1、抗腫瘤藥的藥效學研究抗腫瘤藥的藥效學研究抗腫瘤藥的藥效學研究抗腫瘤藥的藥效學研究 抗腫瘤藥根據其作用原理大致抗腫瘤藥根據其作用原理大致可以分為以下幾類：可以分為以下幾類：細胞毒性藥細胞毒性藥生物反應調節劑生物反應調節劑分化誘導劑分化誘導劑化學預防藥化學預防藥逆轉腫痛耐藥性藥物逆轉腫痛耐藥性藥物抗腫瘤侵襲、轉移藥物的實驗方法抗腫瘤侵襲、轉移藥物的實驗方法放療及化療增效劑放療及化療增效劑1. 細胞毒性藥的藥效學研究細胞毒性藥的藥效學研究這類藥可以通過體外和體內兩種方法來這類藥可以通過體外和體內兩種方法來評價其療效：評價其療效：體外常用的方法：、噻唑藍實驗法體外常用的方法：、噻唑藍實驗法(MTT法法

2、)、染料排斥試驗、生長曲線、染料排斥試驗、生長曲線法、集落形成法、法、集落形成法、SRB法法體內常用的方法：動物移植性腫瘤實體內常用的方法：動物移植性腫瘤實驗法驗法 MTT法的基本原理：法的基本原理： 四氮唑四氮唑MTT,3-(4,5-dimethylibiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide是一種能接受氫原子的染料?；罴毎且环N能接受氫原子的染料。活細胞線粒體中與線粒體中與NADP相關的脫氫酶在細胞內可將相關的脫氫酶在細胞內可將黃色的黃色的MTT轉化成不溶性的藍紫色的甲轉化成不溶性的藍紫色的甲月替月替 (formazan)，而死的細胞則無此功

3、能。用二甲，而死的細胞則無此功能。用二甲基亞諷基亞諷(DMSO)溶解甲溶解甲月替月替后，在一定波長下后，在一定波長下用酶標儀測定光密度值，即可定量測出細胞的用酶標儀測定光密度值，即可定量測出細胞的存活率。存活率。 操作步驟操作步驟: 1選用對數生長期的貼壁腫瘤細胞，用胰選用對數生長期的貼壁腫瘤細胞，用胰酶消化后，用含酶消化后，用含10小牛血清的小牛血清的RPMI l640培養基配成培養基配成5000個個ml的細胞懸液，接種在的細胞懸液，接種在96孔培養板中，每孔接種孔培養板中，每孔接種200l，37，5CO2 培養培養24h 2. 實驗組換新的含不同濃度被測樣品的培實驗組換新的含不同濃度被測樣

4、品的培養基，對照組則換含等體積溶劑的培養基，養基，對照組則換含等體積溶劑的培養基，每組設每組設35平行孔，平行孔，37，5CO2 培養培養45 d3棄去上清液，每孔加入棄去上清液，每孔加入200 l新鮮配新鮮配制的含制的含0.2mgml MTT的無血清培養的無血清培養基基37繼續培養繼續培養4h。小心棄上清，并加。小心棄上清，并加入入200 l DMSO，用微型超聲振蕩器混勻，用微型超聲振蕩器混勻后，在酶標儀上以試驗波長為后，在酶標儀上以試驗波長為570nm，參，參比波長為比波長為450nm測定光密度值。測定光密度值。結果評定結果評定: 按下式計算藥物對腫瘤細胞生長的抑制率：按下式計算藥物對腫

5、瘤細胞生長的抑制率： 腫瘤細胞生長抑制率腫瘤細胞生長抑制率(1-OD實驗實驗/OD對照對照) 100 以同一樣品的不同濃度對腫瘤細胞生長抑制以同一樣品的不同濃度對腫瘤細胞生長抑制率作圖可得到劑量反應曲線，從中求出樣品的率作圖可得到劑量反應曲線，從中求出樣品的半數殺傷濃度半數殺傷濃度IC50。合成化合物或植物提取純。合成化合物或植物提取純品的品的IC5010 gm1或植物粗提物的或植物粗提物的IC5020 gm1時，則判斷樣品在體外對腫瘤細胞有時，則判斷樣品在體外對腫瘤細胞有殺傷作用。殺傷作用。染料排斥試驗的基本原理：染料排斥試驗的基本原理： 活細胞有排斥某些染料如伊紅、臺盼藍、活細胞有排斥某些

