1、柴胡有效成分提取工藝的研究 肖功勝，楊云，孫維英，馮云霞，朱振華【摘要】目確實(shí)定柴胡有效成分提取的最正確工藝。方法以柴胡中揮發(fā)油吸收度和柴胡皂苷a的含量為指標(biāo)，采用單因素實(shí)驗(yàn)挑選主要因素和程度，再以正交實(shí)驗(yàn)挑選柴胡有效成分提取最正確工藝。結(jié)果最正確工藝參數(shù)為40溫浸，搜集相當(dāng)于藥材2倍量蒸餾液，繼用8倍量含5%氨水的95%乙醇回流1h提取柴胡皂苷，可使揮發(fā)油吸收度達(dá)0.941，柴胡皂苷a的含量達(dá)0.32%。結(jié)論該工藝為柴胡有效成分的提取提供了可靠根據(jù)，且工藝條件穩(wěn)定可靠，重復(fù)性好。【關(guān)鍵詞】提取工藝柴胡皂苷a揮發(fā)油正交實(shí)驗(yàn)Keyrds：Extratintehnlgy;Saiksapnina;V

2、latileils;rthgnalexperient柴胡為傘形科植物柴胡BupleuruhinenseD.或狹葉柴胡Bupleurusrznerifliuild的枯燥根1。具有疏散退熱、疏肝解郁、升陽(yáng)舉陷之成效，為中醫(yī)治療少陽(yáng)癥的首選要藥。其主要化學(xué)成分為柴胡皂苷和揮發(fā)油類。柴胡作為臨床常用藥，中成藥制劑品種眾多，且大多以煎煮法提取柴胡皂苷類成分，而多以水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油2。由于柴胡皂苷a、d化學(xué)構(gòu)造均具不穩(wěn)定性，遇酸或受熱易分別降解生成活性較弱的次生苷b1，b2，因此隨著水蒸氣蒸餾法提取時(shí)間的延長(zhǎng)，柴胡皂苷a，d的含量將逐漸降低，以致嚴(yán)重影響了柴胡制劑的質(zhì)量和臨床療效。目前國(guó)內(nèi)關(guān)于柴胡提

3、取工藝的文獻(xiàn)報(bào)道較多，但多以揮發(fā)油或柴胡皂苷a單獨(dú)為指標(biāo)進(jìn)展考察，很少有同時(shí)考察揮發(fā)油和柴胡皂苷a的文獻(xiàn)報(bào)道，更是未曾有文獻(xiàn)報(bào)道過在保證揮發(fā)油提取率的同時(shí)還兼顧柴胡皂苷a的充分提齲因此，本研究采用正交實(shí)驗(yàn)綜合考察柴胡中揮發(fā)油吸收度和柴胡皂苷a含量，挑選最正確工藝，以期為進(jìn)步柴胡制劑的質(zhì)量和療效打下堅(jiān)實(shí)基矗1儀器與試藥1.1儀器島津L-20A高效液相分析儀SPD-20A紫外檢測(cè)器；752紫外分光光度計(jì)上海精細(xì)儀器科技；RE52-86A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上海亞榮生化儀器廠；ETTLERAE240電子分析天平瑞士。1.2試藥柴胡藥材購(gòu)于河南省藥材公司，經(jīng)本院陳隨清教授鑒定為傘形科植物柴胡Bupleuruhi

4、nenseD.的枯燥根；柴胡皂苷a對(duì)照品自制，經(jīng)峰面積歸一化法測(cè)定含量為：99.91%；乙腈為色譜純；水為雙重蒸餾水；其他試劑均為分析純。2方法2.1單因素實(shí)驗(yàn)分別以藥材浸漬溫度、浸漬時(shí)間、料液體積比、蒸餾液搜集量等為因素，在不同程度下進(jìn)展單因素實(shí)驗(yàn)，挑選出影響柴胡揮發(fā)油提取的主要因素和程度，同樣分別以乙醇濃度、pH值、柴胡皂苷提取時(shí)間、料液體積比等為因素，在不同程度下進(jìn)展單因素實(shí)驗(yàn)，挑選出影響柴胡皂苷提取的主要因素和程度。從而為正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)提供根據(jù)。2.2揮發(fā)油的提取和測(cè)定方法隨機(jī)稱取50g柴胡枯燥粗粉，置于500l圓底燒瓶中，采用水蒸氣蒸餾法在不同條件下提取柴胡揮發(fā)油，搜集蒸餾液，加3%丙

