AIS患者頂椎椎體凸、凹側生長板大概存在軟骨細胞增殖活性的差異。軟骨細胞的凋亡也有相似的創造。大多數凋亡的軟骨細胞出如今胖大層和礦化層。然而，除軟骨細胞的PNA指數在上終椎椎體凸、凹側生長板有差異外，別的各增殖和凋亡指數在終椎椎體凸、凹側生長板其差異并沒有統計學意義。這些創造表白青少年特發性脊柱側凸患者椎體生長板大概受應力的影響并遵照Hueter-Vlkann定律。必需夸大的是，本研究中所取的AIS患者椎體生長板構造泉源于椎體的凸側和凹側，凸側蒙受張力，而凹側更多蒙受壓力。椎體凸、凹側生長板軟骨細胞的增殖和凋亡指數的差異大

19、概是差異力學條件影響的效果。在長骨的縱向生長和軟骨內成骨的歷程中，軟骨細胞的增殖和凋亡必需有機和諧，才氣包管正常的骨的生長3。在研究中，椎體凸、凹側生長板軟骨細胞的差異性的增殖和凋亡指數表白在椎體凸、凹側生長板大概存在差異的細胞動力學，這引起椎體凸、凹側差異的生長速率，進而導致凸、凹側生長的不服衡及椎體楔形變。這些創造大概是差異的力學情況下的繼發性表現，但是其大概在側凸的希望中發揮緊張作用。圖1aHG為0級，沒有軟骨增殖層，沒有生長活性圖1bHG為級，散在軟骨增殖區，沒有生長活性圖1HG為級，散在軟骨增殖區，沒有生長活性圖1dHG為級，生長板全層均有軟骨增殖區，顯著的生長活性圖2AIS患者光鏡

20、下頂椎生長板靜止層凸、凹側PNV陽性細胞圖2a、b增殖胖大層凸、凹側PNA陽性細胞圖2、d放大倍數：400圖3AIS患者光鏡下頂椎生長板靜止層凸、凹側TUNEL陽性細胞圖3a、b增殖-胖大層凸、凹側TUNEL陽性細胞圖3、d放大倍數：400圖4AIS患者光鏡下頂椎生長板靜止層凸、凹側PARP陽性細胞圖4a、b增殖-胖大層凸、凹側PARP陽性細胞圖4、d放大倍數：400只管AIS患者椎體冠狀面的楔形變是側凸的緣故原由或繼發性改變如今還不明晰，但是椎體擺布側差異性的生長導致椎體生長不服衡很大概影響側凸的希望8。本研究大概為椎體凸、凹側生長不服衡提供一些構造細胞學的根據，但是椎體的生長是一個龐大的歷

21、程，與長骨的生長一樣，椎體的軟骨內成骨性生長受局部調治因子及體系調治因子的調治9。進一步研究應會合于基質的合成和局部及體系調治因子，進而探究導致這些差異的內涵機制。【參考文獻】1王渭君,邱勇.青少年特發性脊柱側凸發病機制研究希望J.中國矯形外科雜志，2022,13:380-382.2PrvtS,ShipaniE.leularehanissfendhndralbnedevelpentJ.BiheialandBiphysialResearhuniatins，2022，328:658-665.3ZhuF,QiuY,YeungHY,etal.HistrphetristudyfthespinalgrthplatesinidipathislisisandngenitalslisisJ.PediatrInt，2022,