1、附件2飲料、茶葉及相關制品中二氟尼柳等18種化合物的測定BJS 2017141范圍本方法規定了飲料、茶葉及相關制品中二氟尼柳等18種抗風濕類化合物的液相色譜 -串聯質譜測定方法。本方法適用于飲料、茶葉及相關制品中二氟尼柳等18種抗風濕類化合物的測定，其他基質可參照本方法定性檢測。2原理試樣經甲醇水溶液提取，稀釋后采用液相色譜-串聯質譜儀檢測，外標法定量。3試劑和材料除另有規定外，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682規定的一級水。試劑乙睛（CH3CN）:色譜純。甲醇（CH3OH）:色譜純。甲酸（HCOOH ）:色譜純。乙酸鏤（CH3COONH4）:優級純或相當者。溶液配制含0.05

2、%甲酸的2 mmol/L乙酸鏤溶液：稱取0.154 g乙酸鏤（3.1.4）,加入適量水溶解，再 加入0.5 mL甲酸（3.1.3）,用水定容至 1000mL。甲醇水溶液（4+1）:準確量取 400 mL甲醇（3.1.2）和100 mL水，混勻后備用。標準品二氟尼柳、美洛昔康、舒林酸、口比羅昔康、醋氯芬酸、貝諾酯、依托考昔、秦普生、芬布芬、奧沙普秦、尼美舒利、氟比洛芬、雙氯芬酸鈉、依托度酸、口引味美辛、蔡丁美酮、非普拉宗、塞 來昔布標準品的中文名稱、英文名稱、 CAS登錄號、分子式、相對分子質量詳見附錄A中的表A.1 ,各標準品純度均 95%標準溶液的配制標準儲備液（500科g/mL）準確稱取各

3、標準品（3.3） 50.0 mg （精確至0.0001 g）,分別置于 100 mL容量瓶中，美洛昔康加5mL水溶解，再用甲醇（3.1.2）稀釋至刻度，其余標準品用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，配制成濃度各為500 g /mL標準儲備液，-20 C保存，有效期3個月。混合標準中間液 A （1 g/mL :分別準確吸取 0.2 mL美洛昔康、舒林酸、口比羅昔康、貝 諾酯、依托考昔、奧沙普秦、雙氯芬酸鈉、依托度酸、非普拉宗各標準儲備溶液（3.4.1 ）,置于同一 100 mL容量瓶中，用甲醇（3.1.2）稀釋至刻度，搖勻，配制成濃度為1 g/mll勺混合標準中間液A, -20c保存，有效期1個月。混

4、合標準中間液 B （5 g/mL :分別準確吸取1.0 mL二氟尼柳、醋氯芬酸、蔡普生、芬 布芬、尼美舒利、氟比洛芬、口引味美辛、蔡丁美酮、塞來昔布各標準儲備溶液（3.4.1）,置于同一 100 mL容量瓶中，用甲醇（3.1.2）稀釋至刻度，搖勻，配制成濃度為5 g/mM混合標準中間液B, -20 C保存，有效期1個月。混合標準系列工作溶液：分別準確吸取混合標準中間液A和B適量，置于同一容量瓶中，用甲醇（3.1.2）稀釋配制成系列標準工作溶液S1S5。混合標準中間液 A （3.4.2）中各化合物濃度為 2ng/mL、4ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL、40 ng/mL ;混合標準

5、中間液 B （3.4.3）中各化合物 濃度為10 ng/mL、20 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL、200ng/mL ;臨用新制或依儀器響應情況配制 適當濃度的混合標準工作溶液。微孔濾膜：0.22 m,有機相。4儀器和設備高效液相色譜-串聯質譜儀，配有電噴霧離子源（ ESI源）。粉碎機。電子天平：感量分別為0.0001 g和0.01 g。超聲波水浴。5試樣制備飲料充分混勻，直接取用。茶葉及相關制品取適量有代表性的試樣，粉碎機粉碎后過40目篩，裝入潔凈容器中，密封并標記。6分析步驟樣品提取飲料準確稱取1 g （精確至0.01 g）試樣置于50 mL容量瓶中，加入20 mL甲醇-

6、水溶液（4+1） （3.2.2）, 搖勻（固體飲料需充分溶解），再用甲醇 -水溶1夜（4+1） （3.2.2）定容至刻度，混勻，經 0.22 m 濾膜過濾，取濾液，根據實際濃度適當的稀釋至工作曲線線性范圍內，供高效液相色譜-串聯質譜測定。茶葉及相關制品準確稱取1 g （精確至0.01 g）試樣置于25 mL容量瓶中，加入20 mL甲醇-水溶液（4+1） （3.2.2）, 搖勻，超聲30 min,冷卻至室溫后，用甲醇-水溶液（4+1） （3.2.2）定容至刻度，混勻靜置10 min, 準確吸取2 mL上清液至10 mL容量瓶中，用甲醇-水溶液（4+1） （ 3.2.2）定容至刻度，混勻，經0.2