6、染料如伊紅、臺盼藍、苯胺黑等的能力，而死細胞由于膜完整性苯胺黑等的能力，而死細胞由于膜完整性的破壞，可被著色。因此培養的腫瘤細胞的破壞，可被著色。因此培養的腫瘤細胞中加入這些染料，一定時間后，對著色和中加入這些染料，一定時間后，對著色和未著色的細胞進行計數，即可算出被殺死未著色的細胞進行計數，即可算出被殺死的細胞比例。的細胞比例。 生長曲線法的基本原理：生長曲線法的基本原理： 在最適條件下，腫瘤細胞在培養液中呈在最適條件下，腫瘤細胞在培養液中呈指數生長，如取細胞數的對數與培養時間作指數生長，如取細胞數的對數與培養時間作圖可得一條直線，故稱此時為對數生長期。圖可得一條直線，故稱此時為對數生長期。

7、隨著細胞密度不斷增高，由于代謝產物的積隨著細胞密度不斷增高，由于代謝產物的積聚及營養物的消耗，細胞生長逐漸減慢以致聚及營養物的消耗，細胞生長逐漸減慢以致停止，此時稱高坪期或穩定期。因此藥物對停止，此時稱高坪期或穩定期。因此藥物對細胞生長的影響可通過生長曲線反映出來。細胞生長的影響可通過生長曲線反映出來。集落形成法的基本原理：集落形成法的基本原理： 克隆原細胞具有持續增殖能力，當克隆原細胞具有持續增殖能力，當單個細胞分裂單個細胞分裂6代或代或6代以上時，其后代代以上時，其后代所組成的群體所組成的群體(集落集落)便含便含50個以上細胞。個以上細胞。通過集落計數可對克隆原細胞作定量分通過集落計數可對

8、克隆原細胞作定量分析。它反映了單個細胞的增殖潛力，故析。它反映了單個細胞的增殖潛力，故能較靈敏地測定抗癌藥的活性，日前被能較靈敏地測定抗癌藥的活性，日前被認為是一種較理想的檢測方法。常用的認為是一種較理想的檢測方法。常用的集落形成法可分為集落形成法可分為貼壁法貼壁法及及半固體培養半固體培養法法兩種。兩種。SRB法的基本原理：法的基本原理：SRB(sulforhodamine B)是一種蛋白質結合是一種蛋白質結合染料，粉紅色，可溶于水。染料，粉紅色，可溶于水。 SRB可與生物可與生物大分子中的堿性氨基酸結合。其在大分子中的堿性氨基酸結合。其在515nm波長的波長的OD讀數與細胞數呈良好的線性關讀

9、數與細胞數呈良好的線性關系。故可用作細胞數的定量。系。故可用作細胞數的定量。MTT法的一法的一個缺點是個缺點是OD值可隨放置時間而變，而值可隨放置時間而變，而SRB法無此現象。因此更適用于進行大規法無此現象。因此更適用于進行大規模的試驗。模的試驗。動物移植性腫瘤實驗法動物移植性腫瘤實驗法 大多數腫瘤化療藥物都是經過動物移植大多數腫瘤化療藥物都是經過動物移植性腫瘤試驗而被發現的，因此動物移植性腫性腫瘤試驗而被發現的，因此動物移植性腫瘤實驗法是篩選新藥中最通用的方法。瘤實驗法是篩選新藥中最通用的方法。其優點是其優點是腫瘤生長均勻，個體差異小。腫瘤生長均勻，個體差異小。接種成功率高，可達接種成功率高

