1、新生兒溶血三項檢測的臨床運用1;.有報道有報道:占新生兒溶血比例ABO溶血病85.3%Rh溶血病14.6%MN溶血病0.1%新生兒溶血病新生兒溶血病(Hemolytic disease of newborn HDN,系指母、嬰血型不合引起的同族系指母、嬰血型不合引起的同族免疫性溶血免疫性溶血;已發現的人類已發現的人類29個血型系統中，以個血型系統中，以ABO血型不合最常見，血型不合最常見，Rh血型不合較血型不合較少見少見;2胎兒從父親遺傳而來的紅細胞抗原恰為母親所短少胎兒從父親遺傳而來的紅細胞抗原恰為母親所短少, ,胎兒紅細胞經過胎盤進入母體血循環中胎兒紅細胞經過胎盤進入母體血循環中刺激母體產

2、生相應的血型抗體刺激母體產生相應的血型抗體IgGIgG。 此抗體又可經過胎盤進入胎兒血循環中導致胎兒、新生兒體內特異性抗原抗體反響，此抗體又可經過胎盤進入胎兒血循環中導致胎兒、新生兒體內特異性抗原抗體反響，使紅細胞致敏單核使紅細胞致敏單核- -吞噬細胞系統內破壞而溶血。吞噬細胞系統內破壞而溶血。3ABO溶血病的病因和發病機制溶血病的病因和發病機制ABO血型的遺傳血型的遺傳有有A基因者稱基因者稱A型，有型，有B基因者稱基因者稱B型，同時有型，同時有A、B二二個基因者稱個基因者稱AB型，有型，有H基因此無基因此無A、B基由于基由于O型型假設母假設母“O型，父型，父“A型純合子或雜合子型純合子或雜合

3、子母基因型母基因型OOAOA父基因型父基因型AA子基因型子基因型子血型子血型AOOO母基因型母基因型OO父基因型父基因型AOAO或或或或4ABO血型抗體血型抗體 正常情況下，紅細胞上缺乏正常情況下，紅細胞上缺乏A或或B抗原時，血漿中存在相應的抗體即抗抗原時，血漿中存在相應的抗體即抗A抗體或抗體或抗抗B抗體為天然抗體，以抗體為天然抗體，以IgM為主，本質是由于機體與廣泛存在的類為主，本質是由于機體與廣泛存在的類ABO物質接物質接觸產生。觸產生。 假設由于輸血、懷孕或類假設由于輸血、懷孕或類ABO物質的刺激使抗體濃度添加，這種免疫抗物質的刺激使抗體濃度添加，這種免疫抗A或或抗抗B抗體多半為抗體多半

4、為IgG，特別是，特別是O型母親。型母親。5血型基因型血漿中可以存在的抗體OOO抗A抗體和抗B抗體AAA AO抗B抗體BBB BO抗A抗體ABAB無ABO血型與抗體血型與抗體6ABO溶血病可發生在懷孕第一胎溶血病可發生在懷孕第一胎 自然界存在自然界存在A或或B血型物質如某些植物、寄生蟲、傷寒疫苗、破傷風及白喉類毒素血型物質如某些植物、寄生蟲、傷寒疫苗、破傷風及白喉類毒素等。等。 O型母親在第一次妊娠前，已接受過型母親在第一次妊娠前，已接受過A或或B血型物質的刺激，血中抗血型物質的刺激，血中抗A或抗或抗B (IgG)效價較高。效價較高。 懷孕第一胎時抗體即可進入胎兒血循環引起溶血。懷孕第一胎時抗

