1、實驗一、微生物的簡單染色思考題1油鏡與普通物鏡在使用方法上有何不同？應特別注意些什么？答：油鏡在使用時必須在載玻片與物鏡之間滴加鏡頭油。油鏡使用過程中要注意兩點：(1)、使用后鏡頭的清潔：鏡面只能用擦鏡紙擦，不能用手指或粗布，以保證光潔度，用完油鏡必須進行“三擦”(觀察完畢，上懸鏡筒，先用擦鏡紙擦去鏡頭上的油，然后再用擦鏡紙沾取少量二甲苯(或者乙醇乙醛溶液)擦去殘留的油，最后用擦鏡紙擦去殘留的二甲苯，后將鏡體全部復原)。(2)、.觀察標本時，必須依次用低、中、高倍鏡，最后用油鏡。當目視接目鏡時，特別在使用油鏡時，切不可使用粗調節器，以免壓碎玻片或損傷鏡面。2、使用油鏡時，為什么必須用鏡頭油？答

2、：在使用普通顯微鏡時，當光線由反光鏡通過玻片與鏡頭之間的空氣時，由于空氣與玻片的密度不同，使光線受到曲折，發生散射，降低了視野的照明度。若中間的介質是一層油(其折射率與玻片的相近)，則幾乎不發生折射，增加了視野的進光量，從而使物象更加清晰。3、鏡檢標本時，為什么先用低倍鏡觀察，而不是直接用高倍鏡或油鏡觀察？答：低倍鏡視野比較大，能看到的范圍大，容易找到觀察的目標，然后在用放大倍數高的高倍鏡或油鏡有目的的觀察。實驗二、革蘭氏染色(1)為什么必須用培養24h以內的菌體進行革蘭氏染色？答：24h以內的菌體處于活躍生長期，菌體細胞壁具有典型特征，而處于老齡的革蘭氏陽性細菌壁結構開始發生變化，染色時會被

3、染成紅色而造成假陰性(2)要得到正確的革蘭氏染色結果，必須注意哪些操作？哪一步是關鍵步驟？為什么？答：應注意如下幾點：其一，選用活躍生長期菌種染色，老齡的革蘭氏陽性細菌會被染成紅色而造成假陰性；其二，涂片不宜過厚，以免脫色不完全造成假陽性；其三，脫色是革蘭氏染色是否成功的關鍵，脫色不夠造成假陽性，脫色過度造成假陰性(3)當你對未知菌進行革蘭氏染色時，怎樣保證操作正確，結果可靠？答：當要確證未知菌的革蘭氏反應時，可用已知菌進行混合涂片，使二者染色條件保持一致,如果已知菌的結果與預期相符，則證明操作操作正確，結果可靠。實驗三、微生物的顯微鏡直接計數法1、在顯微鏡下直接測定微生物數量有什么優缺點？答

4、：1)優點：直觀、快速、操作簡單。2)缺點：不能區分死菌與活菌；不適于對運動細菌的計數；需要相對高的細菌濃度；個體小的細菌在顯微鏡下難以觀察；實驗四、微生物大小的測定1、在不改變目鏡和目鏡測微尺，而改用不同放大倍數的物鏡來測定同一細菌的大小時，其測定結果是否相同？為什么？答：相同；目鏡測微尺是一塊圓形玻片，其中央刻有精確等分的刻度，有把5毫米刻成為50等分或把10毫米長度刻成100等分。測量時，將其放在接目鏡中的隔板上來測量經顯微鏡放大后的細胞物象。由于在不改變目鏡和目鏡測微尺，而改用不同放大倍數的物鏡來測定同一細菌的大小時，物象的放大倍數與每小格目鏡測微尺所代表的長度在變化比例上是同步的，故

5、而測定結果相同。實驗五、培養基的配置與高壓蒸汽滅菌1、培養基配好后，為什么必須立即滅菌堂口何檢查滅菌后的培養基是否無菌？為什么要倒置培養？答：由于配制培養基的各類營養物質和容器等含有各種微生物，因此，已配制好的培養基必須立即滅菌，如果來不及滅菌，應暫存冰箱內，以防止其中的微生物生長系列而消耗養分和改變培養基的酸堿度所帶來的不利影響。將滅菌的培養基放入37c溫箱中培養2448h,無菌生長即可證明滅菌后的培養基無菌。倒置培養的主要目的：1）由于重力的作用使培養基表面及次層能富集微生物生長所需的營養物質，利于微生物生長；2）防止空氣中微生物的污染培養基及培養物：倒置時平板內的空氣是不流動的，雜菌不會

6、沉降到培養基表面，如果不倒置很快平板周邊會長起雜菌。3）倒置培養使瓊脂里水分不易蒸發出去，而充分的保持瓊脂的彈性與細菌容易繁殖和生存的環境。如果不倒置，大概3天左右培養基就會出現龜裂等水分散失的情況。而一些落菌等試驗，需驗證培養基無菌，就要先倒置培養48小時才可作為模板做落菌，水分散失是很重要的。2、在配制培養基的操作過程中應注意些什么問題？為什么？答：一般而言，培養基的配置要注意如下幾點原則：1）、營養成分的配比：碳源和氮源的比例（C/N）要適當；2）、適宜的酸堿度（pH值）：配制培養基時pH的調節；3）、滲透壓：營養物質要有適合的濃度；4）、培養基不能反復高溫滅菌。5）、稱不溶性固形物時，