10、，可達100。對宿主的影響也類似，易于客觀判斷對宿主的影響也類似，易于客觀判斷療效。療效。動物移植性腫瘤可在同種或同品系動動物移植性腫瘤可在同種或同品系動物中連續移植，長期保留，以供實驗物中連續移植，長期保留，以供實驗用。實驗周期較短。用。實驗周期較短。缺點：缺點：假陽性問題：由于動物瘤株惡性度高，生假陽性問題：由于動物瘤株惡性度高，生長迅速，對藥物的敏感性比人類自發的腫長迅速，對藥物的敏感性比人類自發的腫瘤高得多，且動物腫瘤的生物學特點與人瘤高得多，且動物腫瘤的生物學特點與人癌有較大的差距，因此對動物腫瘤生長有癌有較大的差距，因此對動物腫瘤生長有抑制作用的藥物對人癌不一定有效。抑制作用的藥物

11、對人癌不一定有效。假陰性問題：一種藥物未必對各種類型的假陰性問題：一種藥物未必對各種類型的動物移植性腫瘤都有效，選擇某一瘤株供動物移植性腫瘤都有效，選擇某一瘤株供篩選都可能漏篩藥物。篩選都可能漏篩藥物。 對于假陽性問題，現在對于假陽性問題，現在有用人的實體瘤細胞接種在有用人的實體瘤細胞接種在裸鼠上，進行實驗來加以克裸鼠上，進行實驗來加以克服。服。幾種常用的動物移植性腫瘤幾種常用的動物移植性腫瘤小鼠白血病小鼠白血病L1210大鼠大鼠Walker-256瘤瘤Lewis肺癌肺癌 白血病白血病L1210是在是在1948年用甲基膽蒽年用甲基膽蒽DBA/2小鼠誘發所得，它是一種能在小鼠誘發所得，它是一種能

12、在DBA/2小鼠及其雜交一代小鼠及其雜交一代BDF1和和CDF1小鼠上生長的淋巴性白血病，是動物實小鼠上生長的淋巴性白血病，是動物實驗治療中最為常用的一種腫瘤模型，在驗治療中最為常用的一種腫瘤模型，在小鼠白血病小鼠白血病1210的實驗治療中，將的實驗治療中，將1 105個腹水細胞接種在個腹水細胞接種在BDFl或或CDFl小鼠小鼠腹腔內。在接種后腹腔內。在接種后24h開始給藥治療，實開始給藥治療，實驗結束后比較對照組與實驗組的小鼠平驗結束后比較對照組與實驗組的小鼠平均存活時間，即可判斷藥物的療效。均存活時間，即可判斷藥物的療效。 Walker256瘤瘤是是1928年在一個懷孕大年在一個懷孕大白鼠

13、的乳腺部位自發產生。接種在皮下或肌白鼠的乳腺部位自發產生。接種在皮下或肌肉內成為實體瘤，接種在腹腔則成為腹水瘤。肉內成為實體瘤，接種在腹腔則成為腹水瘤。在接種后第在接種后第3d開始給藥治療，實驗結束后比開始給藥治療，實驗結束后比較對照組與實驗組的瘤重或大鼠平均存活時較對照組與實驗組的瘤重或大鼠平均存活時間，即可判斷藥物的療效。間，即可判斷藥物的療效。 Lewis肺癌肺癌是是1951年在一個年在一個C57BL6小鼠上小鼠上發現的自發性肺內的未分化的上皮樣癌。該瘤在發現的自發性肺內的未分化的上皮樣癌。該瘤在傳代中生長迅速，很快見有出血，并在同系小鼠傳代中生長迅速，很快見有出血，并在同系小鼠移植時有

14、很高的成活率移植時有很高的成活率(約約98)。且惡性程度較。且惡性程度較高，皮下、肌肉接種對藥物的敏感性較低，但可高，皮下、肌肉接種對藥物的敏感性較低，但可向肺轉移，特別是靜脈接種時。可在肺形成瘤集向肺轉移，特別是靜脈接種時?？稍诜涡纬闪黾?，此模型也可用于抗轉移的實驗研究在接種后落，此模型也可用于抗轉移的實驗研究在接種后第第l天開始結藥治療。實驗結束后比較對照組與天開始結藥治療。實驗結束后比較對照組與實驗組的瘤重，即可判斷藥物的療效。實驗組的瘤重，即可判斷藥物的療效。2. 生物反應調節劑的藥效學評價生物反應調節劑的藥效學評價 生物反應調節劑生物反應調節劑(biological respons