7、2 m濾膜過濾，取濾液，根據實際濃度適當的稀釋至工作曲線線性范圍內，供高效液相色譜-串聯質譜測定。測定儀器參考條件液相色譜條件a）色譜柱：C18柱，100 mnrX 2.1 mm ,粒徑2.2 m,或性能相當者。b）流動相：A為乙睛（3.1.1）, B為含0.05 %甲酸的2 mmol/L乙酸錢溶液（3.2.1）,梯度洗脫程 序見表1。c）流速：0.3 mL/min。d）柱溫：35 C。e）進樣量：2表1梯度洗脫程序時間(min)流動相A （%）流動相B （%）05951595119551395514595165956.2.1.2質譜條件 a）離子源：電噴霧離子源（ESI源）。b）檢測方式：多

8、反應監測（ MRM ）。c）掃描方式：正離子模式和負離子模式。d）氣簾氣（CUR）、霧化氣（GS1）、輔助氣（GS2）、碰撞氣（CAD）均為高純氮氣或其他合適氣體，使用前應調節相應參數使質譜靈敏度達到檢測要求，電噴霧電壓（IS）、去簇電壓（DP）、碰撞能量（CE）等參數使用前應優化至最佳靈敏度，監測離子對和定量離子對等信息詳見附錄Bo6.2.2 定性測定按照上述條件測定試樣和混合標準工作液，如果試樣中的質量色譜峰保留時間與混合標準工作液中的某種組分一致（變化范圍在上.5%之內）；試樣中定性離子對的相對豐度與濃度相當的混合標準工作液的相對豐度一致，相對豐度（k）偏差不超過表2規定的范圍，則可判定

9、為試樣中存在該組分。表2定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差相對離子豐度（%）k50%50喉 k20%20喉 k10%k 10%允許的相對偏差（%）+20+25i3006.2.3定量測定將混合標準系列工作溶液（3.4.4）按儀器參考條件（6.2.1）進行測定。以混合標準系列工作 溶液的濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標繪制標準工作曲線。若試樣檢出與混合標準系列工作溶 液一致的化合物，根據標準工作曲線按外標法以峰面積計算得到其含量。二氟尼柳等18種標準物質色譜圖見附錄C。7結果計算結果按式（1）計算:(1)c Vm 1000式中:X 試樣中各待測物的含量，單位為毫克每千克（ mg/kg ）;c 一從

10、標準工作曲線中讀出的供試品溶液中各待測組分的濃度，單位為納克每毫升 （ng/mL）;V 一試樣溶液最終定容體積，單位為毫升（ mL）;m 稱樣量，單位為克（g）;K 一 試樣制備過程中的稀釋倍數。計算結果以重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示，結果保留三位有效數8檢測方法的靈敏度、準確度、精密度靈敏度當飲料稱樣量為1 g,定容體積為50 mL ,本方法中各化合物的定量限如下：美洛昔康、舒林酸、口比羅昔康、貝諾酯、依托考昔、奧沙普秦、雙氯芬酸鈉、依托度酸、非 普拉宗定量限為0.2 mg/kg;二氟尼柳、醋氯芬酸、蔡普生、芬布芬、尼美舒利、氟比洛芬、口引味 美辛、蔡丁美酮、塞來昔布定

11、量限為1.0 mg/kg。當茶葉及相關制品稱樣量為1 g,定容體積為125 mL,本方法中各化合物的定量限如下：美洛昔康、舒林酸、口比羅昔康、貝諾酯、依托考昔、奧沙普秦、雙氯芬酸鈉、依托度酸、非 普拉宗定量限為0.5 mg/kg;二氟尼柳、醋氯芬酸、蔡普生、芬布芬、尼美舒利、氟比洛芬、口引味 美辛、蔡丁美酮、塞來昔布定量限為2.5 mg/kg。準確度本方法在0.225 mg/kg添加濃度范圍內，回收率為71%116%。精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的15 %。附錄A二氟尼柳等18種化合物相關信息表A.1 18種化合物的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分

12、子式、相對分子質量序號中文名稱英文名稱CAS登錄號分子式相對分子質量1二氟尼柳Diflunisal22494-42-4C13H8F2O3250.22美洛昔康Meloxicam71125-38-7Ci4H13N3O4S2351.43舒林酸Sulindac38194-50-2C20H17FO3s356.414叱羅昔康Piroxicam36322-90-4C15H13N3O4S331.355醋氯芬酸Aceclofenac89796-99-6C16H13Cl2NO4354.186貝諾酯Benorilate5003-48-5C17H15NO5313.37依托考昔Etoricoxib202409-33-4

