1、.;實驗溫度：18 濕度：32% 實驗時間：2012年11月13日 實驗考查：糞便和膿汁的細菌學檢驗【主要材料與試劑】膿汁、糞便標本各1份、SS平板、血平板、清潔載玻片、酒精燈、接種環、火柴、顯微鏡、擦鏡紙、結晶紫溶液、NaHCO3溶液、堿性碘液、丙酮酒精、稀釋堿性復紅、觸酶試劑、氧化酶試劑、Optochin紙片、無菌生理鹽水、KIA、MIU、志賀菌診斷血清等。【檢驗程序】（一）膿汁標本（P54）1.肉眼觀察膿汁性狀、顏色、氣味2.直接涂片革蘭染色鏡檢3.接種血平板，1824h 35分離培養，觀察菌落形態，涂片、革蘭染色鏡檢：4.生化試驗1）G+C觸酶：觸酶陽性，葡萄C血漿凝固酶試驗：陽性為金

2、葡，陰性為表葡觸酶陰性，鏈COptochin敏感試驗、膽汁溶菌試驗：陽性為肺鏈，陰性為甲鏈。2）G-b氧化酶氧化酶陽性，為非發酵菌，O-F（O+）銅綠水溶性色素綠膿b氧化酶陰性，腸道桿菌KIA、MIU初步鑒定血清學試驗最終鑒定（二）糞便標本（S18）1.接種SS平板，1824h 35分離培養，觀察菌落形態2.取可疑菌落（無色、透明）涂片、革蘭染色鏡檢：3.G-b氧化酶氧化酶陽性，為非發酵菌，O-F（O+）,銅綠水溶性色素綠膿b氧化酶陰性，腸道桿菌KIA、MIU初步鑒定血清學試驗最終鑒定4.KIA、MIU試驗 5.血清學試驗：【實驗記錄與結果】（一）膿汁標本（P54）1、膿汁性狀、顏色、氣味：灰

3、白色、無味、粘稠液體。標本號P54 趙富海 2009221792 2012.11.132、觀察菌落形態：血平板上形成直徑為0.51.5mm，灰白色、半透明、表面光滑草綠色溶血環的扁平菌落。3.涂片、革蘭染色鏡檢：直接G染色鏡檢，G+球菌圓形 血平板G染色鏡檢：G+球菌圓形 或卵圓形、成雙或鏈狀排列 或卵圓形、成雙或鏈狀排列 4.生化試驗觸酶（-） Optochin敏感試驗（-） 膽汁溶菌試驗（-）（二）糞便標本（S18） 1.觀察菌落形態：（SS平板）標本號S18 趙富海 2009221792 2012.11.13形成有無色、半透明、圓形、濕潤、光滑、突起、大小為12mm的菌落。2.取無色、半

4、透明菌落革蘭染色鏡檢： ZFH ZFH G染色鏡檢：G-桿菌、散在分布 3.生化試驗：氧化酶陰性4.KIA、MIU試驗結果： KIA MIU觀察項目斜面底層產氣H2S動力吲哚脲酶結果 KA-5.血清學試驗結果：【初步診斷】（一）膿汁標本（P54）鑒定結果：P54號膿汁標本直接涂片革蘭染色觀察，再經過血平板分離培養，觀察菌落特征，革蘭染色，生化反應，鑒定P54號膿汁標本中的細菌為：甲型溶血性鏈球菌。（二）糞便標本（S18）鑒定結果：S18號糞便標本經SS平板分離培養，觀察菌落特征，取可疑菌落（無色）、革蘭染色，生化鑒定、血清學試驗，鑒定S18號糞便標本中分離出 志賀菌【討論】1.糞便標本的采集：

5、腹瀉患者用抗生素前采集膿血粘液或稀便2-3或1-2ml或肛拭無菌試管甘油鹽水保存液增菌培養基。食物中毒者采集可疑食物、嘔吐物、胃液、糞便等。消化道潰瘍取胃竇和胃體粘膜活檢標本各一塊置無菌NS立即送檢，或將標本放于運送培養基，4保存，24h內送檢.2.常見腸道感染的病原體：以腸毒素為主的病原菌：志賀菌（福氏、宋氏）、大腸埃希菌（ETEC、EHEC、EAggEC）、金葡、艱難梭菌、產氣莢膜梭菌、霍亂弧菌。侵襲性為主的病原菌：沙門菌、大腸埃希菌（EPEC、EIEC）、志賀菌（鮑氏志賀）、彎曲菌、副溶血弧菌、小腸結腸炎耶爾森菌、結核分枝b、白假絲酵母。病毒：輪狀V、ECHOV、Norwo1KV、HAV

6、、HEV、AdenoV3.膿汁標本的采集：封閉性膿腫：消毒皮膚粘膜注射器無菌抽取膿液滅菌試管 一般細菌培養厭氧送檢 供厭氧菌培養開放性膿腫或膿性分泌物：用NS沖洗表面兩支無菌棉拭取膿液或分泌物直接涂片染色鏡檢分離培養（疑為淋病奈瑟菌和腦膜炎奈瑟菌的標本應注意保暖，最好床旁接種）疑為放線菌感染標本：應選取膿汁中的“硫磺樣顆粒”置無菌試管送檢。也可用無菌紗布條塞入瘺管，次日拔出送檢。大面積燒傷感染：無菌棉拭取多部位創面膿汁分泌物無菌試管送檢。胸腔、腹腔、心包腔和滑膜腔感染標本：應在臨床醫生指導下，嚴格無菌操作，用注射器抽吸膿液或分泌物。4.常見引起化膿性感染的病原體：外傷性創傷感染葡萄C、鏈C多見

7、，放線菌、Tb、大腸b、綠膿b常見，且易發生混合感染。深部創傷極易由破傷風梭菌和產氣莢膜梭菌引起厭氧感染。燒傷感染以綠膿b等G-b為主，其次為GC，也可混合感染。急性化膿性骨關節炎、慢性骨髓炎Tb、葡萄C、鏈C。皮下軟組織化膿性炎癥（放線菌病）放線菌5.膿汁標本先觀察性狀、顏色、氣味，再直接涂片革蘭染色觀察：G+球菌圓形或卵圓形、成雙或鏈狀排列，經血平板分離培養形成直徑為0.51.5mm，灰白色、半透明、表面光滑扁平菌落，革蘭染色（G+球菌圓形或卵圓形、成雙或鏈狀排列），生化鑒定（觸酶-、Optochin敏感試驗-、膽汁溶菌試驗-），鑒定P54膿汁標本中細菌為甲型溶血性鏈球菌。6.糞便標本經SS平板分離培養形成無色、半透明、圓形、濕潤、光滑、突起、大小為12mm菌落，取可疑菌落（無色）、革蘭染色