1、1第八章第八章 食品中致病菌和病毒食品中致病菌和病毒28.1 8.1 腸桿菌科腸桿菌科腸桿菌科是存在于人和動物腸道或自然界中的腸桿菌科是存在于人和動物腸道或自然界中的一群生物學性狀很相似的革蘭氏陰性短小桿菌。一群生物學性狀很相似的革蘭氏陰性短小桿菌。無芽孢，多數有周身鞭毛，能運動。無芽孢，多數有周身鞭毛，能運動。在普通培養基上能生長。在普通培養基上能生長。培養溫度為培養溫度為35C。需氧或兼性厭氧。需氧或兼性厭氧。能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽，氧化酶試驗陰性，能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽，氧化酶試驗陰性，觸酶試驗陽性。觸酶試驗陽性。38.1.18.1.1大腸桿菌大腸桿菌大腸桿菌大腸桿菌E. coli是腸道

2、正常菌群。一般情況下，是腸道正常菌群。一般情況下，多不致病，是人和動物腸道中的常居菌。多不致病，是人和動物腸道中的常居菌。在一定條件下，可引起腸道道外感染。在一定條件下，可引起腸道道外感染。致病性大腸桿菌：腸產毒性大腸桿菌致病性大腸桿菌：腸產毒性大腸桿菌（Enterotoxigenic E. coli); 腸致病性大腸桿菌腸致病性大腸桿菌（Enteropathogenic E. coli); 腸侵襲性大腸桿菌腸侵襲性大腸桿菌（Enteroinvasive E. coli); 腸出血性大腸桿菌腸出血性大腸桿菌（Enterohemorrhagic E. coli)。 引起腹瀉、出血引起腹瀉、出血性

3、腸炎。性腸炎。4腸產毒性大腸桿菌（腸產毒性大腸桿菌（Enterotoxigenic E. coli，ETEC)v引起嬰幼兒和旅游者腹瀉，出現輕度水引起嬰幼兒和旅游者腹瀉，出現輕度水瀉，也可呈嚴重霍亂樣癥狀。腹瀉常為瀉，也可呈嚴重霍亂樣癥狀。腹瀉常為自限性，一般自限性，一般23d即愈。即愈。v鑒定鑒定ETEC主要測定大腸桿菌腸毒素，主要測定大腸桿菌腸毒素，血清型有一定的參考意義。血清型有一定的參考意義。5v腸致病性大腸桿菌（腸致病性大腸桿菌（Enteropathogenic E. coli，EPEC)是嬰兒腹瀉的主要病原菌，是嬰兒腹瀉的主要病原菌，具有高度傳染性，嚴重者可致死，成人具有高度傳染性

4、，嚴重者可致死，成人少見。少見。EPEC產生產生VT毒素。毒素。 VT毒素具有毒素具有神經毒素、細胞毒素和腸毒素性。神經毒素、細胞毒素和腸毒素性。v鑒定鑒定EPEC根據臨床表現和血清型。根據臨床表現和血清型。腸致病性大腸桿菌腸致病性大腸桿菌6腸侵襲性大腸桿菌（腸侵襲性大腸桿菌（Enteroinvasive E. coli，EIEC)EIEC的多數菌株無動力，生化反應和抗的多數菌株無動力，生化反應和抗原結構均類似痢疾桿菌。原結構均類似痢疾桿菌。EIEC可引起豚鼠角結合膜炎，臨床上可可引起豚鼠角結合膜炎，臨床上可借此協助鑒定借此協助鑒定EIEC。7腸出血性大腸桿菌（腸出血性大腸桿菌（Enteroh

5、emorrhagic E. coli，EHEC)可引起散發性或爆發性出血性結腸炎。主可引起散發性或爆發性出血性結腸炎。主要菌型是要菌型是O157：H7，還可有，還可有O26、O111、O103、O145等。等。1996年年O157：H7在日本引起萬人的食物中毒，此在日本引起萬人的食物中毒，此外，美國、加拿大、瑞典、澳大利亞、英國等國外，美國、加拿大、瑞典、澳大利亞、英國等國家和地區相繼報道了家和地區相繼報道了EHEC O157：H7的散發性感的散發性感染和爆發流行。染和爆發流行。我國于我國于1999年在蘇、皖、魯、豫發生爆發流行。年在蘇、皖、魯、豫發生爆發流行。腸出血性大腸桿菌腸出血性大腸桿菌

6、8腸出血性大腸桿菌腸出血性大腸桿菌O157: H7的檢驗方法：的檢驗方法：1、培養基制備、培養基制備改良改良EC新生霉素增菌肉湯新生霉素增菌肉湯 （mEC）：）： EC肉湯滅菌后添肉湯滅菌后添加加20mg/mL過濾除菌的新生霉素，使終濃度為過濾除菌的新生霉素，使終濃度為20g/mL。 改良山梨醇麥康凱瓊脂（改良山梨醇麥康凱瓊脂（TC-SMAC）：山梨醇麥康凱瓊）：山梨醇麥康凱瓊脂加入過濾除菌的脂加入過濾除菌的1%亞碲酸鉀溶液，使終濃度亞碲酸鉀溶液，使終濃度2.5mg/L，頭孢克污，使終濃度為頭孢克污，使終濃度為0.05mg/L。MUG-LST肉湯：肉湯：LST肉湯中添加肉湯中添加4-甲基傘形酮

7、甲基傘形酮-D-葡萄葡萄糖醛酸苷（糖醛酸苷（MUG），使終濃度為），使終濃度為0.1g/L。2、增菌培養、增菌培養稱取稱取25克樣品放入克樣品放入225mL mEC中，均質。于中，均質。于411培養培養18-24小時。小時。93、分離、分離將將mEC肉湯培養物肉湯培養物10倍遞增稀釋。從倍遞增稀釋。從10-4，10-5，10-6稀釋度，各取稀釋度，各取0.1mL涂布于涂布于TC-SMAC平板。于平板。于361培養培養1824小時。小時。可疑可疑 EHEC O157:H7菌落扁平，透明或半透明，邊緣光滑，呈淡褐色中菌落扁平，透明或半透明，邊緣光滑，呈淡褐色中心，直徑約心，直徑約2mm。4、鑒定、

8、鑒定挑取挑取TC-SMAC上的可疑菌落，接種上的可疑菌落，接種MUG-LST，于，于361培養培養1824小小時，出現產氣，且無熒光者，分離到普通營養瓊脂。時，出現產氣，且無熒光者，分離到普通營養瓊脂。對純菌落用對純菌落用EHEC O157:H7標準血清或膠乳凝集試劑作凝集試驗，必要時標準血清或膠乳凝集試劑作凝集試驗，必要時進行生化試驗。進行生化試驗。在檢測過程中，也可以在選擇性增菌后，取出在檢測過程中，也可以在選擇性增菌后，取出5mL增菌液，經增菌液，經100水水浴浴15分鐘滅活后，供自動酶聯熒光免疫測試（分鐘滅活后，供自動酶聯熒光免疫測試（VIDAS），迅速獲得初步），迅速獲得初步結果，陽