5、二醇搖勻，精細(xì)量取上述蒸餾液2l兩份，一份置5l容量瓶中，加蒸餾水定容，搖勻，作為樣品液，另一份置蒸發(fā)皿中，置水浴上蒸干，殘?jiān)谜麴s水溶解，轉(zhuǎn)移至5l容量瓶中，加蒸餾水定容，搖勻，作為空白。用752紫外分光光度計(jì)在277n波長(zhǎng)處測(cè)定蒸餾液中揮發(fā)油的吸收度。2.3柴胡皂苷的提取取提取揮發(fā)油后的藥渣，濾干，置于500l圓底燒瓶中，在不同條件下回流提取柴胡皂苷，過濾得濾液，減壓低溫濃縮成每毫升含0.5g柴胡的濃縮液，備用。2.4柴胡皂苷a含量測(cè)定2.5正交實(shí)驗(yàn)以柴胡蒸餾液中揮發(fā)油的吸收度和柴胡皂苷a的含量為檢測(cè)指標(biāo)，參照單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果，分別以藥材浸漬溫度、揮發(fā)油搜集量、柴胡皂苷提取時(shí)間、柴胡皂苷提取

6、溶劑料液比等主要因素及不同程度進(jìn)展L9(34)正交設(shè)計(jì)，挑選最正確工藝。正交實(shí)驗(yàn)因素和程度見表1。表1正交實(shí)驗(yàn)因素及程度略3結(jié)果3.1浸漬溫度對(duì)揮發(fā)油提取效果的影響分別在30，40，60，80溫度下浸漬6h，料液比16，提取1次，考察浸漬溫度對(duì)揮發(fā)油提取效果的影響。測(cè)得吸收度依次為：0.303，0.984，0.758，0.587。由測(cè)定結(jié)果可知，在40下浸漬吸收度到達(dá)最大。且變化顯著，所以浸漬溫度應(yīng)選在40左右。3.2浸漬時(shí)間對(duì)揮發(fā)油提取效果的影響在40下，分別浸漬0，2，4，6，8h，料液比16，提取1次，考察浸漬時(shí)間對(duì)揮發(fā)油提取效果的影響。測(cè)得吸收度依次為：0.470，0.559，0.65

7、0，0.940，0.722。由測(cè)定結(jié)果可知，浸漬6h吸收度最大，浸漬4h和8h吸收度相當(dāng)。3.3料液比對(duì)揮發(fā)油提取效果的影響料液比分別為15，16，18，110，提取1次，考察料液比對(duì)揮發(fā)油提取效果的影響，測(cè)得吸收度依次為：0.316，0.443，0.337，0.258。由測(cè)定結(jié)果可見，料液比16吸收度最大。且變化顯著。3.4揮發(fā)油搜集量對(duì)揮發(fā)油提取效果的影響分別搜集100，200，300l蒸餾液，考察揮發(fā)油搜集量對(duì)揮發(fā)油提取效果的影響，測(cè)得吸收度依次為：0.454，0.507，0.596。由測(cè)定結(jié)果可知。隨著搜集量的增多，吸收度逐漸增大，但增加趨勢(shì)不顯著。3.5乙醇濃度對(duì)柴胡皂苷提取效果的影

