1、關于細胞表位的研究第一張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月第一部分T細胞表位的基本概念第二張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月2抗原結合價 Antigenic valence 能與抗體分子結合的抗原表位的總數(shù)。半抗原 單價抗原完全抗原 多價抗原表位 Epitope 抗原決定基 Antigenic Determinant 決定抗原特異性的特殊化學基團，是與抗體或抗原受體結合的基本結構單位。1、抗原表位的概念第三張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月32、抗原表位的類型順序表位（sequential epitope)/線性表位 由連續(xù)性線性排列的短肽構成。構象表位(conformatio

2、ntial epitope)/非線性表位 短肽或多糖殘基在序列上不連續(xù)性排列，在空間上形成特定的構象。第四張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月4T細胞表位與B細胞表位第五張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月53、共同抗原表位(common epitope)不同抗原間含有的相同或相似的表位。交叉反應(cross-reaction)抗體或致敏淋巴細胞對具有相同或相似表位的不同抗原的反應。第六張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月6第七張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月MHC class Ipeptides of 8-10 amino acidsMHC class IIpeptide

3、s of 13 amino acidsb2-Ma-chainPeptidea-chainb-chainPeptide4.MHC分子和抗原肽的相互作用第八張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月 抗原肽和MHC相互作用的分子基礎 * 錨定殘基（anchor residue） 在抗原肽-MHC分子復合物中，抗原肽的兩個或兩個以上專司和MHC分子結合的氨基酸殘基稱為錨定殘基。 第九張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月YIMHC 分子YIMHC 分子PSASIKSPSAIKS共用模體第十張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月MHC I 類分子胞外區(qū)的結構第十一張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年

4、6月抗原肽和HLA相互作用的分子基礎MHC限制性;CD4與CD8表位的差別；人和其他動物的差別第十二張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月第十三張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月13T細胞表位的研究方法1.多肽片段的來源降解；表達；人工合成2. MHC分子的結合直接結合；預測3. 抗原特異性T細胞的來源感染或者免疫動物或病人篩選方法細胞系的建立4. 檢測指標活化；增殖；細胞因子；殺傷作用第十四張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月14T細胞表位的研究意義1.檢測刺激細胞使用Tetramer技術 MHC2. 疫苗表位疫苗3. 治療第十五張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月15第二部

5、分SARS-CoV S蛋白T細胞表位的研究第十六張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月16第十七張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月171. SARS-CoV S DNA 疫苗Zhi-yong Yang (NIH) Nature. 2004, 428 (1 )第十八張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月2.免疫方法8w female BALB/c primeat week 050ug DNAboost twiceat week 3, 62-3wafter prime4-6w after boost1-2w afterboostto observe the effect of prime

6、 immunizationto observe the effect of boost immunizationto observe the effect of long term immunization:mouse sacrificed50ug DNAi.mi.m第十九張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月3. 單細胞懸液的準備 淋巴結脾肺剪碎（消化），研磨，200目篩網(wǎng)過濾，裂解紅細胞，2106/ ml 第二十張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月4. SARS-CoV S蛋白多肽169條, 17-19aa, 10aa重疊 (NIH NIAID VRC)P1 S1-17P2 S8-2

7、5P3 S16-22P168 S1200-1216P169 S1207-1255第二十一張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月1. S抗原刺激以后IFN- （圖A）和IL-2的產(chǎn)生（圖B） 結 果 與 討 論The empty circles represent the results in the absence of peptides and solid circles represent the results in the presence of peptides.第二十二張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月第二十三張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月23Fig. 2. Ve

8、rification of potential SARS CoV S epitopes Potential SARS CoV S epitopes P50, P51, P59 and P60 in pool 3, and P141, P144, P151 and P152 in pool 8 were used to stimulate splenocytes from SARS CoV S DNA immunized BALB/c mice. IFN- production was detected by ELISA (A) and ELISPOT (B), respectively. Ea

9、ch symbol represents the results of an individual experiment (n=37). In addition, intracellular cytokine staining (C) was performed to determine CD4+ or CD8+ T cell population. “0” represents the non-peptide stimulated control. Numbers at the corner in each sample represent the percentage of positiv

10、e cells. Representative results of three independent experiments were shown. 第二十四張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月24Fig. 3. Identification of new synthetic 10aa CD4 and CD8 epitopes The overlapped amino acids between P50 and P51 (N50), and between P59 and P60 (N60) were synthesized. Peptides N50 and N60 were use

11、d to stimulate splenocytes from SARS CoV S DNA vaccine-immunized mice. P50 and P60 were used as positive controls, respectively. ELISA (A) and ELISPOT (B) were performed as described above. Furthermore, N50 and 60 were serial diluted to stimulate splenocytes from the DNA immunized mice, ELISPOT (C)

12、was performed to detect numbers of antigen specific IFN- producing cells. Experiments were carried out in duplicate and representative results were shown. “0” represents non-peptide-cultured negative control.第二十五張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月25Fig. 4. Synergistic roles of peptide N50 and N60 in H-2b and H-2d

13、restricted miceBALB/c and C57BL/6 mice were immunized by SARS CoV S DNA vaccine as described previously. 1-2 weeks after final boost vaccination, N50 and N60 were administrated alone or combined to stimulate splenocytes from both kinds of heterogeneous mice at the same times. ELISA (A), ELISPOT (B)

14、and FACS (C) were performed to detect IFN-. “0” represents non-peptide contained negative control. Experiments were done in duplicate and representative results were shown.第二十六張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月26第二十七張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月27Fig. 6. N50 and N60 can elicit antigen specific immune responses in vivoBALB

15、/c mice were primed twice with the DNA vaccines. 3 weeks later, mice were divided into four groups (n=4), injected by peptides (N50 and N60, 50 g of each) plus CpG ODN (25 g), peptide, CpG ODN and PBS, respectively. 1-2 weeks after boost vaccination, single cell suspensions were prepared from lymph

16、node (LN), spleen and lung. Cells were stimulated by peptide N50 and N60 plus anti-CD28. ELISA (A) and ELISPOT (B) were performed to detect the antigen specific IFN- levels and cells in each group. FACS was performed to detect the frequencies of antigen specific IFN- and/or IL-2 producing cells in C

17、D4+ (C) and CD8+ (D) T cell populations, respectively. Experiments were done in duplicate and representative results were shown.第二十八張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月28第二十九張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月29第三十張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月30第三部分SARS-CoV S蛋白CTL表位殘基的初步研究第三十一張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月第三十二張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月32錨定位殘基第三十三張，PPT共五十

18、頁，創(chuàng)作于2022年6月第三十四張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月34第三十五張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月35第三十六張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月36第三十七張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月37第三十八張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月38第三十九張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月39第四十張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月40第四十一張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月41第四部分SARS-CoV S蛋白B細胞表位的研究第四十二張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月42第四十三張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月43第四十四張，PPT共五十頁，創(chuàng)作于2022年6月44圖2 含B細胞表位的多肽組的篩選Fig.2 Scanning peptide pool which contained potential S protein B cell epitope 第四十五張，PP