9、性反應者需作進一步證實。結果，陽性反應者需作進一步證實。10EHEC OEHEC O157157:H:H7 7檢驗程序圖解檢驗程序圖解 檢樣檢樣25g mEC225mL 酶聯熒光免疫測試酶聯熒光免疫測試VIDAS快速篩選快速篩選 411，18-24h 10-4，10-5，10-6稀釋度涂布稀釋度涂布TC-SMAC 361，18-24h 挑取挑取5-10個可疑菌落接種個可疑菌落接種MUG-LST 361，18-24h MUG陰性培養物轉種普通營養瓊脂陰性培養物轉種普通營養瓊脂 生化反應鑒定生化反應鑒定 血清凝集鑒定或膠乳凝集試驗血清凝集鑒定或膠乳凝集試驗11生化試驗：生化試驗：將斜面培養物移種到

10、下列培養基中進行生化試驗。1 色氨酸肉湯色氨酸肉湯：在361培養242h后,加Kovacs氏試劑0.20.3mL,上層出現紅色為靛基質陽性反應。2 MR-VP培養基：培養基：在361培養482h。以無菌操作移取培養物1 mL至13mm100mm試管中,加5-萘酚乙醇溶液0.6mL,40氫氧化鉀溶液0.2mL和少許肌酸結晶,振搖試管后靜置2h,如出現伊紅色,為VP試驗陽性。將MR-VP培養物的剩余部分再培養48h滴加5 滴甲基紅溶液。如培養物變紅色,為甲基紅試驗陽性,若變黃色則為陰性反應。3 Koser氏枸椽酸鹽肉湯：氏枸椽酸鹽肉湯：于361培養96h記錄有無生長。4 LST肉湯：肉湯：于361

11、培養482h,觀察試管中是否產氣。5 革蘭氏染色：革蘭氏染色：取18h營養瓊脂斜面培養物作革蘭氏染色。大腸桿菌為革蘭氏陰性。12靛基質（靛基質（Indole）試驗：）試驗： 某些細菌能分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚。某些細菌能分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚。吲哚的存在可用顯色反應表現出來。吲哚與對二吲哚的存在可用顯色反應表現出來。吲哚與對二甲基氨基苯醛結合，形成玫瑰吲哚，為紅色化合甲基氨基苯醛結合，形成玫瑰吲哚，為紅色化合物。物。 試驗方法：將待試純培養物小量接種于試驗培養試驗方法：將待試純培養物小量接種于試驗培養基管，于基管，于361C培養培養24h時后，取約時后，取約2ml培養液，培養液，

12、加入加入Kovacs氏試劑氏試劑23滴，輕搖試管，呈紅色為滴，輕搖試管，呈紅色為陽性，或先加少量乙醚或二甲苯，搖動試管以提陽性，或先加少量乙醚或二甲苯，搖動試管以提取和濃縮靛基質，待其浮于培養液表面后，再沿取和濃縮靛基質，待其浮于培養液表面后，再沿試管壁徐緩加入試管壁徐緩加入Kovacs氏試劑數滴，在接觸面呈氏試劑數滴，在接觸面呈紅色，即為陽性。紅色，即為陽性。13甲基紅（甲基紅（Methyl Red）試驗）試驗 腸桿菌科各菌屬都能發酵葡萄糖，在分解葡萄糖過程腸桿菌科各菌屬都能發酵葡萄糖，在分解葡萄糖過程中產生丙酮酸，進一步分解中，由于糖代謝的途徑不中產生丙酮酸，進一步分解中，由于糖代謝的途徑

13、不同，可產生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性產同，可產生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性產物，可使培養基物，可使培養基PH值下降至值下降至pH4.5以下，使甲基紅指以下，使甲基紅指示劑變紅。示劑變紅。V-P試驗試驗 某些細菌在葡萄糖蛋白胨水培養基中能分解葡萄糖產某些細菌在葡萄糖蛋白胨水培養基中能分解葡萄糖產生丙酮酸，丙酮酸縮合，脫羧成乙酰甲基甲醇，后者生丙酮酸，丙酮酸縮合，脫羧成乙酰甲基甲醇，后者在強堿環境下，被空氣中氧氧化為二乙酰，二乙酰與在強堿環境下，被空氣中氧氧化為二乙酰，二乙酰與蛋白胨中的胍基生成紅色化合物，蛋白胨中的胍基生成紅色化合物， 稱稱VP（+）反應。）反應。 大腸桿菌：大

14、腸桿菌：MR + /VP -14枸椽酸鹽試驗：枸椽酸鹽試驗： 某些細菌能利用枸椽酸鹽作為碳源，及磷酸銨某些細菌能利用枸椽酸鹽作為碳源，及磷酸銨作為氮源，將枸椽酸鹽分解為二氧化碳，培養作為氮源，將枸椽酸鹽分解為二氧化碳，培養基反應后成堿性，由于指示劑的作用，培養基基反應后成堿性，由于指示劑的作用，培養基變為蘭色。變為蘭色。 15 用上述方法在樣品中分離獲得的純菌落，用上述方法在樣品中分離獲得的純菌落，經抗經抗E.coli O157:H7標準血清或標準血清或EHEC O157:H7膠乳凝集測試為陽性者，報告檢出膠乳凝集測試為陽性者，報告檢出腸出血性大腸桿菌腸出血性大腸桿菌O157:H7。 如需要進

15、一步檢測如需要進一步檢測Vero毒素基因的存在，毒素基因的存在，可通過接種可通過接種Vero細胞或細胞或Hela細胞，觀察細細胞，觀察細胞病變進行判定，或可使用基因探針檢測胞病變進行判定，或可使用基因探針檢測和聚合酶鏈反應（和聚合酶鏈反應（PCR）檢測法。）檢測法。 16大腸桿菌的檢測大腸桿菌的檢測（1）常規檢測方法）常規檢測方法 國家標準：國家標準：國家標準采用三步法，即：乳糖發酵試驗、分離國家標準采用三步法，即：乳糖發酵試驗、分離培養和證實試驗。培養和證實試驗。 乳糖發酵試驗：樣品稀釋后，選擇三個稀釋度，每個稀釋度乳糖發酵試驗：樣品稀釋后，選擇三個稀釋度，每個稀釋度接種三管乳糖膽鹽發酵管。