8、響分別以95%，75%，60%，45%乙醇，料液比為：16，提取柴胡皂苷。考察不同乙醇濃度對(duì)柴胡皂苷提取效果的影響，柴胡皂苷a含量依次為：0.20%，0.15%，0.12%，0.12%。由測(cè)定結(jié)果可知，柴胡皂苷提取率隨乙醇濃度的降低而降低。在95%乙醇濃度時(shí)最大。且變化較顯著。因此選用95%乙醇提齲3.6pH值對(duì)柴胡皂苷提取效果的影響分別用0，5%，10%，15%的氨水95%乙醇液提取皂苷。考察pH值對(duì)柴胡皂苷提取效果的影響，柴胡皂苷a含量依次為：0.20%，0.25%，0.24%，0.24%。由測(cè)定結(jié)果可知，堿性乙醇提取效果比較好，含5%10%氨水95%乙醇條件下提取液中柴胡皂苷a變化不顯著

9、，因此選用含5%氨水。3.7提取時(shí)間對(duì)柴胡皂苷提取效果的影響用95%乙醇分別在0.5，1，2，3h提取皂苷。考察提取時(shí)間對(duì)皂苷提取效果的影響。柴胡皂苷a含量依次為：0.20%，0.25%，0.20%，0.20%。由測(cè)定結(jié)果可知，提取1h時(shí)提取率最大。提取時(shí)間再長(zhǎng)提取率就逐漸下降。3.8料液比對(duì)柴胡皂苷提取效果的影響在10，8，6，5，3倍不同料液比條件下回流提取柴胡皂苷。考察料液比對(duì)柴胡皂苷提取效果的影響。柴胡皂苷a含量依次為：0.15%，0.15%，0.20%，0.21%，0.14%。由測(cè)定結(jié)果可知，料液比為在56倍時(shí)提取率最大。由表2和表3可知，柴胡揮發(fā)油搜集量的極差最大，其次是料液比和柴

10、胡皂苷提取時(shí)間，故對(duì)于柴胡提取效果影響的大小順序?yàn)锽DA，由于A和影響不顯著，故綜合考慮，選擇最正確提取方案為A1B11D3，即40浸漬，搜集100l揮發(fā)油，8倍量含5%氨水的95%乙醇提取1h。3.10最正確方案的驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)取50g柴胡粗粉置500l圓底燒瓶中，在最正確提取條件下提齲重復(fù)兩次。結(jié)果見表4。表4驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果略由表4可見，采用優(yōu)化最正確工藝提取有效成分柴胡揮發(fā)油和皂苷，其揮發(fā)油吸收度和柴胡皂苷a的含量都較高，且工藝條件穩(wěn)定可靠，重復(fù)性好。4討論柴胡揮發(fā)油和柴胡皂苷為柴胡的主要有效成分，兩者的提取是較為矛盾的。據(jù)文獻(xiàn)資料，柴胡皂苷在6h內(nèi)穩(wěn)定，而要完全提取揮發(fā)油那么要較長(zhǎng)時(shí)間。這將導(dǎo)

11、致柴胡皂苷的分解、降解等一系列不穩(wěn)定的反響，使柴胡皂苷的含量降低。因此要同時(shí)兼顧揮發(fā)油和柴胡皂苷的提取，可考慮采用水蒸氣蒸餾法提取柴胡揮發(fā)油，采用堿性醇提工藝代替?zhèn)鹘y(tǒng)的水提工藝提取柴胡皂苷。且在提取過程中發(fā)現(xiàn)，柴胡皂苷a受熱容易分解，隨著加熱時(shí)間增長(zhǎng)，含量逐漸減少，因此在各加熱環(huán)節(jié)，如提取，濃縮，枯燥過程中應(yīng)盡量采用低溫，以減少柴胡皂苷a的損失。中藥成分復(fù)雜,應(yīng)綜合考慮各有效成分的性質(zhì)及其在制備過程中的變化,以保證制劑的質(zhì)量和療效。據(jù)文獻(xiàn)資料，柴胡中含柴胡皂苷a大約在0.2%0.4%，從本實(shí)驗(yàn)最正確工藝提取液中測(cè)得柴胡中柴胡皂苷a的含量為0.32%，因此本工藝提取效果較好。至于揮發(fā)油的含量，各種文獻(xiàn)所得結(jié)果不盡一樣，甚至