15、e modifiers，BRM)是一類能單獨或與化療是一類能單獨或與化療藥物同時應用，有助于提高化療效果，減藥物同時應用，有助于提高化療效果，減低化療藥毒副反應的藥物。這類藥物主要低化療藥毒副反應的藥物。這類藥物主要出自植物和微生物，其作用機理大多是調出自植物和微生物，其作用機理大多是調節機體的免疫功能節機體的免疫功能。生物反應調節劑動物實驗的特點：生物反應調節劑動物實驗的特點：生物反應調節劑以口服劑型為主。生物反應調節劑以口服劑型為主。用藥時間長。凡經口服給藥者，服藥期一般用藥時間長。凡經口服給藥者，服藥期一般為為1530d。對實驗動物的要求也較高，多推薦使用近交對實驗動物的要求也較高，多推

16、薦使用近交系小鼠。系小鼠。本類藥物毒性大多較低，本類藥物毒性大多較低，LD50常不能求出，常不能求出，選用選用MTD并參考臨床用量為給藥劑量的依據。并參考臨床用量為給藥劑量的依據。 生物反應調節劑用于體內抗癌試驗生物反應調節劑用于體內抗癌試驗的方法，與細胞毒類藥物基本一致，但的方法，與細胞毒類藥物基本一致，但需注意以下幾點差異需注意以下幾點差異：給藥時間：細胞毒類藥物一般在腫瘤接給藥時間：細胞毒類藥物一般在腫瘤接種后種后24h開始給藥，而本類藥物開始給藥開始給藥，而本類藥物開始給藥的時間和結束時間可以有多種設計，根的時間和結束時間可以有多種設計，根據目的不同較為靈活。據目的不同較為靈活。 腫瘤

17、細胞接種量腫瘤細胞接種量 ：一般比細胞毒類藥物：一般比細胞毒類藥物低一個數量級，多在低一個數量級，多在11045 個瘤細胞。個瘤細胞。療程療程 ：給藥期一般比細胞毒類藥物長。：給藥期一般比細胞毒類藥物長。一些有抑瘤作用的一些有抑瘤作用的BRM類藥物，除作類藥物，除作腫瘤療效的篩選外，還需作數項免疫腫瘤療效的篩選外，還需作數項免疫功能測定指標。功能測定指標。 腫瘤是一種分化阻止或分化缺陷病，腫瘤是一種分化阻止或分化缺陷病，采用某種手段克服這種分化缺陷就可使分采用某種手段克服這種分化缺陷就可使分化受阻的惡性細胞向正常分化。分化誘導化受阻的惡性細胞向正常分化。分化誘導劑就是使惡性腫瘤細胞分化成較成熟

18、的細劑就是使惡性腫瘤細胞分化成較成熟的細胞，使之自然死亡，而不是通過殺傷的作胞，使之自然死亡，而不是通過殺傷的作用來治療惡性腫瘤的一類藥物。用來治療惡性腫瘤的一類藥物。3. 分化誘導劑的藥效學評價分化誘導劑的藥效學評價常用的細胞分化誘導研究方法：常用的細胞分化誘導研究方法：細胞形態學及組織化學研究方法細胞形態學及組織化學研究方法細胞功能的研究方法：如吞噬功能測定、血細胞功能的研究方法：如吞噬功能測定、血紅蛋白紅蛋白(Hb)含量測定、黑色素含量測定、甲含量測定、黑色素含量測定、甲胎蛋白胎蛋白(AFP)和白蛋白和白蛋白(Alb)分泌量的測定、細分泌量的測定、細胞增殖能力測定等。胞增殖能力測定等。與