16、接種三管乳糖膽鹽發酵管。361培養培養482h，觀察是否，觀察是否產氣。產氣。 分離培養：將產氣發酵管培養物轉種于伊紅美藍瓊脂平板上，分離培養：將產氣發酵管培養物轉種于伊紅美藍瓊脂平板上，361培養培養18-24h，觀察菌落形態。，觀察菌落形態。 證實試驗：挑取平板上的可疑菌落，進行革蘭氏染色觀察。證實試驗：挑取平板上的可疑菌落，進行革蘭氏染色觀察。同時接種乳糖發酵管同時接種乳糖發酵管361培養培養242h，觀察產氣情況。，觀察產氣情況。 報告：根據證實為大腸桿菌陽性的管數，查報告：根據證實為大腸桿菌陽性的管數，查MPN表，報告每表，報告每100ml（g）大腸菌群的）大腸菌群的MPN值。值。1

17、718 原國家商檢局制訂的行業標準原國家商檢局制訂的行業標準，等效采用美國，等效采用美國FDA的的標準方法，用于對出口食品中的大腸桿菌進行檢測。標準方法，用于對出口食品中的大腸桿菌進行檢測。本方法采用兩步法：本方法采用兩步法： 推測試驗：樣品稀釋后，選擇三個稀釋度，每個稀釋推測試驗：樣品稀釋后，選擇三個稀釋度，每個稀釋度接種三管度接種三管LST肉湯。肉湯。361培養培養482h，觀察是否，觀察是否產氣。產氣。 證實試驗：將產氣管培養物接種煌綠乳糖膽鹽證實試驗：將產氣管培養物接種煌綠乳糖膽鹽（BGLB）肉湯管中，）肉湯管中，361培養培養482h，觀察是否，觀察是否產氣。以產氣。以BGLB產氣為

18、陽性。查產氣為陽性。查MPN表，報告每表，報告每ml(g)樣品中大腸菌群的樣品中大腸菌群的MPN值。值。19(2) PCR(2) PCR方法方法大腸桿菌是食品和水源污染糞便的指示菌。大腸桿菌是食品和水源污染糞便的指示菌。Gene-TARK研制出用浸染棒檢測大腸桿菌中研制出用浸染棒檢測大腸桿菌中16SrRNA的探針，樣品需前增菌處理，以異硫的探針，樣品需前增菌處理，以異硫氰熒光素（氰熒光素（FITC）標記探針，再用辣根過氧）標記探針，再用辣根過氧化物酶標記抗化物酶標記抗FITC抗體檢測雜交復合物。抗體檢測雜交復合物。Hsu等報導此方法特異性（除相近的志賀氏菌等報導此方法特異性（除相近的志賀氏菌外

19、）達外）達100，假陽性率達，假陽性率達1.2。208.1.2 8.1.2 沙門氏菌屬（沙門氏菌屬（Salmonella)Salmonella)v 沙門氏菌是引起食物中毒的重要病原菌。在世界各沙門氏菌是引起食物中毒的重要病原菌。在世界各國各類細菌性的食物中毒中，沙門氏菌常居前列。國各類細菌性的食物中毒中，沙門氏菌常居前列。因此，沙門氏菌的檢測是各國檢驗機構對多種進出因此，沙門氏菌的檢測是各國檢驗機構對多種進出口食品的必檢項目之一。口食品的必檢項目之一。v 沙門氏菌屬是腸桿菌科中最復雜的菌屬。它屬于革沙門氏菌屬是腸桿菌科中最復雜的菌屬。它屬于革蘭氏陰性桿菌。可根據沙門氏菌的菌體抗原（蘭氏陰性桿菌

20、。可根據沙門氏菌的菌體抗原（O抗抗原）分群（原）分群（A, B, C等），再根據其鞭毛抗原（等），再根據其鞭毛抗原（H抗抗原）分血清型（原）分血清型（1、2等）。等）。21 沙門氏菌不產生外毒素，但能產生毒力較強的沙門氏菌不產生外毒素，但能產生毒力較強的內毒素。內毒素。 沙門氏菌主要通過食物、飲水經口感染。可存沙門氏菌主要通過食物、飲水經口感染。可存在多種食物中，包括生肉、禽、蛋、奶制品、在多種食物中，包括生肉、禽、蛋、奶制品、蝦、魚和田雞腿等。蝦、魚和田雞腿等。 沙門氏菌主要通過食物、飲水經口感染。根據沙門氏菌主要通過食物、飲水經口感染。根據侵入機體沙門氏菌菌種的不同，在臨床上引起侵入機體沙

21、門氏菌菌種的不同，在臨床上引起四種不同的疾病。四種不同的疾病。22（1）傷寒、副傷寒）傷寒、副傷寒 由沙門氏屬中的傷寒桿菌和甲、乙、丙型副傷寒桿菌引由沙門氏屬中的傷寒桿菌和甲、乙、丙型副傷寒桿菌引起。起。（2）食物中毒）食物中毒 沙門氏菌屬引起的食物中毒，主要以腸炎桿菌、鼠傷寒沙門氏菌屬引起的食物中毒，主要以腸炎桿菌、鼠傷寒桿菌、豬霍亂桿菌、丙型副傷寒桿菌和湯普遜桿菌等最桿菌、豬霍亂桿菌、丙型副傷寒桿菌和湯普遜桿菌等最為多見。臨床癥狀主要是胃腸炎。病程較短，一般為多見。臨床癥狀主要是胃腸炎。病程較短，一般24d, 可完全恢復。可完全恢復。（3）敗血癥）敗血癥 多為豬霍亂桿菌引起，甲、乙、丙型副

22、傷寒桿菌和腸炎多為豬霍亂桿菌引起，甲、乙、丙型副傷寒桿菌和腸炎桿菌亦可引起敗血癥。桿菌亦可引起敗血癥。（4）慢性腸炎）慢性腸炎 沙門氏桿菌可引起慢性、持久性腸炎。沙門氏桿菌可引起慢性、持久性腸炎。23從食品中分離沙門氏菌樣品制備從食品中分離沙門氏菌樣品制備 由于食品種類繁多，且每類中包括許多品種。因其加工方由于食品種類繁多，且每類中包括許多品種。因其加工方式不同，導致性狀各異。故在進行微生物學檢驗時，應按式不同，導致性狀各異。故在進行微生物學檢驗時，應按不同的形狀、加工方式及檢驗目的合理進行檢樣處理。不同的形狀、加工方式及檢驗目的合理進行檢樣處理。檢樣處理檢樣處理 冷凍的檢樣冷凍的檢樣 在檢樣

