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文檔簡介

1、基礎化妝品功效評價按照化妝品衛生規范中的定義,化妝品是以涂抹、噴灑或其他類似方法,施于人體表面任何部位(皮膚、毛發、指甲、口唇、口腔黏膜等),以達到清潔、消除不良氣味、護膚、美容和修飾目的的產品。化妝品大致可分為以下五類:1,清潔化妝品;2,毛發的化妝品;3,基礎化妝品;4,美容化妝品;5,療傷化妝品。本文主要討論基礎化妝品的相關內容,現在市面上常見的基礎化妝品有兩類:保濕類化妝品和美白類化妝品。保濕化妝品保濕化妝品是指能夠增加表皮含水量,幫助皮膚屏障功能恢復,,減輕皮膚干燥、脫屑,讓粗糙的皮膚變得光滑、柔軟的一類護膚品。為正確地了解化妝品的保濕功能,化妝品科學家和皮膚科醫師通過長期的研究找到

2、了許多皮膚保濕功能的評價方法,其中有體外法、人體主觀評判法,也有借助各種儀器的非損傷性人體測量法,包括電子的、微波的、機械的、熱力學的、掃描電鏡和光譜學等。為什么需要保濕化妝品?皮膚表皮的角質層具有吸水、屏障功能角質層中所含有的氨基酸類、乳酸鹽及糖類等使角質層保持一定的含水量維持皮膚的濕潤。皮膚的外觀與角質層的水分含量有關,正常的皮膚角質層通常含有10%30%的水分以維持皮膚的柔軟和彈性。水分減少時,皮膚不再嬌嫩并且變得干燥水分減到10%以下時,肌膚的張力與光澤會消失,角質層也比較容易剝落皮膚會變得干枯暗啞,皺紋亦因而產生。要維持肌膚的濕潤,除要補充皮脂膜的不足之外最重要的在于促使表皮角質細胞

3、的健全強化真皮網組織的結構增進兩者的保水功能。另外保持皮膚濕潤還是改善皮膚生理環境、促進皮膚新陳代謝的先決條件。因此,保濕劑不僅是護膚類化妝品的必備原料,還是決定一種化妝品品質優劣的關鍵因素。皮膚保濕原理健康的皮膚應當是光滑滋潤富有彈性的,這在很大程度上歸功于皮膚內的水分,而這些外觀標志與皮膚本身保濕系統的功能有關。保濕系統的功能就在于維持皮膚一定的含水量,抵抗由內外因素對皮膚所造成的蒸發干燥、甚至脆裂等損害。人體皮膚中的天然保濕系統主要由水、脂類、天然保濕因子(NMF組成。脂類呈層狀填充于角質層細胞之間,主要作用是形成水屏障,防止水分丟失。大多脂類為非極性物質,可以限制水分在細胞內外及細胞間

4、流動。與皮膚屏障功能相關的脂質包括神經鞘脂、游離膽固醇和游離脂肪酸。在有活性的表皮中磷脂含量豐富,由基底層向角質層分化過程中,神經酰胺、膽固醇、脂肪酸的含量逐漸增高,脂質分布也發生了變化,顆粒層中脂質聚集于板層顆粒中,顆粒層細胞轉化為角質層細胞時這些脂質被排出并填充于細胞間隙,形成了防止水分丟失的屏障。當各種原因所致脂類缺乏時,其水屏障作用減弱,經表皮水分流失(TEWL就會增多,出現皮膚干燥脫屑。NM笈存在于角質層內能與水結合的一些低分子量物質的總稱,包括氨基酸、吡咯烷酮羧酸、乳酸鹽、尿素、胺、尿酸、葡糖胺、檸檬酸鹽、鈉、鉀、鈣、鎂、磷酸鹽、氯、糖、有機酸、肽類及其他未知的物質。NM由到角質層

5、細胞基質的10%通過滲透壓來吸引水分子,和NMFg合的水是角質層中較固定的一部分,含量變化較大的那部分水與角質層選擇性的通透及脂質屏障有關!而通透性又與角質細胞間脂質及板層結構的完整性及特點相關。一旦表皮屏障功能受損,TEWL就會增加,而這一信號傳至細胞間就激發了表皮重新濕潤(remois-turizing)的過程,TEWL為1%時就足以激發表皮屏障修復,表皮重新濕潤包括4個步驟:開始屏障修復;改變表皮水分分布;開始真皮水分滲透至表皮;合成細胞間脂質。這一機制可以解釋在傷口修復過程中外敷能通透水氣的封閉劑的作用優于不能通透水汽的封閉劑,因為不能通透水汽,TEWM,這樣就不能形成信號激發修復開始

