1、培養基制備、保存、質量控制結核病國家參比室1內容培養基制備需要的儀器培養基制備需要的試劑培養基制備步驟和方法培養基制備注意事項2培養基制備需要的儀器、耗材l 天平(靈敏度為0.01g)、稱量匙或勺、稱量紙l 高壓滅菌器或電爐l 蒸汽凝固器l PH計l 簡易分裝裝置l 培養管（螺旋蓋）l 打蛋器l 廣口瓶、錐形瓶l 鑷子l 消毒紗布、漏斗（過濾混勻的雞蛋）l 水浴3 酸性羅氏（Lowenstein-Jensen）培養基 天門冬素 3.6g 或谷氨酸鈉（純度99%以上）7.2gKH2PO4 14.0gMgSO4.7H2O 0.24g枸櫞酸鎂 0.6g丙三醇 12ml蒸餾水 600ml新鮮雞卵液 1

2、000ml2%孔雀綠 20ml培 養 基 組 份4培養基制備需要的試劑2% 孔雀綠溶液，單獨配制 n孔雀綠染料2 g滅菌去離子水100 ml 使用無菌技術溶解染料于滅菌去離子水中（放置于37C溫箱中小時）或者在水浴中加熱。配制好的溶液儲存于深色瓶中。此溶液長時間放置并不穩定，如果發生沉淀，應丟棄并重新配制。 5培養基制備需要的試劑l 雞蛋應該新鮮（不超過天），母雞喂養時飼料不應使用抗生素。選擇中等大小的雞蛋，蛋白、蛋黃均衡的，即平均每升雞蛋大約個。6 培養基使用的注意事項： 保存：4、密閉、直立。 1個月內使用。 使用前恢復至室溫，并檢查污染狀況。 在斜面的背面標注痰標本號、病人姓名、接種日期

3、。 每份痰標本接種2支培養基。 7培養基制備步驟和方法清潔、消毒桌面。用肥皂水清潔雞蛋，并用70%乙醇擦洗，晾干。雞蛋打入滅菌的容器內，控制新鮮度。將整個雞蛋轉入容器內進行勻化通過無菌的棉紗布過濾。加入鹽溶液。加入孔雀綠。緩慢混合所有的成分，避免氣泡、混勻。在培養管中分裝6-8 ml液體。8培養基制備步驟和方法將試管放在架子上，并保持足夠的傾斜度，放在蒸汽凝固器中85C 50分鐘。將管子從蒸汽凝固器，并作標記。管子到達室溫時旋緊螺旋蓋（否則冷凝將會產生更多的水）。將培養管直立放置于冰箱中，最好放在塑料袋或者容器內。記錄批號的信息（看下邊信息）。 9培養基制備注意事項培養基制備最好在專用“培養基

4、制備間”內進行，制備培養基時應有相應制作過程的記錄。 培養基制備前“培養基制備間”的空氣、臺面等應進行消毒。 制備培養基的所有物品用具應高壓滅菌。10培養基制備注意事項無菌試驗后，雖然沒有發現有可見菌落出現，但培養基已經變藍色或變黃色，與藍綠色或黃綠色有明顯區別時，應視為污染棄去。每批培養基應作無菌試驗。 11質量控制內容顏色質地 濕度 勻質性無菌性敏感性12顏色同一批制作的培養基如果呈現不同的顏色可能是由于混勻得不好或者培養管中出現金屬沉渣。若顏色為非常深的綠色可能是由于孔雀綠過多或者PH值太低（呈酸性）。黃色的培養基表明孔雀綠質量不好或者PH值太高（呈堿性）。凝固的培養基顏色變淺還可能是由

5、于過高的溫度所致。 13質地如果培養基液化或者很容易碎裂，可能是凝固溫度太低了。可以隨機抽取一批培養基中的1-2支培養管向手上敲打檢測。質地較差的培養基不適合于培養接種。 14濕度培養管的底部應該有一些凝固水。然而，過多的水表明在凝固后過早的將螺旋蓋旋緊或者培養基的成分不標準。當培養管移動時培養基應該不能夠轉動。 15勻質性如果凝固過程中培養基中有小泡，可能是由于培養基凝固溫度過高，質量受到了影響。培養基中出現了塊狀表明勻質性較差。 16無菌性每批新制作的培養基要進行無菌試驗。36C孵育2天后應該沒有細菌生長。 17培養基保存為了避免剩余過多過期的培養基，培養基應該儲存在非常潔凈的、有一定濕度的地方，最好是在4C冰箱內，保存期限不超過2個月。標記應該顯示：l 培養基的名稱l 制作者的名稱（實驗室標示）l 批號或者