7、應單獨稱，若量少的可以與無機鹽一起稱，但一定要混勻再分裝；6）、一般情況下培養基用自來水配制。操作細節上則要注意：1）、稱藥品用的牛角匙不要混用，稱完藥品應及時蓋緊瓶蓋2）、調pH值不要調過頭，以免回調而影響培養基內各離子的濃度3）、分裝時注意不要污染棉塞、試管口，以免染菌。4）、及時滅菌，以免培養基及容器里的微生物生長繁殖消耗養分、改變酸堿度。3、高壓蒸氣滅菌開始之前，為什么要將鍋內冷空氣排盡？滅菌完畢后，為什么待壓力降低“0”時才能打開排氣閥，開蓋取物。答：1）在使用高壓蒸汽滅菌時，滅菌鍋內冷空氣的排除是否完全極為重要，因為空氣的膨脹壓大于水蒸汽的膨脹壓，所以，當水蒸氣中含有空氣時，在同一

8、壓力下，含空氣蒸汽的溫度低于飽和蒸汽的溫度。2）壓力未降至“0”便開蓋取物的可能后果：壓力鍋內壓力驟然降低，引起容器中的溶液噴出容器口導致污染或導致人員的燙傷。實驗：化學因素對微生物的影響1、利用濾紙片法測定化學消毒劑對微生物生長的影響時，影響抑菌圈大小的因素有哪些？答：微生物的種類；化學消毒劑的含量；培養的條件；濾紙片的大小、厚度；接種量的大小等。實驗：霉菌的形態觀察1、你主要根據哪些形態特征來區分四種霉菌？答：1）菌絲特征：青菌與曲霉菌絲與膈；毛霉與根霉則無；2）菌絲的特化結構：曲霉有足細胞，其它霉菌無；根霉有假根與匍匐枝，其它霉菌無；3）抱子頭特征：青霉的抱子頭為掃帚狀；根霉與毛霉的抱子

9、頭為囊狀；曲霉為菊花狀抱子頭。實驗：四大類微生物菌落形態觀察1、請你從六個方面描述四大類微生物菌落形態的特征。2、答：總體可從各類微生物菌落的形狀、大小、色澤、透明度、致密度、邊緣著手描述它們的特征。Qt虬猷娥首、我舒4苒醇瞬般鞋期M斷用的K1康母N91雷落袤面用i腔艮肘做機與觸雌住要戰眥楠的腦則出小期蠢牌.濾冊或M布大小不袁獻頻哭覷膿白色自包施梅布禮為麴鼾氟嬲崎沫觸鬻毛此:但不及圈HA混氯例幼柏加瞬毗it翱林翻懷及蛾酬糕乳與賺It相嘮腳九蔓上著翎u鞭陋喝”藏百睚M聯柵躺操醐麻魏和眄生蛾施孑州伊相肝的附毗版看塾柔燦MHJW明基施州也秘脆第！與峨部螭Y$整導酬*群訴版扃熹斛沒殖加1睚富國蝴用惟施

10、州.營落生長過g從開始械到也醐麗提姚為埴尢購施色加夫勵在獨中出既m融趣期犍米耗好就由鉆艇及好也并蚓不弱微削W超融釀上極自軸穌般肘肝耿眥麻魁出現稠她,斛土財菌料耕實驗：細菌特殊結構的染色1、若涂片中觀察到的只是大量游離芽抱，很少看到芽抱囊及營養細胞，你認為這是什么原因？答：1）營養缺乏，培養條件不適宜，芽胞桿菌群體形成抗逆體2）培養時間太長，營養體已大部分形成芽胞且芽抱囊破裂游離出來。2.組成莢膜的成分是什么琳片一般用什么固定方法，為什么？答：莢膜為粘液狀或膠狀物質，其成分為多糖、糖蛋白或多肽；因為含水量高，遇熱易失水變形，故而固定時采用自然晾干的方法固定。實驗：酸奶1、如果你利用生牛乳通過細菌

11、自然發酵制造能飲用的酸牛乳，應控制在哪一時期？答：從牛乳酸敗過程中細菌的生態演變過程來看，生牛乳的狀態經歷了幾個階段的變化:1-牛乳PH中性，含豐富的乳糖乳酸PH下降；2、引起蛋白質Z塊抑制了乳鏈球菌的繁殖3、乳桿菌能耐受低PH,發酵乳糖PH更低4、酵母菌在這低PH環境下利用乳酸生長乳糖、乳酸消失，PH上升；5、假單胞菌、芽胞桿菌能產生蛋白酶，分解凝結的牛乳蛋白，當蛋白質被利用完畢，牛乳的分解也就完成了。在第三階段，也是生牛乳中乳糖被天然微生物充分發酵生成易被人體消化吸收的乳酸的時期，故而應控制在第三階段。實驗：實驗室環境和人體表面的微生物檢查1、比較洗手前后菌落數的變化，談談你的體會。洗手后仍有少量細菌生長，你認為是什么原因？答：一般洗手后菌落數變少。這說明洗手是防止病菌的一項必要措施。洗手后仍有少量細菌有可能是：1）、洗手并不能徹底清除手中粘附的微生物；2）、洗手的用水本