6、。通過表皮屏障功能的修復,可使皮膚保濕系統功能恢復正常,保持皮膚所含水分。皮膚角質層的水分,對維持皮膚健康、防御從外界受到的各種刺激、防止皮膚老化以及滋潤、美容皮膚都具有重要意義。要使皮膚光滑、柔軟和富有彈性,必須使角質層的含水量保持最佳狀態,一般認為含水量應在10%20%之間,低于10%皮膚就會干燥、粗糙甚至皸裂。保濕類化妝品的組成成分及作用機理保濕是個人護理用品的一項基本功能,特別是護膚類產品顯得尤其重要。所謂保濕是通過防止皮膚內水分的丟失和吸收外界環境的水分來達到保持皮膚內含有一定水分的目的。保濕劑用以模擬人體皮膚中由油、水、NMF&成的天然保濕系統,作用在于延緩水分丟失,增加真皮、表皮

7、水分滲透,為皮膚暫時提供保護,減少損傷,促進修復過程。作為保濕化妝品的原料應具備以下特性:吸濕能力強、持久,低粘度,無色、無味、無毒、無刺激性、無侵蝕性,與其它物質相容性好,不易氧化,等等。另外,開發保濕化妝品最好選用在正常皮膚中存在的天然保濕因子(NMF為保濕劑的原料,這樣易于為生物體所接受。皮膚保濕劑由主要成分以及其他輔助成分組成。主要成分包括封閉劑、吸濕劑、親水基質、防光劑和一些特殊添加成分,而輔助成分有乳化劑、防腐劑、香料、脂質體等。(一)封閉劑:可以在皮膚表面形成封閉薄膜,用以減少TEWL,成分主要為油脂類。保濕劑中常用的封閉劑成分:油類和蠟類:石蠟油、礦物油、石蠟、角鯊烷。硅油:二

8、甲聚硅氧烷、環聚硅氧烷。蔬菜和動物脂肪:可可脂、羊毛脂。脂肪醇:羊毛脂醇、軟脂醇。蠟脂:羊毛脂、蜂蠟、硬脂酸酯。脂肪酸:羊毛脂酸、硬脂酸。固醇:膽固醇。蔬菜蠟:棕楣仁蠟、小燭樹蠟。磷脂類卵磷脂。多元醇:丙二醇。其中石蠟油是最有效的封閉劑之一;而羊毛脂因為價格較貴、氣味特殊以及有潛在致接觸性皮炎作用而應用較少;硅油是一種較新的制劑,不油膩、基本無味、較少引發過敏及痤瘡,故市售保濕劑中應用較多。(二)吸濕劑:吸濕劑的作用機制是從真皮及外界環境中吸收水分,保存于角質層中。如果讓吸濕劑從外界環境中吸收水分,皮膚周圍相對濕度至少達到70%,而在實際中相對濕度是不能達到這一水平的,故局部外用的吸濕劑大多是

9、從真皮而非環境中吸收水分。吸濕劑主要包括:甘油、蜂蜜、乳酸鈉、尿素、丙二醇、山梨糖醇、吡咯烷酮羧酸、動物膠、透明質酸、維生素及蛋白質等。(三)親水基質:親水基質特指的是吸濕劑中一些能與水結合的大分子,能保持水分及封阻作用,包括透明質酸、硫酸軟骨素、膠原、彈力蛋白及DNAo富含這些親水基質的保濕劑可以從真皮中吸取大量水分并與之結合,無論在低濕度還是在高濕度條件下,都具有相同的高吸濕性。(四)防光劑:防光劑能防止細胞損傷及脫水。與光老化有關的紫外線主要是中波紫外線(UVB)和長波紫外線(UVA),皮膚被照射后可產生自由基,這些自由基經氧化或交聯作用損傷DNA,造成皮膚干燥、脫屑、脆性增加以及修復功