19、分化有關的基因及其表達的研究方法：癌與分化有關的基因及其表達的研究方法：癌基因是一類主要的增殖分化調控因素。幾乎基因是一類主要的增殖分化調控因素。幾乎所有增殖旺盛的細胞均有所有增殖旺盛的細胞均有myc表達，表達，c-fos是一是一種分化標志，檢測這些基因的表達可以反映種分化標志，檢測這些基因的表達可以反映細胞的分化情況。細胞的分化情況。4. 化學預防藥的藥效學評價化學預防藥的藥效學評價 癌的發生和發展是一個多階段過程，癌的發生和發展是一個多階段過程，一般要經歷始發突變、促癌和演變三個一般要經歷始發突變、促癌和演變三個階段。根據癌變的多階段理論及預防藥階段。根據癌變的多階段理論及預防藥物作用的時

20、間順序，化學預防藥物可分物作用的時間順序，化學預防藥物可分為三類：為三類：抗始發劑抗始發劑(antiinitiator)、抗促抗促癌劑癌劑(antipromotor)和和抗演進劑抗演進劑(antiprogressor)評價化學預防藥療效的常用方法評價化學預防藥療效的常用方法 利用利用體外誘導細胞轉化體外誘導細胞轉化的方法使細胞的方法使細胞發生癌變，在這個過程中加入化學預防藥，發生癌變，在這個過程中加入化學預防藥，觀察對細胞癌變的影響。觀察對細胞癌變的影響。軟瓊脂集落形成實驗是檢測轉化細胞和軟瓊脂集落形成實驗是檢測轉化細胞和腫瘤細胞最為常用的方法。腫瘤細胞最為常用的方法。原理：除某些造血細胞外，

21、正常細胞以原理：除某些造血細胞外，正常細胞以及無限細胞系均不能在軟瓊脂培養中生及無限細胞系均不能在軟瓊脂培養中生長，只有惡性轉化了的細胞和腫瘤細胞長，只有惡性轉化了的細胞和腫瘤細胞才能在軟瓊脂培養中生長并增殖，并且才能在軟瓊脂培養中生長并增殖，并且在軟瓊脂培養中的集落形成率與細胞的在軟瓊脂培養中的集落形成率與細胞的惡性程度呈正相關。因此，用來觀察轉惡性程度呈正相關。因此，用來觀察轉化細胞的惡性程度、受試藥物對腫瘤細化細胞的惡性程度、受試藥物對腫瘤細胞惡性程度、侵襲能力的影響。胞惡性程度、侵襲能力的影響。體內誘癌試驗體內誘癌試驗 在實驗研究中癌化學預防作用的最在實驗研究中癌化學預防作用的最可靠指

22、標是對化學致癌的抑制，尤其是可靠指標是對化學致癌的抑制，尤其是在體內對致癌物誘發腫瘤的抑制。在體內對致癌物誘發腫瘤的抑制。 常用的比較成熟的化學致癌模型是常用的比較成熟的化學致癌模型是苯并芘誘導的小鼠肺腺癌苯并芘誘導的小鼠肺腺癌體外檢測抗致突變作用的方法：體外檢測抗致突變作用的方法：抗微核形成實驗抗微核形成實驗抗抗Ames實驗實驗非程序非程序DNA合成抑制實驗合成抑制實驗 抗微核形成實驗抗微核形成實驗 微核試驗是檢測環境致癌物、化學誘變劑微核試驗是檢測環境致癌物、化學誘變劑引起染色體損傷的一種快速、簡便的方法。引起染色體損傷的一種快速、簡便的方法。 原理：遺傳毒物或化學誘變劑作用于間期原理：遺

23、傳毒物或化學誘變劑作用于間期細胞染色質或有絲分裂染色體和紡錘體時，細胞染色質或有絲分裂染色體和紡錘體時，能導致染色體斷裂、斷片或整條染色體從能導致染色體斷裂、斷片或整條染色體從紡錘體脫落、繼而在分裂末期及以后的間紡錘體脫落、繼而在分裂末期及以后的間期細胞中形成與主核脫離的微核。期細胞中形成與主核脫離的微核?？箍笰mes試驗試驗Ames試驗或稱鼠傷寒沙門氏菌回復突試驗或稱鼠傷寒沙門氏菌回復突變試驗，是一種經濟、敏感和應用廣泛變試驗，是一種經濟、敏感和應用廣泛的檢測原核生物基因突變的方法。的檢測原核生物基因突變的方法。原理：利用沙門氏菌原理：利用沙門氏菌(S.typhimurium)的的遺傳基因突