5、體即可進入胎兒血循環引起溶血。ABO血型不合中約血型不合中約20%發病發病 血漿及組織中存在的血漿及組織中存在的A和和B血型物質，部分中和來自母體的抗體。血型物質，部分中和來自母體的抗體。 胎兒紅細胞胎兒紅細胞A或或B抗原位點少，抗原性弱，反響才干差?？乖稽c少，抗原性弱，反響才干差。7Rh溶血病的病因和發病機制溶血病的病因和發病機制Rh基因基因編碼編碼Rh抗原的兩個基因是抗原的兩個基因是RHD和和RHCE;Rh基因系統的等位基因中最重要的是基因系統的等位基因中最重要的是D、E、C、c、e五種，不存在五種，不存在d基因基因;RHD基因編碼基因編碼D抗原，抗原，RHCE基因的編碼產物為基因的編碼

6、產物為C/c和和E/e，C和和E一同遺傳，陳列為一同遺傳，陳列為DCE；無；無d抗原抗原;d表示表示D陰性表現型陰性表現型;RHD和和RHCE基因編碼的單倍型中最常見的有基因編碼的單倍型中最常見的有8種形種形式：式：Dce、dce，DCe、dCe、DcE、dcE、DCE和和dCE。8Rh溶血病溶血病 紅細胞缺乏紅細胞缺乏D抗原稱為抗原稱為Rh陰性，具有陰性，具有D抗原稱為抗原稱為Rh陽陽性，中國人絕大多數為性，中國人絕大多數為Rh陽性。陽性。母親母親Rh陰性陰性(無無D抗原抗原)，假設胎兒，假設胎兒Rh陽性可發生陽性可發生Rh溶血溶血病。病。母親母親Rh陽性陽性(有有D抗原抗原)，但缺乏，但缺

7、乏Rh系統其他抗原如系統其他抗原如E等，假設胎兒有該抗原也可發生等，假設胎兒有該抗原也可發生Rh溶血病。溶血病。RhD溶血病最常見溶血病最常見其抗原性強弱依次為其抗原性強弱依次為DECce。RhD溶血病最常見，其次為溶血病最常見，其次為RhE，Rhe溶血病稀有。溶血病稀有。9Rh溶血病普通不發生在第一胎溶血病普通不發生在第一胎由于自然界無由于自然界無Rh血型物質血型物質 首次妊娠末期或胎盤剝離經過2-6月以后再次妊娠孕期幾天內Rh陽性胎兒血 0.51ml胎兒已 娩出胎兒Rh血型同上胎少量胎兒血0.050.1ml胎兒紅細胞溶血Rh陰性母血產生IgM抗體產生少量IgG抗體母血循環產生大量IgG抗體

8、初發免疫反響初發免疫反響次發免疫反響次發免疫反響第一胎不溶血第一胎不溶血第二胎溶血第二胎溶血胎盤胎盤10Rh溶血病發生在第一胎的情況溶血病發生在第一胎的情況Rh陰性母親既往輸過陰性母親既往輸過Rh陽性血。陽性血。Rh陰性母親既往有流產或人工流產史。陰性母親既往有流產或人工流產史。極少數能夠是由于極少數能夠是由于Rh陰性孕婦的母親為陰性孕婦的母親為Rh陽性，其陽性，其母懷孕時已使孕婦致敏，故第一胎發病外祖母學母懷孕時已使孕婦致敏，故第一胎發病外祖母學說。說。RhD血型不合者約血型不合者約5%發病發病母親對胎兒紅細胞母親對胎兒紅細胞Rh抗原的敏感性不同。抗原的敏感性不同。11臨床表現臨床表現 臨床

9、特點ABO溶血病 Rh溶血病 發生頻率常見不常見發生的母子血型主要發生在母O型胎兒A型或B型 母缺少任一Rh抗原 胎兒卻具有該Rh抗原發生胎次第一胎可發?。s半數） 一般發生在第二胎；第一胎也可發病 下一胎情況不一定大多數更嚴重臨床表現較輕 較重，嚴重者甚至死胎 黃疸 生后第23天出現 24小時內出現并迅速加重 貧血 輕可有嚴重貧血或伴心力衰竭 肝脾大 很少發生 多有不同程度的肝脾增大 晚期貧血很少發生可發生，持續至生后36周 12實驗室檢查實驗室檢查 血型檢查血型檢查母子母子ABO和和Rh血型血型溶血檢查溶血檢查 溶血時紅細胞和血紅蛋白減少，早期新生兒毛細血管血血紅蛋白溶血時紅細胞和血紅蛋白