10、能減退。防光劑分物理性與化學性兩種。物理性防光劑又稱反射性防光劑,成分包括氧化鋅、二氧化鈦,在皮膚表面形成屏障反射UVA和UVB;化學性防光劑又稱吸收性防光劑,可吸收某段光譜的紫外線而起防曬功效,成分有對氨基苯甲酸酯、水楊酸酯及二苯酮等。市售防光產品成分多以化學性防光劑為主。(五)乳化劑:乳化劑是保濕劑中的主要輔助成分,用于使原本不相溶的幾種液體乳化形成均一的混合物,如油和水,常用的乳化劑有甘油單酯、甘油雙酯、磷脂等。乳化劑目前仍是外用劑型中應用最多的基質。(六)防腐劑:在生產及使用過程中為了防止微生物的污染,常需要在化妝品中加入一些防腐劑,包括:羥苯甲酸酯類、能釋放甲醛的化合物、一些絡合劑如

11、依地酸(EDTA)、KathonCG(Methylisothiazolinone和methylchloroisothiazolinone的混合物)、以及酒精等,這些物質雖有良好的防腐作用但常常成為接觸性皮炎的原因。(七)香料:香料用于掩飾原有成分味道或還可產生宜人味道,如肉桂醇、異丁香酚等。但某些香料會產生皮膚刺激癥狀,尤其對于一些已有疾患的敏感皮膚。(八)脂質體:脂質體呈雙殼球狀,直徑小于5微米,雙殼含與皮膚細胞膜類似成分,球芯為水溶性保濕劑、維生素或其他藥物。脂質體作為藥物載體能較好的包裹親水或親油性藥物,提高藥物的滲透性,增加藥物在皮膚中的滯留量,降低藥物對皮膚的刺激性。近20年來,皮膚

12、局部用脂質體制劑日益引起關注,脂質體在保濕劑中的應用是皮膚護理產品中的一個較新的進展。保濕類化妝品的功效評價方法保濕功能是護理類化妝品的最基本功能。為正確地了解化妝品的保濕功能,化妝品科學家和皮膚科醫師通過長期的研究找到了許多皮膚保濕功能的評價方法。早期時,曾經采用人體主觀評判法!但需要評估者有相當的經驗,重復性差,精確度低。后來慢慢發展為借助各種儀器的非損傷性人體測量法,包括電子的、微波的、機械的、熱力學的、掃描電鏡法、光譜學法,以及經典的儀器成分分析法、重量法等。評價化妝品保濕效果的方法分兩類:一是測定皮膚彈力性與粗糙的方法,二是測定角質層水分含量的方法。一,保濕活性成分的檢測和分析可以通

13、過化學分析檢測等方法對保濕化妝品中活性物質的種類與含量進行測定,以此推斷保濕效果。如通過高效液相色譜、氣相色譜、液質連用、氣質聯用等儀器方法分析檢測,根據不同物質吸收峰的特點及高度,對保濕化妝品中的有效成分的種類和含量進行測定,以推測其保濕效果。這種對保濕活性成分的檢測和分析方法能夠間接地說明化妝品可能具有保濕效果,但化妝品的組成成分復雜,工藝過程也有一定的要求,單獨一種或幾種保濕成分并不能代表制成的化妝品的保濕效果。二,重量法化妝品的保濕性測定通常是采用稱重法,不同的保濕劑分子對水分子的作用力不同,吸收水分和保持水分的能力也不同,在仿角質層、表皮等生物材料上模擬人涂抹化妝品的過程,根據化妝品

14、中成分吸濕、保濕性能的差異,在體外測量樣品失重或吸濕的量,即可評價化妝品的保濕效果,但此方法影響因素甚多,并未推廣。另外,日本的西山根據膏霜膜的封閉性和保水性對皮膚的水合效果進行了評價,檢測了O/WW/O型膏霜對水合效果的影響,認為添加的保濕劑對O/W勺膏霜封閉性越小,保濕性越大。劉玉蘭等提出通過吸濕、保濕實驗來評價化妝品的保濕性,將樣品放在飽和的硫酸氨水溶液的干燥器中,求取其吸濕率和保濕率。此方法簡單可行,觀察了相對濕度對吸濕和保濕效果的影響,但其受溫度、日光等環境條件的影響,結果不穩定。三,儀器測量法保濕護膚品的水合作用主要有兩個機理:(1)透過皮膚表面的吸留作用;(2)通過吸收能夠在角質

