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文檔簡介

1、乳酸菌凍干粉制作方案材料1.1菌種乳酸菌1.2培養基MRS培養基：蛋白腺10g、酵母膏5g、牛肉膏10g、葡萄糖20g、磷酸氫二鉀2g、檸檬酸三氨lg、乙酸鈉5g、硫酸鎂0.8g、硫酸鐳0.25g、吐溫801ml、PH值6.26.4、用蒸憾水定容至1000ml,U5-120C滅菌30min。計數培養基：1LMRS培養基加入瓊脂20g技術路線主要試劑和儀器3.1試劑奶粉、甘露醇、蛋白月東、酵母膏、牛肉膏、葡萄糖、磷酸氫二鉀、檸檬酸三氨、乙酸鈉、硫酸鎂、硫酸鐳、吐溫、蒸飾水、生理鹽水等。32儀器高壓滅菌鍋、培養箱、無菌操作臺、高速離心機、發酵罐、真空冷凍離心機、菌液瓶等具體實施方案4.1乳桿菌活化

2、將實驗室冰箱保藏的徳氏乳桿菌用100ml滅菌的MRS液體培養基進行第一次活化，活化溫度37C,24h后平板檢測純度和活菌數，檢測達標后再將上述100ml菌液全部轉入至4001111滅菌MRS液體培養基進行第二次活化，24h后平板檢測純度和活菌數，檢測達標后轉至40L發酵罐中進行擴大培養48ho4.2活菌數的測定菌種經活化、擴培后，接入MRS液體培養基培養，待測活菌數時，取0.5mL發酵液加入至4.5mL滅菌的生理鹽水中，依次做10倍系列稀釋，選取10工、IO、10。三個稀釋倍數，吸取0.2mL稀釋液注入無菌培養皿中，傾注法加入15mL左右的計數培養基混勻，每個稀釋度做三個平行培養皿。待培養基凝固后，倒置放入37C恒溫培養箱中，培養48h,選取菌落數在30-300之間的培養皿計菌落數。4.3菌體收集利用超速離心機對發酵后的菌液進行離心，在轉速為4000-600017111111的條件下離心10mm,去上清收集沉積物。4.4菌泥冷凍干燥將收集到的沉積物加入至復配保護劑，用振蕩器混勻，制成菌懸液。再將其盛入冷凍平皿中，隨后先置4C冰箱平衡30mm后，移入-30C冰箱60min,然后置-80C冰箱60min,再在冷凍真空干燥機上冷凍干燥14h,密封保存于4C冰箱中。根據實驗設計，真空冷凍干燥條件設置凍干儀腔體溫度為-60C-70C,壓力為0.006Pa,時間

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