10、減少，早期新生兒毛細血管血血紅蛋白6%;血涂片有核紅細胞增多血涂片有核紅細胞增多10/100個白細胞個白細胞;血清總膽紅素和未結合膽紅素明顯添加血清總膽紅素和未結合膽紅素明顯添加;致敏紅細胞和血型抗體測定致敏紅細胞和血型抗體測定13抗人球蛋白實驗抗人球蛋白實驗： 又稱Coombs實驗， 利用抗球蛋白抗體作為第二抗體，銜接與紅細胞外表抗原結合的特異抗體，使紅細胞凝集。經常用作實驗的有兩類方法。直接實驗：是檢查被檢紅細胞上有無已結合的不 完全抗體包括IgG類的抗A或抗B。間接實驗：是檢查血清中游離的不完全 抗體 包括IgG類的抗A或抗B。14直接直接CoombsCoombs實驗實驗抗人免疫球蛋白本

11、身抗體15本卷須知本卷須知 標本采取后應立刻進展實驗，延遲實驗或中途停頓可使抗體從細胞中喪失?？骨虻鞍自噭凑贞U明最適稀釋度運用，否那么可產生前帶或后帶景象而誤以為陰性結果。受檢紅細胞一定要用鹽水洗滌3次，除去紅細胞懸液混雜的血清蛋白，以防止假陰性結果。最好對陰性結果進展核實，即在該試管中再加1滴IgG致敏紅細胞如結果為陽性，那么表示試管內的抗球蛋白試劑未被耗費，陰性結果可靠。如需了解體內致敏紅細胞的Ig類型，那么可分別以抗IgM或抗C3單價抗球蛋白試劑進展實驗。16本卷須知本卷須知紅細胞上吸附抗體太少,直接抗球蛋白實驗可成假陰性反響。全凝集或冷凝集血液標本中有很多網織紅細胞且抗球蛋白試劑中

12、含有抗轉鐵蛋白時，均可使紅細胞發生凝集。試劑：多特異性抗球蛋白試劑IgG、C3d；陽性對照細胞IgG抗D致敏的5%Rh(D)陽性紅細胞生理鹽水懸液。取3人份O型紅細胞等量混勻，經生理鹽水洗滌后取壓積紅細胞，加等量抗D血清，至37水浴致敏1小時，取出后用生理鹽水洗滌3次壓積紅細胞洗滌配成5%紅細胞生理鹽水懸液；陰性對照細胞正常人5%紅細胞生理鹽水懸液。取3人份O型紅細胞等量混勻，經生理鹽水洗滌后取壓積紅細胞，配成5%紅細胞生理鹽水懸液。17間接間接CoombsCoombs實驗實驗抗人免疫球蛋白同種異型抗體18本卷須知本卷須知如血清與相應紅細胞在37 水浴中致敏1小時，75%的抗體吸附于紅細胞上，

13、如致敏2小時，那么抗體吸附達95%；如以低離子鹽水溶液替代生理鹽水配制5%紅細胞懸液，那么致敏時間可減少至15-30分鐘，但抗Fy抗體需較長的孵育時間。紅細胞洗滌應迅速、徹底。要將生理鹽水用力沖入管底，使管底紅細胞松散分別。要防止手上的蛋白質污染。1滴1:4000稀釋的血清可中和抗球蛋白血清1滴，導致假陽性結果。離心速度和時間非常重要，應取能使陽性對看管出現陽性反響的最小離心力和最短離心時間。19本卷須知本卷須知當紅細胞上的抗體分子數量在500個以上時在有利于抗球蛋白與不規那么抗體的結合，當紅細胞上抗體數量較少，可經過反復離心、搖擺，在離心的方法，添加抗原抗體的接觸，提高陽性率。假設檢測的抗體