15、層中保持水分的物質,防止皮膚的水分散失。根據這兩個機理,相應的測量儀器方法包括:1,Corneometer儀器電容測試法對使用化妝品前后皮膚角質層的水分含量情況進行測試,通過這些指標變化反映化妝品的保濕功效。它的測試原理是由于水具有很高的介電常數(大約為81),遠遠高于其它物質(大約為7),通過測試探頭與皮膚接觸后,電容值的變化可以反映皮膚角質層中的含水量,角質層含水量越高,其電容量也越高,反之亦然,測試數據是個相對值。這樣可以通過測量使用產品前后皮膚角質層電容值的變化來衡量角質層含水量的變化,從而來評價化妝品的保濕功效。此種方法對皮膚角質層的水分含量進行定量化,能夠靈敏地反應皮膚水分含量的變

16、化,且重現性好,是目前保濕化妝品功效評價常用的方法之一。2,Skiocon儀器電導測試法利用電導值的測試來衡量使用保濕化妝品前后皮膚角質層的水分含量的變化,從而可以評價化妝品的保濕功效。它的測定原理是由于角質層含有大量的電解質,存在水中的電解質具有導電性,這種現象也產生在皮膚表面,通過測試探頭與皮膚接觸后,呈現出與水分含量相應的電導,其相關系數達到0.99,電導的變化可非常靈敏地測定角質層的水分含量,從而可以評價保濕類化妝品的保濕功效。與Corneometer相比,Skiocon也能夠將皮膚水分含量定量化,而且更適合于檢測水分含量的升高,雖然其重現性與Corneometer相比稍差,但仍然是一

17、種保濕化妝品功效評價的有效方法。3,Tewameter儀器經表皮水分流失值測試法對使用化妝品前后皮膚角質層的經表皮水分流失(TEWL值進行測試,通過這些指標變化來反映化妝品的保濕功效。測試原理是根據A.Fick于1885年發現的漫射原理來測量鄰近皮膚表面水分蒸汽壓的變化。使用特殊設計的兩端開放的圓柱形腔體測量探頭在皮膚表面形成相對穩定的測試小環境,通過兩組溫度(濕度傳感器測定近表皮(約1cm以內)由角質層水分散失形成的在不同兩點的水蒸氣壓梯度,直接測出經表皮蒸發的水分量,以此來衡量皮膚表面水分流失情況,從而可以評價化妝品在皮膚表面的保濕功效。TEWLS是皮膚屏障好壞的一個重要標志,皮膚的TEW

18、lffl越低,說明皮膚的屏障功能就越好,反之則越差。Tewameter從皮膚表面水分流失率來評價皮膚對水分的屏障功能,進而評價化妝品的保濕效果,結合上述的Corneomete或Skiocon測得的皮膚水分含量,能夠全面綜合地評價保濕化妝品的保濕效果。另外,Tewameter也是檢測和評價外來刺激對于皮膚屏障的影響和破壞的一種快速而準確的方法。4,IR測試根據水的紅外光譜吸光度測定的方法,對皮膚角質層保濕性進行活體測試。在人體皮膚使用化妝品前后一定時間內,由于皮膚含水量的變化,某些紅外特征吸收峰的強度和比例會發生改變了,通過紅外光譜吸光度的測定,并通過計算和數據轉換,能夠反應皮膚角質層含水變化情

19、況,從而對化妝品的保濕功效進行評價。由光譜變化能夠直觀地顯示皮膚水分含量的變化,但光譜數據的采集以及數據轉換的處理,需要專門的儀器和培訓。四,其他儀器測試方法已報道的保濕劑性能評價方法還包括電子、微波、機械、電導法、差示掃描法(DSC等方法,測試使用化妝品前后皮膚的水分含量情況,以此來評價產品的保濕功效,但這些方法均需昂貴的儀器和繁瑣的步驟,且只是作為一種測試方法提出,沒有準確的參考數據,無法說明這些方法是否適用于各種保濕劑的功效評價。另外,還可通過“皮膚油脂、水分、酸堿度測試儀”及時發現皮膚存在的各種問題,從而間接地評價皮膚的水分情況,包括利用彈性測試儀測定皮膚的黏彈性,通過紋理和皺紋測定儀

20、測試皮膚紋理和皺紋狀況,等等,實驗測試結果可從皮膚彈性和皺紋變化方面表征在使用化妝品前后皮膚性質的變化,從而間接地表征了皮膚的含水情況。美白化妝品東方人希望通過美白護膚品的使用而得到白晰、光潔的皮膚,而歐美消費者主要利用功能性美白化妝品來減輕和消除老年斑、黃褐斑等色素沉積。美白祛斑化妝品市場近年來日趨活躍,銷售快速增長。美白劑作為美白化妝品的功能性原料因此受到極大關注,它的開發與應用研究不斷深入,市場上新的功效高、易于配伍的原料不斷推出。各國對皮膚美白劑作用機理、新的美白劑的開發和美白劑的應用投入了大量的人力、物力,并取得了明顯的進展。為什么需要美白類化妝品人體的膚色差異通常取決于表皮黑色素的