23、前最好不要解凍，將沙門氏菌的損傷降在檢樣前最好不要解凍，將沙門氏菌的損傷降低到最低限度。低到最低限度。 粉狀樣品粉狀樣品 應將應將225ml增菌液分數次加入，并用滅菌玻棒攪拌增菌液分數次加入，并用滅菌玻棒攪拌成均勻懸液。成均勻懸液。 帶殼蛋類帶殼蛋類 在流水下用刷子刷洗蛋類，并瀝干。將蛋類在含在流水下用刷子刷洗蛋類，并瀝干。將蛋類在含0.1十二烷基磺酸鈉的十二烷基磺酸鈉的200mg/kg Cl-溶液中浸泡溶液中浸泡30min后方后方可破殼取蛋。可破殼取蛋。24檢測方法檢測方法 從食品中分離和鑒定沙門氏菌，當前通常采用的方法共分從食品中分離和鑒定沙門氏菌，當前通常采用的方法共分5個步驟：個步驟：

24、前增菌：前增菌：食品樣品在含有營養的非選擇性培養基中增菌，食品樣品在含有營養的非選擇性培養基中增菌，使受損傷的沙門氏菌細胞恢復到穩定的生理狀態。使受損傷的沙門氏菌細胞恢復到穩定的生理狀態。選擇性增菌：選擇性增菌：此培養基允許沙門氏菌持續增菌，同時阻止此培養基允許沙門氏菌持續增菌，同時阻止大多數其他細菌的增殖。大多數其他細菌的增殖。選擇性平板分離：選擇性平板分離：采用固體選擇培養基，抑制非沙門氏菌采用固體選擇培養基，抑制非沙門氏菌的生長，提供肉眼可見的疑似沙門氏菌純菌落的識別。的生長，提供肉眼可見的疑似沙門氏菌純菌落的識別。生物化學篩選：生物化學篩選：排除大多數非沙門氏菌，也提供了沙門氏排除大多

25、數非沙門氏菌，也提供了沙門氏菌培養物菌屬的初步鑒定。菌培養物菌屬的初步鑒定。血清學技術鑒定培養物菌種血清學技術鑒定培養物菌種。25（1）沙門氏菌的增菌和分離）沙門氏菌的增菌和分離 預增菌預增菌 將制備好的預增菌試液于將制備好的預增菌試液于35培養培養24h后，后，輕輕振搖培養液。輕輕振搖培養液。 選擇性增菌選擇性增菌 選擇性平板分離選擇性平板分離 混勻培養物，用直徑混勻培養物，用直徑3mm的接種的接種環，環，1滿環（滿環（10ul）分別劃線接種于亞硫酸鉍（）分別劃線接種于亞硫酸鉍（BS）瓊脂、木糖賴氨酸去氧膽酸鹽（瓊脂、木糖賴氨酸去氧膽酸鹽（XLD）瓊脂和）瓊脂和HEKTONE氏腸道菌（氏腸道

26、菌（HE）瓊脂平板上，于）瓊脂平板上，于35培養培養24h后，根據沙門氏菌在不同選擇性瓊脂平板后，根據沙門氏菌在不同選擇性瓊脂平板上的菌落特征挑取典型或可疑菌落。上的菌落特征挑取典型或可疑菌落。26（2）沙門氏菌的篩選和生化、血清學鑒定）沙門氏菌的篩選和生化、血清學鑒定 篩選篩選 用滅菌接種針挑取每個典型或可疑菌落的中心部位，用滅菌接種針挑取每個典型或可疑菌落的中心部位，分別接種三糖鐵（分別接種三糖鐵（TSI）、賴氨酸鐵瓊脂斜面，于）、賴氨酸鐵瓊脂斜面，于35培培養養24h。 在在TSI瓊脂中，典型的沙門氏菌培養物可使斜面呈堿色瓊脂中，典型的沙門氏菌培養物可使斜面呈堿色（紅色），底層呈酸色（黃

27、色），產生（紅色），底層呈酸色（黃色），產生H2S（瓊脂變為黑（瓊脂變為黑色）或不產生色）或不產生H2S。 生化學、血清學鑒定生化學、血清學鑒定 混雜培養物混雜培養物 對呈混雜的對呈混雜的TSI瓊脂培養物，皆應劃線于瓊脂培養物，皆應劃線于MC、HE或或XLD瓊脂上，于瓊脂上，于35培養培養24h后，進行重新分離并后，進行重新分離并至少挑取至少挑取2個可疑菌落接種到斜面上進行鑒定。個可疑菌落接種到斜面上進行鑒定。27 純培養物純培養物 將每個可疑陽性的將每個可疑陽性的TSI瓊脂斜面培養物，瓊脂斜面培養物，分別接種于尿素肉湯中，分別接種于尿素肉湯中，35培養培養24h，獲取多量的，獲取多量的瓊脂斜

28、面培養物接種于快速尿素肉湯中，于瓊脂斜面培養物接種于快速尿素肉湯中，于37水水浴培養浴培養2h。棄去所有呈陽性結果的培養物，保留所。棄去所有呈陽性結果的培養物，保留所有呈陰性反應的培養物作進一步鑒定。有呈陰性反應的培養物作進一步鑒定。 血清學多價鞭毛（血清學多價鞭毛（H）試驗）試驗血清學多價菌體（血清學多價菌體（O）試驗）試驗 菌體（菌體（O）群試驗）群試驗 鞭毛（鞭毛（H）試驗陰性培養物的誘導）試驗陰性培養物的誘導（3）結果判定）結果判定288.3 彎曲菌彎曲菌 彎曲菌是一組人畜共患的病原微生物，能引起人彎曲菌是一組人畜共患的病原微生物，能引起人的腹瀉和食物中毒，在國外已被廣泛的重視，同的腹

29、瀉和食物中毒，在國外已被廣泛的重視，同時也被公認為新發現的病原菌之一。時也被公認為新發現的病原菌之一。 彎曲菌是革蘭氏陰性菌，呈弧形和彎曲菌是革蘭氏陰性菌，呈弧形和S型。型。 彎曲菌以病原菌和共生菌廣泛存在于動物中，家彎曲菌以病原菌和共生菌廣泛存在于動物中，家禽家畜是主要的貯存宿主和傳染源，在傳染或帶禽家畜是主要的貯存宿主和傳染源，在傳染或帶菌動物的腸道和生殖道內容物中含有大量的彎曲菌動物的腸道和生殖道內容物中含有大量的彎曲菌。食用被污染的食物、水，尤其是雞、鴨、蛋，菌。食用被污染的食物、水，尤其是雞、鴨、蛋，未消毒或消毒不完全的牛奶，均可致病。未消毒或消毒不完全的牛奶，均可致病。29檢驗方法

30、檢驗方法（1）常規方法）常規方法30（2）現代檢驗技術）現代檢驗技術 基因探針法基因探針法 核酸雜交試驗是以互補核酸鏈能夠特異性結合并核酸雜交試驗是以互補核酸鏈能夠特異性結合并形成穩定的雙鏈復合物為基礎。基因探針系統形成穩定的雙鏈復合物為基礎。基因探針系統采用的是發光劑標記的單鏈采用的是發光劑標記的單鏈DNA探針，該探針探針，該探針與核糖體與核糖體RNA結合形成穩定的結合形成穩定的DNA:RNA雜交體。雜交體。選擇試劑將未雜交和雜交探針分開。標記的選擇試劑將未雜交和雜交探針分開。標記的DNA:RNA雜交作用雜交作用GEN-PROBE發光儀檢測。發光儀檢測。發光儀讀數大于或等于發光儀讀數大于或等