24、變性質，以組氨酸要求性的遺傳基因突變性質，以組氨酸要求性的變異變異(his-his+)為指標，當這些菌株欠為指標，當這些菌株欠缺缺DNA損傷的修復功能時，對多種致突損傷的修復功能時，對多種致突變物質具有很高的敏感性。一般通用的變物質具有很高的敏感性。一般通用的菌株是菌株是TA97、TA98、TA100和和TAl02。非程序非程序DNA合成抑制實驗合成抑制實驗 非程序非程序DNA合成合成(UDS)是指發生在是指發生在S期期以外的與以外的與DNA損傷有關的一種損傷有關的一種DNA合成。合成。它可以通過同位素標記的特異前體它可以通過同位素標記的特異前體(常用常用3H胸腺嘧啶核苷胸腺嘧啶核苷)參入參入

25、DNA而顯示。而顯示。UDS是目前公認的檢測真核細胞基因突變或損是目前公認的檢測真核細胞基因突變或損傷修復的有效而經濟的一種方法，在當前傷修復的有效而經濟的一種方法，在當前被用于研究受試物質的抗始發突變作用。被用于研究受試物質的抗始發突變作用。原理：依據體細胞突變學說，化學致癌物通過對原理：依據體細胞突變學說，化學致癌物通過對DNA的攻擊而導致細胞癌變?；瘜W致癌物造成的攻擊而導致細胞癌變?；瘜W致癌物造成的的DNA損傷有三種主要類型：堿基損傷、鏈斷損傷有三種主要類型：堿基損傷、鏈斷裂和交鏈形成。這三種損傷均可引起細胞啟動其裂和交鏈形成。這三種損傷均可引起細胞啟動其修復過程而進行修復過程而進行DN

26、A修復。修復。DNA損傷的修復過損傷的修復過程十分復雜，對不同的階段有不同的檢測方法。程十分復雜，對不同的階段有不同的檢測方法。一般習慣上把放射性自顯影及液體閃爍計數法顯一般習慣上把放射性自顯影及液體閃爍計數法顯示的非半保留復制的抑制稱為非程序示的非半保留復制的抑制稱為非程序DNA合成合成抑制試驗。抑制試驗。腫瘤細胞耐藥表型和機制腫瘤細胞耐藥表型和機制 腫瘤細胞耐藥性按耐藥性來源可分為腫瘤細胞耐藥性按耐藥性來源可分為內在耐藥和獲得性耐藥，按耐藥表型內在耐藥和獲得性耐藥，按耐藥表型(即即對一種或同時對多種結構和作用機制不同對一種或同時對多種結構和作用機制不同的藥物發生耐藥的藥物發生耐藥)來分，可

27、分為原藥性和來分，可分為原藥性和多藥耐藥性兩種。多藥耐藥性兩種。5. 逆轉腫瘤耐藥性藥物的藥效學評價逆轉腫瘤耐藥性藥物的藥效學評價體外細胞培養的方法體外細胞培養的方法建立耐藥的腫瘤細胞株：建立耐藥的腫瘤細胞株： 例如可以用逐步增例如可以用逐步增加培養基中阿霉素濃度的方法，誘導出一株加培養基中阿霉素濃度的方法，誘導出一株耐阿霉素的人源性白血病細胞系。耐阿霉素的人源性白血病細胞系。缺定劑量：測定被檢測藥物在敏感細胞株和缺定劑量：測定被檢測藥物在敏感細胞株和耐藥細胞株的細胞毒性，用無毒劑量或小于耐藥細胞株的細胞毒性，用無毒劑量或小于IC10的劑量進行試驗。的劑量進行試驗。測定細胞存活率：多采用測定細