21、含量與分布、真皮血液循環情況以及角質層的厚度等,主要受以下因素影響:黑色素大量形成累積;皮膚氧化;角質細胞過量沉積;壓力和炎癥等;肌膚微循環差及體內毒素淤積;干燥。黑色素細胞的結構功能和數量直接影響皮膚中黑色素的含量,也是產生黑色素的決定因素。在人體皮膚中,約有400萬個黑色素細胞。在皮膚代謝循環過程中,存在于黑色素細胞組織中的酪氨酸在酪氨酸酶、多巴色素互變酶、二羥基吲哚酸(DHICA)氧化酶作用下經多巴、多巴釀、多巴色素、二羥基呷咪等中間體逐步轉化成為真黑色素。黑色素的合成必須有三種基本物質,酪氨酸是制造黑色素的主要原料。酪氨酸酶是酪氨酸轉變為黑色素的主要限制酶,酪氨酸在酪氨酸酶作用下產生黑

22、色素。目前公認的黑色素合成途徑是:酪氨酸一多巴酸一多巴醌一多巴色素(或二羥基吲哚酸)一黑色素低聚體一黑色素。當黑色素過速增長和分布不均時,就會造成局部皮膚過黑及色素沉著。另外,黑色素細胞接受到存在于細胞外部一種稱之為“內皮素”的物質,就得到了加速制造黑色素的信息,而且酪氨酸酶也被激活,皮膚就變黑了。皮膚不同區域產生的內皮素多少不同,皮膚就會產生顏色深淺不一,從而產生色斑。出于美麗或其他需求,人們希望可以美白。美白類化妝品的組成成分及作用機理美白產品研發就是圍繞鎮定黑素細胞、阻斷或抑制新的黑色素形成,還原或加速已有黑色素分解3條主線,使肌膚安全獲得與生俱來最淺皮膚色調的過程。其中美白配方設計是產

23、品研發的核心,具體可以從抑制“三酶一素”活性、抗氧化、去角質、抗炎、排毒、保濕以及防曬等幾個環節綜合入手,在把握美白“協同效應”的前提下,盡可能追求“多效合一”,輔助增強美白的功效。目前常用美白化妝品的主要作用靶點是酪氨酸酶、黑素細胞和黑素的轉運代謝。按不同的作用機制,將美白化妝品的有效成分分為:酪氨酸酶活性抑制劑,如氫釀、熊果甘、曲酸、甲基龍膽酸鹽、壬二酸、葡萄糖胺、衣霉素等。黑素細胞毒性劑,如四異棕楣酸酯、油溶性甘草提取物、氫釀等。影響黑素代謝劑,如維A酸、亞油酸等。遮光劑,如對氨基苯甲酸酯類等。還原劑,黑色素由細胞分泌后呈現氧化態,具有明顯的黑色,如使用還原劑,將黑色素加以還原,則變為無

24、色的還原型黑色素,但這種對黑色素的還原作用是可逆的,維生素C、維生素E及其衍生物等。化學剝脫劑,如果酸、亞油酸、亞麻酸、感光素401號等。按照引入時間的先后順序簡要介紹目前市場上主流美白護膚品及其作用機理:不性主流產品作用機理特點Vc雅頓VC美白膠囊還原黑色素;抑制黑色素形成,促進表皮黑色素脫落安全,后效,但穩定性差,易失活,不易被皮膚直接吸收曲酸日系黛珂,曲酸美白(華液通過抑制TYRDHICA氧化酶及多巴異構酶活性等方式抑制黑色素生成,阻斷DHI聚合美白效果迅速,穩定性及皮膚吸收性較差,安全性受到質疑果酸喬韻詩角質凈白液及SK-H晶致煥白亮,凝霜加速角質細胞分解能快速美白,但需與其他美白成分