31、于CUT-OFF值的為陽性，值的為陽性，低于低于CUT-OFF值的為陰性。值的為陰性。31 PCR法法 根據彎曲菌屬根據彎曲菌屬16sRNA高保守序列設計一對引物；高保守序列設計一對引物；在合適的反應條件和反應體系下進行反應；最后利在合適的反應條件和反應體系下進行反應；最后利用電泳觀察結果。用電泳觀察結果。 熒光酶標試劑盒熒光酶標試劑盒 檢測彎曲桿菌的探針是用非放射性物質標記的。標檢測彎曲桿菌的探針是用非放射性物質標記的。標記物為發光素。靶順序為記物為發光素。靶順序為rRNA。近年來用堿性磷。近年來用堿性磷酸酶人工合成的寡核苷酸檢測人工污染的糞便樣品，酸酶人工合成的寡核苷酸檢測人工污染的糞便樣

32、品，檢測量為一百萬個菌落形成單位（檢測量為一百萬個菌落形成單位（CFU)，敏感性和，敏感性和特異性達特異性達100。 此方法只在臨床檢測中應用，尚未用于食品檢測。此方法只在臨床檢測中應用，尚未用于食品檢測。328.4 金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌 葡萄球菌是一類革蘭氏陽性菌。它的致病力的葡萄球菌是一類革蘭氏陽性菌。它的致病力的強弱與其產生的毒素及酶類有關。人一旦感染強弱與其產生的毒素及酶類有關。人一旦感染該菌，當機體抵抗力減弱或皮膚受損時，易被該菌，當機體抵抗力減弱或皮膚受損時，易被感染，引起傷口化膿、中耳炎、毛囊炎等。產感染，引起傷口化膿、中耳炎、毛囊炎等。產生葡萄球菌腸毒素的還可引起食物中

33、毒。生葡萄球菌腸毒素的還可引起食物中毒。 對人有致病性的葡萄球菌多產生對人有致病性的葡萄球菌多產生-溶血素；溶血素；對動物有致病性的葡萄球菌多產生對動物有致病性的葡萄球菌多產生-溶血毒素。溶血毒素。33 金黃色葡萄球菌某些菌株能產生一種能引起急金黃色葡萄球菌某些菌株能產生一種能引起急性腸胃炎的腸毒素，當這些菌株污染了食物，性腸胃炎的腸毒素，當這些菌株污染了食物，在溫度條件適宜時，即可產生相當數量的腸毒在溫度條件適宜時，即可產生相當數量的腸毒素，根據腸毒素的血清型別不同，分為素，根據腸毒素的血清型別不同，分為A、B、C、D、E五型。其中以五型。其中以A型引起的食物中毒最型引起的食物中毒最多，多，

34、B和和C型次之。腸毒素是一種可溶性蛋白質型次之。腸毒素是一種可溶性蛋白質純化的腸毒素，能耐高溫。純化的腸毒素，能耐高溫。34 血漿凝固酶是鑒別葡萄球菌有無致病性血漿凝固酶是鑒別葡萄球菌有無致病性的重要指標。血漿凝固酶具有抗原性，的重要指標。血漿凝固酶具有抗原性，可分為可分為8型。大多數致病性葡萄球菌能產型。大多數致病性葡萄球菌能產生此酶，而非致病菌不產生。可應用生此酶，而非致病菌不產生。可應用8個個型的凝固酶抗血清進行分型試驗，用來型的凝固酶抗血清進行分型試驗，用來研究葡萄球菌的流行病學情況。研究葡萄球菌的流行病學情況。35檢驗方法檢驗方法（1）常規檢驗方法）常規檢驗方法36（2）現代檢驗技術

35、）現代檢驗技術 利用利用miniVidas全自動免疫分析儀，它是應用全自動免疫分析儀，它是應用酶聯免疫技術，用熒光分析技術通過固相吸附器，酶聯免疫技術，用熒光分析技術通過固相吸附器，用已知抗體來捕捉目標生物體，然后以帶熒光的用已知抗體來捕捉目標生物體，然后以帶熒光的酶聯抗體再次結合，經充分沖洗，通過激發光源酶聯抗體再次結合，經充分沖洗，通過激發光源檢測，即能自動讀出發光的陽性標本，其優點是檢測，即能自動讀出發光的陽性標本，其優點是檢測靈敏度高、速度快，可在檢測靈敏度高、速度快，可在48h的時間內快速篩的時間內快速篩選鑒定出金黃色葡萄球菌及金黃色葡萄球菌腸毒選鑒定出金黃色葡萄球菌及金黃色葡萄球菌

36、腸毒素。素。37 美國美國3M公司，利用耐熱核酸酶特性，設計出紙公司，利用耐熱核酸酶特性，設計出紙片法，能在片法，能在24h快速檢測出金黃色葡萄球菌。快速檢測出金黃色葡萄球菌。 大多數檢測葡萄球菌的探針是針對腸毒素的。它大多數檢測葡萄球菌的探針是針對腸毒素的。它們能同編碼腸毒素有關的基因序列雜交，這類探們能同編碼腸毒素有關的基因序列雜交，這類探針能檢測腸毒素針能檢測腸毒素A、B、C和和E。 PCR法：設計特異性引物根據產生腸毒素法：設計特異性引物根據產生腸毒素A-E基基因（因（entA, entB, entC, entD和和entE),檢測葡萄球菌檢測葡萄球菌exfoliative基因，檢測中

37、毒休克毒素基因基因，檢測中毒休克毒素基因(tst)。388.5 8.5 肉毒梭菌肉毒梭菌 肉毒梭菌是嚴重食物中毒的病原菌之一，肉毒梭菌是嚴重食物中毒的病原菌之一，在厭氧的環境下能產生強烈的外毒素。這在厭氧的環境下能產生強烈的外毒素。這種毒素毒性強烈，是一種獨特的神經麻痹種毒素毒性強烈，是一種獨特的神經麻痹毒素，即肉毒毒素。該毒素性質穩定，是毒素，即肉毒毒素。該毒素性質穩定，是目前已知化學毒物和生物毒素中毒性最強目前已知化學毒物和生物毒素中毒性最強烈者，對人的致死劑量為烈者，對人的致死劑量為0. 1ug。39 肉毒梭菌在自然界的分布具有某種區域性差異，肉毒梭菌在自然界的分布具有某種區域性差異，顯