28、胞存活率：多采用MTT法。求出各試法。求出各試驗組存活率驗組存活率(或抑制率或抑制率)，效果評價用逆轉倍，效果評價用逆轉倍數數(FR)：FR=IC50（不加逆轉劑）（不加逆轉劑）/ IC50 （加逆轉劑）（加逆轉劑）6. 抗腫瘤侵襲、轉移藥物的藥效學評價抗腫瘤侵襲、轉移藥物的藥效學評價 腫瘤轉移的基本步驟：腫瘤轉移的基本步驟：原發瘤增殖，腫瘤新血管生成。原發瘤增殖，腫瘤新血管生成。腫瘤細胞侵襲毗鄰的基底膜、基質和正常細胞。腫瘤細胞侵襲毗鄰的基底膜、基質和正常細胞。瘤細胞穿入血管或淋巴管并在循環系統中存活。瘤細胞穿入血管或淋巴管并在循環系統中存活。瘤細胞栓塞、滯留于遠隔靶器官的微血管中并瘤細胞栓

29、塞、滯留于遠隔靶器官的微血管中并增殖。增殖。瘤細胞穿出血管或淋巴管，在靶器官內形成微瘤細胞穿出血管或淋巴管，在靶器官內形成微轉移處。轉移處。腫瘤問質內新血管生成，轉移瘤快速生長。腫瘤問質內新血管生成，轉移瘤快速生長?？鼓[瘤侵襲與轉移藥的評價可以通抗腫瘤侵襲與轉移藥的評價可以通過過動物實驗動物實驗和和體外細胞培養體外細胞培養兩種方兩種方法進行。法進行。動物實驗：動物實驗：例：小鼠子宮頸癌例：小鼠子宮頸癌U14腎侵襲模型腎侵襲模型 小鼠子宮頸癌小鼠子宮頸癌U14是昆明種小鼠的宮頸癌。是昆明種小鼠的宮頸癌。此瘤株后被移植于此瘤株后被移植于615近交系小鼠，致瘤率近近交系小鼠，致瘤率近100，并呈現血

30、道和淋巴道雙重轉移的特性。，并呈現血道和淋巴道雙重轉移的特性。 將將U14瘤塊接種于瘤塊接種于615小鼠的腎包膜下，腫小鼠的腎包膜下，腫瘤生長并向腎實質內侵襲。荷瘤腎臟病理切瘤生長并向腎實質內侵襲。荷瘤腎臟病理切片后，在光鏡下觀察，用組織學半定量分級片后，在光鏡下觀察，用組織學半定量分級標準判定腫瘤侵襲腎實質的程度。標準判定腫瘤侵襲腎實質的程度。體外實驗：體外實驗：例例1：腫瘤細胞球樣聚集體的侵襲模型：腫瘤細胞球樣聚集體的侵襲模型 通過旋轉搖動培養系統將腫瘤細胞制成球通過旋轉搖動培養系統將腫瘤細胞制成球樣聚集體，在半固體瓊脂培養基上與球形雞樣聚集體，在半固體瓊脂培養基上與球形雞胚心肌小塊緊密接觸，使兩者成為復合體。胚心肌小塊緊密接觸，使兩者成為復合體。復合體經過一定時問的旋轉搖動培養后，組復合體經過一定時問的旋轉搖動培養后，組織學切片觀察腫瘤細胞對心肌組織的侵襲程織學切片觀察腫瘤細胞對心肌組織的侵襲程度。度。該侵襲模型的特點：該侵襲模型的特點：經過旋轉搖動培養后，心肌塊的外圍被成纖經過旋轉搖動培養后，心肌塊的外圍被成纖維細胞層包繞，使宿主組織表面形成類似漿維細胞層包繞，使宿主組織表面形成類似漿膜樣的結構。膜樣的結構。心肌組織結構清楚，容易與腫瘤細胞相區別。心肌組織結構清楚，容易與腫瘤細胞相區別。攻擊細胞為球體形式，模擬了體內實體瘤結攻擊細胞為球體形式，模擬了體內實體瘤結構，便