25、復配,且不宜長久使用熊果甘日系DH。晝果甘美白系列抑制TYR舌性,減緩黑色素形成;加速新陳代謝,促進黑色素分解安全,局效,但穩定性較差,具有一定光敏性ma*日系“CKL:胎盤素X容液系列修復受損黑素細胞,維持其代謝平衡;賦活并促進細胞新陳代謝,加速角質細胞分解性質溫和,安全性高,但易腐敗變質,受原料來源影響天然植物及中草藥類“希思黎”植物煥白,列及“伯草集”美白系列通過抑制TYR舌性等抑制黑色素形成或通過“抗氧化、清除自由基、保濕、消炎、滋養、活血、防曬”等功效輔助美白性質自然,溫和,但需多種成分科學復配才方長達到較好的美白效果內皮素拮抗劑香奈兒CHANE?L美白護膚系列阻止內皮素與黑素細胞膜

26、受體結合,抑制黑素細胞分化、增殖;問接抑制TYR舌性,干擾黑色素形成快速、高效且能均勻黑色素分布,但安全性能有待進一步考證傳明酸生堂驅黑凈白”膚系列抑制TYRffi黑色素細胞活性;還原已形成的黑色素;阻止黑色素聚集等局效,溫和無刺激,穩定性好,目前沒發現明顯副作用美白類化妝品的功效評價方法對于美白化妝品的功效評價,大致可以分為兩大類:一類是對美白有效成分的檢測和評價,另一類是對美白產品的使用效果評價。美白活性成分分析和評價:1,美白活性成分的檢測和分析:可以通過化學分析檢測等方法對美白化妝品中美白活性物質的種類與含量進行測定,以此推斷美白效果。如通過高效液相色譜、氣相色譜、液質聯用、氣質聯用等

27、儀器方法分析檢測,根據不同物質吸收峰的特點及高度,對美白劑中的有效成分的種類和含量進行測定,以推測其美白效果。2,酪氨酸酶活性測定:評價美白化妝品的功效,很大部分以檢測施加美白化妝品有效成分后,是否抑制酪氨酸酶活性為主要手段,而酪氨酸酶活性檢測方法有放射性同位素法、免疫學法和生化酶學法,其中以生化酶學法較為簡單成熟。酶的材料來源可以從蘑菇中得到的酪氨酸酶,也可以從B16黑色瘤細胞或動物皮膚中得到。隨著分子生物學技術的發展,人們對黑素細胞合成黑素機制的認識進一步加深,僅僅檢測美白化學物對酪氨酸酶活性的抑制程度,就對其美白效果進行判定,必然帶有一定的片面性和盲目性。3,黑素含量測定:檢測黑素細胞中

28、黑素含量是美白化合物功效評價的最基本指標。目前在美白化合物效果評價中,采用的細胞中黑素含量測定方法是:生物化學分光光度法測定黑素細胞中的黑素含量。此方法經典穩定,但由于需要將被測細胞破碎,專門提取黑素進行比色分析,從而導致操作步驟比較復雜,實驗要求高,使其應用受到一定的限制。圖像分析技術是根據特殊染色組織的像素多少進行定量。該方法具有簡便、快速和準確等特點,因此逐漸被應用于美白化合物功效評價中。4,黑素細胞測定:通過四唑鹽比色法觀察美白活性物質對黑素細胞生長情況的抑制作用,或通過光鏡、電鏡觀察黑素細胞外部形態,研究對黑素細胞形態、結構的影響。5,相關代謝酶的影響:通過分子生物學方法對黑素合成過

29、程中相關酶(酪氨酸酶、多巴色素互變酶和DHICA化酶)的mRNADNA勺表達水平及酪氨酸酶合成量進行測定,以評價美白活性物質對這些酶的影響。美白產品使用效果美白產品使用效果目前主要采用4種方法來評價:生物學方法、細胞學方法、動物試驗法及人體皮膚試驗法。生物學方法生物化學方法常以L2酪氨酸或L2多巴為底物,通過試管試驗檢測美白祛斑成分對酪氨酸酶活性的抑制作用。此種方法測定時間短、操作簡便、所需費用低,適用于對美白祛斑劑進行大面積的初步篩選,但其在實際應用上存在局限性。它不能反映出所篩選的美白祛斑添加劑是否能夠通過細胞膜,也不能夠反映出與黑色素合成有關的其它機制。在正常的生理狀態下,酪氨酸酶存在于黑色素細胞內,分為3個區域:黑色素小體內區域、黑色素小體跨膜區域和黑色素小體留在黑色素細胞質的區域。酶的大部分是在黑色素小體內,只有10%氨基酸在

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