38、示出生態上的差異傾向。根據抗原特異性，顯示出生態上的差異傾向。根據抗原特異性，可分為可分為A、B、C、D、E、F、G七個型別。七個型別。 肉毒梭菌一年四季均可發生，發病主要與飲食肉毒梭菌一年四季均可發生，發病主要與飲食習慣有密切的關系。習慣有密切的關系。 歐美國家：肉類食品、罐頭食品；歐美國家：肉類食品、罐頭食品； 日本等沿海國家：進食水產品；日本等沿海國家：進食水產品； 我國內地：進食發酵食品（如臭豆腐、豆瓣醬、豆豉我國內地：進食發酵食品（如臭豆腐、豆瓣醬、豆豉等）。等）。40檢驗方法檢驗方法1）常規肉毒梭）常規肉毒梭菌的檢出菌的檢出GB/T 4789.12-20032）PCR法法報告（一）

39、：檢樣含某型肉毒毒素報告（一）：檢樣含某型肉毒毒素報告（二）：檢樣含某型肉毒梭菌報告（二）：檢樣含某型肉毒梭菌報告（三）：由樣品分離的菌株為某型肉毒梭菌報告（三）：由樣品分離的菌株為某型肉毒梭菌418.6 8.6 致病性弧菌致病性弧菌 弧菌屬共有弧菌屬共有3737個種（變種），其中已明確又個種（變種），其中已明確又1212個種對人個種對人類有致病作用。在這類有致病作用。在這1212種致病菌種，最重要的，也是問種致病菌種，最重要的，也是問題最多的是題最多的是O1O1型霍亂弧菌、非型霍亂弧菌、非O1O1型霍亂弧菌、副溶血性型霍亂弧菌、副溶血性弧菌和創傷弧菌。弧菌和創傷弧菌。霍亂弧菌霍亂弧菌(Vib

40、rionaceae cholerae)(Vibrionaceae cholerae)霍亂弧菌是由霍亂弧菌是由O1O1血清群和血清群和O139O139血清群引起的烈性消化道血清群引起的烈性消化道傳染病。該病傳播快傳染病。該病傳播快, , 波及面廣，是屬于國際檢疫的傳波及面廣，是屬于國際檢疫的傳染病。染病。水是傳播霍亂的主要媒介。水是傳播霍亂的主要媒介。與霍亂有關的食品主要是海產品、有殼的水生動物和甲與霍亂有關的食品主要是海產品、有殼的水生動物和甲殼動物，主要有魚、蝦、貝類、甲魚、牛蛙、蟹等。殼動物，主要有魚、蝦、貝類、甲魚、牛蛙、蟹等。42霍亂弧菌引起的疾病叫霍亂。霍亂弧菌引起的疾病叫霍亂。由霍

41、亂弧菌由霍亂弧菌E1 Tor生物型引起的癥狀較輕，病生物型引起的癥狀較輕，病程也短。程也短。霍亂弧菌腸毒素會引起機體嚴重的嘔吐、腹瀉霍亂弧菌腸毒素會引起機體嚴重的嘔吐、腹瀉等臨床癥狀。等臨床癥狀。霍亂弧菌的檢測方法霍亂弧菌的檢測方法生物學檢測方法，作霍亂弧菌生物學檢測方法，作霍亂弧菌O1+O139多價血多價血清凝集試驗（水、食品）。清凝集試驗（水、食品）。PCR（對毒力基因（對毒力基因ctxAB、tcpA進行擴增）。進行擴增）。43致病性弧菌的檢測方法致病性弧菌的檢測方法1、具有代表性檢驗方法簡介、具有代表性檢驗方法簡介（1） FDA的細菌學分析手冊的細菌學分析手冊霍亂、付弧、創傷弧菌和其他弧

42、菌（霍亂、付弧、創傷弧菌和其他弧菌（1995 1998修訂）分別修訂）分別著重介紹了霍亂弧菌、副溶血弧菌、創傷弧菌的方法。著重介紹了霍亂弧菌、副溶血弧菌、創傷弧菌的方法。用用PCR方法檢測產腸毒素的霍亂弧菌敘述了霍亂腸毒素方法檢測產腸毒素的霍亂弧菌敘述了霍亂腸毒素cholera Toxin (T)基因基因（2） AOAC官方分析方法官方分析方法牡蠣中的霍亂弧菌：升溫富集法（牡蠣中的霍亂弧菌：升溫富集法（1995.a）創傷弧菌的脂肪酸氣相色譜鑒定法創傷弧菌的脂肪酸氣相色譜鑒定法AOAC.(1995.b）美國美國midi公司生產的公司生產的shelock微生物鑒定系統。微生物鑒定系統。44（3）

43、ISO方法方法副溶血弧菌的檢測方法（副溶血弧菌的檢測方法（ISO8914：1990E）（4） NMKL食品中致病性弧菌的檢測和計數（食品中致病性弧菌的檢測和計數（NMKL N0156）介紹了）介紹了霍亂弧菌、副溶血弧菌、創傷弧菌、溶藻弧菌的檢測程序。霍亂弧菌、副溶血弧菌、創傷弧菌、溶藻弧菌的檢測程序。（5） 不同國家的方法不同國家的方法日本、瑞士等國均有相應檢驗方法。日本、瑞士等國均有相應檢驗方法。2、致病性弧菌的檢測方法、致病性弧菌的檢測方法以上介紹的方法均是以單一或少數目標菌（以上介紹的方法均是以單一或少數目標菌（NMKL為四種）為四種）為目的的設計的程序。鑒于國外對出口食品中多種致病性弧

44、為目的的設計的程序。鑒于國外對出口食品中多種致病性弧菌的要求和重視，有必要探討菌的要求和重視，有必要探討“同一程序同時檢測多種弧菌同一程序同時檢測多種弧菌”方法。方法。45檢驗程序檢驗程序 25g樣品樣品+225mL APW(1% NaCl pH9.0) 增菌增菌 378-16h 取取10mL加入雙倍加入雙倍APW 376-8h 選擇選擇 選擇培養基選擇培養基 TCBS（霍利斯用非選擇性的羊血球瓊脂）（霍利斯用非選擇性的羊血球瓊脂） 3724h 定弧菌定弧菌 取黃色或綠色菌落做取黃色或綠色菌落做G染色、氧化酶、動力染色、氧化酶、動力 O/129(150ug)、D-甘露糖甘露糖 分組分組 初步鑒

45、定初步鑒定：0% NaCl , 1% NaCl、硝酸鹽還原、精氨酸、硝酸鹽還原、精氨酸雙水解酶、賴氨酸脫羧、鳥氨酸脫羧、雙水解酶、賴氨酸脫羧、鳥氨酸脫羧、(氧化酶氧化酶) 分成分成5組組 確證確證 最后鑒定最后鑒定468.7 8.7 病毒病毒8.7.1 諾瓦科病毒（諾瓦科病毒（Norwalk virus）l 1972年首次發現。年首次發現。l 諾瓦科病毒是直徑諾瓦科病毒是直徑27nm的圓形結構的病毒，的圓形結構的病毒，無包膜，尚不能在實驗室培養。無包膜，尚不能在實驗室培養。l Norwalk病毒是最重要的引起腹瀉的腸道病毒。病毒是最重要的引起腹瀉的腸道病毒。食品（包括水）被諾瓦科病毒感染后，出