13、C18H15CN2O2S358.848蔡普生Naproxen22204-53-1C14H14O3230.269芬布芬Fenbufen36330-85-5C16H14O3254.2810奧沙普秦Oxaprozin21256-18-8C18H15NO 3293.3211尼美舒利Nimesulide51803-78-2C13H12N2O5S308.3112氟比洛芬Flurbiprofen5104-49-4C15H13FO2244.2613雙氯芬酸鈉Diclofenac sodium15307-79-6C14H10Cl2NNaO2318.1314依托度酸Etodolac41340-25-4C17H21

14、NO 3287.3515口引噪美辛Indometacin53-86-1C19H16ClNO4357.7916蔡丁美酮Nabumetone42924-53-8C15H16O2228.2917非普拉宗Feprazone30748-29-9C20H20N2O2320.3918塞來昔布Celecoxib169590-42-5C17H14F3N3O2S381.37AA附錄B參考質譜條件a)離子源：電噴霧離子源(ESI源)；b)檢測方式：多反應監測(MRM );c)掃描方式：正離子模式和負離子模式；d)電噴霧電壓(IS): 5500 V (ES+); -4500 V (ESI-);e)氣簾氣(CUR) :

15、 35 psi;f)霧化器(GS1): 55 psi;g)輔助氣(GS2): 55 psi;h)離子源溫度(TEM ) : 500 C。表B.1二氟尼柳等18種化合物定性、定量離子和質譜分析參數序號化合物名 稱電離方式母離子(m/z)子離子(m/z)去簇電壓(V)碰撞能量(V)保留時間(min)1二氟尼柳ESI-248.9*204.960278.19156.9452美洛昔康ESI+352*115.080228.41141263舒林酸ESI+357.1*233.1105668.58340.1304叱羅昔康ESI+332164.0*80258.61121285醋氯芬酸ESI-354*74.9202

16、58.93251.9306貝諾酯ESI+314.1*121.168208.96272.1117依托考昔ESI+359*280.1160429.12252.1618蔡普生ESI-229*170.010229.4218589芬布芬ESI+255.1*181.150349.62237.11510奧沙普秦ESI+294.1103.1*90429.93276.12311尼美舒利ESI-306.9197.9*603610.15228.92412氟比諾芬ESI-243*198.9101510.151792013雙氯芬酸 鈉ESI-295.9*251.9451610.26213.93014依托度酸ESI-28

17、6*242.0702310.282123315口引噪美辛ESI-356*296.9202710.42311.91316蔡丁美酮ESI+229.1*128.1705510.71171.12217非普拉宗ESI+321.1*265.1802010.95253.12318塞來昔布ESI+382*362.11104111.04282.150* 、一、 .定量離子對。注：(1)方法提供的監測離子對等測定條件為推薦條件，各實驗室可根據所配置儀器的具體情況作出適當調整;在樣品基質有測定干擾的情況下，可選用其他監測離子對。(2)為提高檢測靈敏度，可根據保留時間分段監測各化合物。附錄C二氟尼柳等18種標準物質色

18、譜圖Max. 3 .4 e6 c ps.720130140T5-016.0圖C.118種標準物質總離子流色譜圖S03- K微陽扁叱但由小遍”融分Aitsdil.業ifle 由 Height 51Re& ftT: R 四麗5秒柒fe加面加F做*巾j52叼1150 -flW. Aiea: 3.N1 電 Hetghi: &1I2H 后二夏4 fHMSTD-3-打訥曲u 做*g J兄密1 -fl-l4e- Area: 3.5eS. fittght: 1.0iSe6r RT: &5Shm鵬8.19T5 - - - -時 占 法 前i. MJ .1 Hv3.舒林酸1.二氟尼柳2.美洛昔康STD-3- 5曲蜘訕的?3吐嘴屈0/蟻。-廿即.4rMe L74 融 fit)ght.4,Xlefr ffT:&tjiw4ei篇5W-J-埠融mM 毒加，理/原.Aiea:工外加承 R7: &S3hm4eJ卜$砂柒 栩而出 陰由辿柳加 51 - D.描IAlta: 5 癡5.而岫1:2皿 RT;&.%hmM1 乜 Ti *1 Av 看討u=2SUBIIU-2SUBIIU-4. 口比羅昔康5.醋氯芬酸6.貝諾酯且6二里=金 m=z=DM1015lime, mir7.依托考昔8.蔡普