14、為補體依賴抗體，那么必需參與新穎AB型血清.試劑：多特異性抗球蛋白試劑IgG、C3d；知抗體血清用于檢測特殊紅細胞抗原：5%知抗原的紅細胞鹽水懸液用于檢測血清中不完全抗體；5%D陽性紅細胞鹽水懸液陽性對照用；不完全抗D血清：AB型血清。20抗人球蛋白實驗的運用直接法： 常用于新生兒溶血癥、本身免疫性溶血癥、特發性本身免疫性貧血和醫源性溶血性疾病等的檢測。 間接法： 多用于檢測母體RhD抗體，以便及早發現和防止新生兒溶血癥的發生。亦可對紅細胞不相容的輸血所產生的血型抗體進展檢測。 21游離實驗游離實驗檢查新生兒血清中游離抗體：檢查新生兒血清中游離抗體： 將新生兒血清與規范將新生兒血清與規范A(B

15、)A(B)細胞與新生兒同種細胞與新生兒同種 紅細胞紅細胞 做間接抗人球蛋白實驗，陽性結果，做間接抗人球蛋白實驗，陽性結果， 那么表示有抗體存在。那么表示有抗體存在。 新生兒血清中游離抗體檢查結果新生兒血清中游離抗體檢查結果 意義意義 指示紅細胞指示紅細胞 意義意義 AC BC OC AC BC OC + - - + - - 游離的抗游離的抗-A-A - + - - + - 游離的抗游離的抗-B-B + + - + + - 游離的抗游離的抗-A-A抗抗-B-B或或-AB-AB +- +- + +- +- + 游離的游離的ABOABO系統以外的抗體系統以外的抗體 - - - - - - 無游離抗體

16、無游離抗體2223 2425262728 熱放散實驗29熱放散實驗方法3031熱放散實驗本卷須知32乙醚放散實驗33酸放散34放散實驗的運用35 新生兒紅細胞抗體放散實驗結果意義新生兒紅細胞抗體放散實驗結果意義 指示紅細胞指示紅細胞 意義意義 AC BC OC + - - 放散出放散出IgG抗抗-A - + - 放散出放散出IgG抗抗-B + + - 放散出放散出IgG抗抗-AB或同時放散或同時放散 IgG抗抗-A或或IgG抗抗-B +- +- + 放散出放散出ABO血型以外的抗體血型以外的抗體 - - - 沒有放散出抗體沒有放散出抗體36 新生兒血型血清學檢查結果分析 游離 釋放 結果 直抗

17、 實驗 實驗 抗篩 斷定 意義 +/- + + -/+ 確診 ABO HDN,抗篩+存在ABO以外抗體 +/- - + -/+ 確診 ABO HDN,抗篩+存在ABO以外抗體 +/- - + -/+ 確診 ABO HDN,抗篩+存在ABO以外抗體 + - - - 可疑 可疑ABO HDN - + - - 可疑 可疑ABO HDN - - - - 否認 血清學實驗未能證明37新生兒溶血三項檢測新生兒溶血三項檢測試驗名稱目的方法結果判定意義改良直接抗人球蛋白試驗(改良Coombs試驗)測定患兒紅細胞上結合的血型抗體“最適稀釋度”的抗人球蛋白血清與充分洗滌后的受檢紅細胞鹽水懸液混合紅細胞凝聚為陽性紅