46、現以食品（包括水）被諾瓦科病毒感染后，出現以急性腸胃炎為主的臨床癥狀。目前，這類病毒急性腸胃炎為主的臨床癥狀。目前，這類病毒尚無特效治療藥物。尚無特效治療藥物。47 20世紀世紀70年代在澳大利亞爆發了有年代在澳大利亞爆發了有2000多人感染諾瓦多人感染諾瓦科病毒。另一起病例原因是運垃圾船將垃圾倒在正在科病毒。另一起病例原因是運垃圾船將垃圾倒在正在捕撈貝類的區域。捕撈貝類的區域。 2006年年11月，美國一艘名為月，美國一艘名為“海洋自由海洋自由”號的豪華郵號的豪華郵輪，遭到了諾瓦克病毒的襲擊，在為期一周的航行中，輪，遭到了諾瓦克病毒的襲擊，在為期一周的航行中，300多名乘客和船員感染了諾瓦克

47、病毒，受感染的人數多名乘客和船員感染了諾瓦克病毒，受感染的人數是這艘船搭載的總人數的是這艘船搭載的總人數的7%。 諾瓦科病毒的毒力較強，發病有明顯的季節性（秋冬諾瓦科病毒的毒力較強，發病有明顯的季節性（秋冬季），一般不造成爆發流行。季），一般不造成爆發流行。48 在在2006年底的一周內，日本各地小兒科醫療機年底的一周內，日本各地小兒科醫療機構上報的諾瓦克病毒腹瀉人數，達到了構上報的諾瓦克病毒腹瀉人數，達到了6萬多萬多人，發病率超過了有相關人，發病率超過了有相關 統計統計25年來的歷年最年來的歷年最高紀錄。根據推算，日本境內已經有超過高紀錄。根據推算，日本境內已經有超過300萬人感染諾瓦克病毒

48、。萬人感染諾瓦克病毒。 自自2002年以來，日本每年冬季都會爆發諾瓦克年以來，日本每年冬季都會爆發諾瓦克病毒，其中一些和牡蠣病毒，其中一些和牡蠣(生蠔生蠔)和生海鮮有關。和生海鮮有關。2006年，日本媒體關注諾瓦克病毒和感染者在年，日本媒體關注諾瓦克病毒和感染者在療養院死亡的情況。療養院死亡的情況。2006年到年到2007年，諾瓦克年，諾瓦克感染例子幾乎是之前的感染例子幾乎是之前的3倍。倍。 49檢測方法（1）免疫電鏡法（）免疫電鏡法（IEM） NV被發現后很長一段時間內，電鏡一直是檢測被發現后很長一段時間內，電鏡一直是檢測的主要手段，具有直接、可靠的優點。電鏡觀察的主要手段，具有直接、可靠的

49、優點。電鏡觀察需要的樣品量為需要的樣品量為106107個病毒顆粒個病毒顆粒/mL排泄物。排泄物。這個技術僅在發病早期適用。這個技術僅在發病早期適用。 免疫電鏡能使電鏡的靈敏度提高免疫電鏡能使電鏡的靈敏度提高10-100倍。在顯倍。在顯微鏡下包被康復病人的血清。血清抗體玉同源病微鏡下包被康復病人的血清。血清抗體玉同源病毒相結合，因此提高了診斷效率。但毒相結合，因此提高了診斷效率。但IEM不適合不適合大規模流行病學調查。大規模流行病學調查。50（2）放射免疫和生物素親和素法（）放射免疫和生物素親和素法（RIA法）法） 檢測抗原與檢測抗原與IEM法相比在靈敏度上沒有明顯差異，但用法相比在靈敏度上沒有

50、明顯差異，但用RIA法能檢測出急性期和恢復期之間抗體升高法能檢測出急性期和恢復期之間抗體升高 4倍以上，倍以上，對流行病學調查更有意義。實驗需對流行病學調查更有意義。實驗需6d，同時還需要放射性，同時還需要放射性同位素標記。同位素標記。（3）酶鏈免疫法（）酶鏈免疫法（ELISA) 此法特異性強，靈敏度高，診斷迅速，且較經濟，是目前此法特異性強，靈敏度高，診斷迅速，且較經濟，是目前可廣泛應用的檢測方法。這種技術的檢測樣品量要求可廣泛應用的檢測方法。這種技術的檢測樣品量要求104106病毒顆粒病毒顆粒/mL排泄物。排泄物。51（4）雜交技術和逆轉錄聚合酶鏈反應（）雜交技術和逆轉錄聚合酶鏈反應（RT

51、-PCR） RT-PCR方法是檢測病人排泄物和環境中樣品的諾瓦方法是檢測病人排泄物和環境中樣品的諾瓦科病毒基因的特異手段。這個方法的靈敏度為科病毒基因的特異手段。這個方法的靈敏度為102104病毒顆粒病毒顆粒/mL排泄物。高敏感的排泄物。高敏感的RT-PCR方法依賴于方法依賴于PCR引物的設計。依賴引物的設計。依賴RNA的的RNA聚合酶區域被認為聚合酶區域被認為是諾瓦科病毒基因組的最保守的區域。盡管用于擴增是諾瓦科病毒基因組的最保守的區域。盡管用于擴增的的RdRp區域基因的引物能擴增大多數的諾瓦科病毒，區域基因的引物能擴增大多數的諾瓦科病毒，但由于諾瓦科病毒遺傳多樣性使這些引物很難擴增所但由于

52、諾瓦科病毒遺傳多樣性使這些引物很難擴增所有的諾瓦科病毒。有的諾瓦科病毒。528.7.2 8.7.2 甲肝病毒（甲肝病毒（HAVHAV） 病毒性肝炎是當前危害人類健康的疾病之一。病毒性肝炎是當前危害人類健康的疾病之一。 目前認為病毒性肝炎病原體至少有五種，包括目前認為病毒性肝炎病原體至少有五種，包括甲型肝炎病毒（甲型肝炎病毒（HAV）、乙型肝炎病毒）、乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒（）、丙型肝炎病毒（HCV）、丁型肝）、丁型肝炎病毒（炎病毒（HDV）、戌型肝炎病毒（）、戌型肝炎病毒（HEV），），它們的特性、傳播途徑、臨床經過均不完全相它們的特性、傳播途徑、臨床經過均不完全相同，但它們均能

53、引起肝炎病變。同，但它們均能引起肝炎病變。53項目項目甲型肝炎甲型肝炎乙型肝炎乙型肝炎丙型肝炎丙型肝炎丁型肝炎丁型肝炎戌型肝炎戌型肝炎病毒病毒HAVHAVHBVHBVHCVHCVHDVHDVHEVHEV病毒分類病毒分類微小核糖核微小核糖核酸病毒酸病毒嗜肝脫氧核糖核嗜肝脫氧核糖核酸病毒酸病毒黃病毒黃病毒（缺陷病毒）（缺陷病毒）杯狀病毒杯狀病毒病毒大小病毒大小27nm 27nm 42nm 42nm 303060nm 60nm 40nm 40nm 272734nm 34nm 基因基因ss RNAss RNA（+ +）7.8kb 7.8kb dsDNAdsDNA3,2kb 3,2kb ssRNA(+)

54、ssRNA(+)10.5kb 10.5kb ssRNA(-)ssRNA(-)1.7kb 1.7kb ssRNA(+)ssRNA(+)3.5kb 3.5kb 抗原抗原HAVAgHAVAg（VP1VP14 4） HBsAgHBsAgHBcAgHBcAgHBeAg HBeAg HCVAg HCVAg HDVAg HDVAg HEVAg HEVAg 傳播途徑傳播途徑腸道傳播腸道傳播腸道外及性傳播腸道外及性傳播多數腸道外多數腸道外傳播傳播多數和腸道多數和腸道外傳播外傳播腸道傳播腸道傳播潛伏期（范潛伏期（范圍）圍）2525天（天（15154545天）天）7575天（天（4040120120天）天）5050

55、天（天（15159090天）天）5050天（天（25257575天）天）4040天（天（20203030天）天）慢性化慢性化無無 3 310% 10% 404070% 70% 2 270% 70% 無無 暴發性肝炎暴發性肝炎0.2% 0.2% 0.2% 0.2% 0.2% 0.2% 2 220% 20% 0.20.210% 10% 541973年年Feinslone 首先用免疫電鏡技術在急性期患首先用免疫電鏡技術在急性期患者的糞便中發現甲型肝炎病毒者的糞便中發現甲型肝炎病毒 (Hepatitis A virus,HAV ) 。屬微小。屬微小RNA病毒科，新型腸道病毒病毒科，新型腸道病毒72型。

56、人類感染型。人類感染HAV后，大多表現為亞臨床或隱性后，大多表現為亞臨床或隱性感染，僅少數人表現為急性甲型肝炎。一般可完全感染，僅少數人表現為急性甲型肝炎。一般可完全恢復，不轉為慢性肝炎，亦無慢性攜帶者。恢復，不轉為慢性肝炎，亦無慢性攜帶者。 55HAV56 甲型肝炎病毒主要的傳染病源是甲肝病人。可甲型肝炎病毒主要的傳染病源是甲肝病人。可通過污染水源、食物、食具和手等方式進行傳通過污染水源、食物、食具和手等方式進行傳播，特別是經水和食物，可引起爆發性流行。播，特別是經水和食物，可引起爆發性流行。另外，通過血液也可傳播。另外，通過血液也可傳播。 病人的潛伏期為一個月，在潛伏后期和急性期，病人的潛

57、伏期為一個月，在潛伏后期和急性期，患者的糞便和血液均具有傳染性。患者的糞便和血液均具有傳染性。57檢驗方法檢驗方法（1）免疫電鏡）免疫電鏡 敏感性高，標本中含有敏感性高，標本中含有104106顆粒顆粒/mL可被檢出。可被檢出。 將標本加入特異性抗體將標本加入特異性抗體HAV血清，經孵育后，血清，經孵育后，HAV顆粒與顆粒與抗血清發生凝集，再用超速離心加以濃縮，取其免疫復合抗血清發生凝集，再用超速離心加以濃縮，取其免疫復合物，用磷鎢酸鹽進行染色，于電鏡下檢查物，用磷鎢酸鹽進行染色，于電鏡下檢查HAV球形顆粒。球形顆粒。（2）固相放射免疫測定法）固相放射免疫測定法 將放射性同位素與免疫化學相結合的

58、體外測定超微量物質將放射性同位素與免疫化學相結合的體外測定超微量物質的實驗方法，具有同位素技術的高靈敏性、準確性的優點，的實驗方法，具有同位素技術的高靈敏性、準確性的優點，同時又兼有抗原抗體反應的專一性。同時又兼有抗原抗體反應的專一性。58 另外，檢查方法還有補體結合試驗、酶聯免疫另外，檢查方法還有補體結合試驗、酶聯免疫吸附和免疫黏附血凝試驗等方法。通過利用葡吸附和免疫黏附血凝試驗等方法。通過利用葡萄糖球菌萄糖球菌A蛋白可吸附蛋白可吸附IgG的方法，在單份血的方法，在單份血清中可區別甲肝抗體為清中可區別甲肝抗體為IgM和和IgG，根據急性，根據急性期病人血清抗體為期病人血清抗體為IgM，而恢復

59、期病人的血清，而恢復期病人的血清抗體為主要是抗體為主要是IgG，可對甲肝急性期病人進行，可對甲肝急性期病人進行早期診斷。早期診斷。598.7.3 8.7.3 瘋牛病朊病毒瘋牛病朊病毒p瘋牛病瘋牛病 (“mad cow” disease) 學名為學名為“牛海綿狀牛海綿狀腦病腦病” (Bovine Spongiform Encephalopath - BSE) ，是一種發生在牛身上的進行性中樞神經，是一種發生在牛身上的進行性中樞神經系統病變，癥狀與羊瘙癢癥類似，俗稱系統病變，癥狀與羊瘙癢癥類似，俗稱“瘋牛瘋牛病病”。病牛腦組織呈海綿狀病變，并出現步態。病牛腦組織呈海綿狀病變，并出現步態不穩、平衡失

60、調、搔癢、煩燥不安等癥狀，通不穩、平衡失調、搔癢、煩燥不安等癥狀，通常在常在14至至90天內死亡。由于種類的不同，瘋牛天內死亡。由于種類的不同，瘋牛病的潛伏期長短不同，一般在病的潛伏期長短不同，一般在2到到 30年之間。年之間。60n 20世紀世紀80年代中期至年代中期至90年代中期是瘋牛病暴發流行期，年代中期是瘋牛病暴發流行期，主要的發病國家如英國及其他歐洲國家有大量的牛患病主要的發病國家如英國及其他歐洲國家有大量的牛患病并被宰殺，發生瘋牛病國家的牛肉及牛肉制品的出口受并被宰殺，發生瘋牛病國家的牛肉及牛肉制品的出口受到了嚴格的限制。到了嚴格的限制。n 盡管歐洲各國紛紛采取預防措施，但是到了盡