18、細胞已致敏，為確診實驗Rh溶血病陽性率高而ABO溶血病低抗體釋放試驗測定患兒紅細胞上結合的血型抗體加熱使患兒致敏紅細胞結合的母體血型抗體釋放于釋放液中，該釋放液與同型成人紅細胞混合，再加入抗人球蛋白血清紅細胞凝聚為陽性檢測致敏紅細胞的敏感試驗，為確診實驗Rh和ABO溶血病一般均為陽性游離抗體試驗測定患兒血清中來自母體的血型抗體在患兒血清中加入與其相同血型的成人紅細胞，再加入抗人球蛋白血清紅細胞凝聚為陽性估計是否繼續溶血和換血效果，不是確診試驗38治療治療產前治療產前治療血漿置換血漿置換宮內輸血宮內輸血酶誘導劑酶誘導劑提早分娩提早分娩新生兒治療新生兒治療光療光療藥物治療藥物治療換血療法換血療法其

19、他治療其他治療39產前治療產前治療血漿置換血漿置換 目的：換出抗體，減少胎兒溶血目的：換出抗體，減少胎兒溶血用于：血用于：血Rh抗體效價明顯增高，又不宜提早分娩的孕婦抗體效價明顯增高，又不宜提早分娩的孕婦宮內輸血宮內輸血直接將與孕婦血清不凝集的濃縮紅細胞在直接將與孕婦血清不凝集的濃縮紅細胞在B超下注入臍血超下注入臍血管或胎兒腹腔內管或胎兒腹腔內目的：糾正貧血目的：糾正貧血用于：胎兒水腫或胎兒用于：胎兒水腫或胎兒Hb80g/L，肺尚未成熟者，肺尚未成熟者40產前治療產前治療酶誘導劑酶誘導劑孕婦于預產期前孕婦于預產期前12周口服苯巴比妥周口服苯巴比妥目的：誘導胎兒目的：誘導胎兒UDPGT產生添加，

20、減輕新生兒黃疸產生添加，減輕新生兒黃疸提早分娩提早分娩 既往有輸血、死胎、流產和分娩史的既往有輸血、死胎、流產和分娩史的Rh陰性孕婦陰性孕婦本次妊娠本次妊娠Rh抗體效價逐漸升至抗體效價逐漸升至1:32或或1:64以上以上用分光光度計測定羊水膽紅素增高用分光光度計測定羊水膽紅素增高羊水羊水L/S2，提示胎肺已成熟，提示胎肺已成熟41光療光療 降低血清未結合膽紅素簡單而有效的方法。經過光線照射，能使膽紅素的性質改動后降低血清未結合膽紅素簡單而有效的方法。經過光線照射，能使膽紅素的性質改動后經膽汁排泄到腸腔，或從尿內排出。經膽汁排泄到腸腔，或從尿內排出。 副作用副作用 治本不治本治本不治本42藥物治

21、療藥物治療 白蛋白白蛋白糾正代謝性酸中毒糾正代謝性酸中毒肝酶誘導劑肝酶誘導劑靜脈用免疫球蛋白靜脈用免疫球蛋白 見新生兒黃疸見新生兒黃疸43換血療法換血療法 作用作用換出部分血中游離抗體和致敏紅細胞，減輕溶血。換出部分血中游離抗體和致敏紅細胞，減輕溶血。換出血中大量膽紅素，防止發生膽紅素腦病。換出血中大量膽紅素，防止發生膽紅素腦病。糾正貧血，改善攜氧，防止心力衰竭。糾正貧血，改善攜氧，防止心力衰竭。 44指征指征產前已明確診斷，出生時臍血總膽紅素產前已明確診斷，出生時臍血總膽紅素68mol/L (4mg/dl)，血紅蛋白低于，血紅蛋白低于120g/L，伴水腫、肝脾大和心，伴水腫、肝脾大和心力衰竭者。力衰竭者。生后生后12小時內膽紅素每小時上升小時內膽紅素每小時上升12mol/L0.7mg/dl者。者。總膽紅素已到達總膽紅素已到達342mol/L20mg/dl者。者。不論血清膽紅素程度高低，已有膽紅素腦病早期表現者。不論血清膽紅素程度高低，已有膽紅素腦病早期表現者。 大部分大部分Rh溶血病和個別