1、培訓模塊十培訓模塊十 物物 料料 發發 酵酵培訓模塊十培訓模塊十 物物 料料 發發 酵酵一、菌種標簽一、菌種標簽 二、發酵劑制備的衛生要求二、發酵劑制備的衛生要求 三、生產發酵劑制作工藝及操作要點三、生產發酵劑制作工藝及操作要點 四、生產相關設備四、生產相關設備 五、發酵終止五、發酵終止六、發酵過程生產記錄六、發酵過程生產記錄一、菌種標簽一、菌種標簽 標簽應當標注菌種種類、品種、級別、接種標簽應當標注菌種種類、品種、級別、接種日期、保藏條件、保質期、菌種生產經營許可證日期、保藏條件、保質期、菌種生產經營許可證編號、執行標準及生產者名稱、生產地點。編號、執行標準及生產者名稱、生產地點。 標簽標注

2、的內容應當與實際菌種相符。標簽標注的內容應當與實際菌種相符。一、菌種標簽一、菌種標簽意義：意義： 當標明了菌種的名稱、菌株編號、級別、接當標明了菌種的名稱、菌株編號、級別、接種時間、單位名稱、地址、質檢員、有效期、生種時間、單位名稱、地址、質檢員、有效期、生產許可證、合格標簽及產品標準號等內容，產許可證、合格標簽及產品標準號等內容，有利有利于菌種的使用、保藏和管理。于菌種的使用、保藏和管理。二、發酵劑制備的衛生要求二、發酵劑制備的衛生要求 母發酵劑應該在有正壓和配備空氣過濾器的母發酵劑應該在有正壓和配備空氣過濾器的單獨房間中制備。對設備的清洗系統也必須仔細單獨房間中制備。對設備的清洗系統也必須

3、仔細地設計，以防清洗劑和消毒劑的殘留物與發酵劑地設計，以防清洗劑和消毒劑的殘留物與發酵劑接觸而污染發酵劑。接觸而污染發酵劑。 中間發酵劑和生產發酵劑可以在離生產近一中間發酵劑和生產發酵劑可以在離生產近一點的地方或在制備母發酵劑的房間里制備，發酵點的地方或在制備母發酵劑的房間里制備，發酵劑的每一次轉接最好在劑的每一次轉接最好在無菌無菌條件下操作。條件下操作。三、生產發酵劑制作工藝及操作要點三、生產發酵劑制作工藝及操作要點 制作發酵劑的常規過程為：菌種的復活制作發酵劑的常規過程為：菌種的復活 母發酵劑的調制母發酵劑的調制 生產發酵劑的調制。生產發酵劑的調制。 母發酵劑和制備、中間發酵劑和生產發酵劑

4、母發酵劑和制備、中間發酵劑和生產發酵劑的制備工藝基本相同。的制備工藝基本相同。三、生產發酵劑制作工藝及操作要點三、生產發酵劑制作工藝及操作要點主要包括以下步驟：主要包括以下步驟：（1 1）培養基的熱處理）培養基的熱處理 發酵劑制備的第一階段，把培養基發酵劑制備的第一階段，把培養基加熱到加熱到90909595，并在此溫度下保持，并在此溫度下保持303045min45min。（2 2）冷卻）冷卻 加熱后，把培養基冷卻至接種溫度。溫度根據加熱后，把培養基冷卻至接種溫度。溫度根據使用的發酵劑類型而定。使用的發酵劑類型而定。 常見的接種范圍是嗜溫型發酵劑為常見的接種范圍是嗜溫型發酵劑為20203030；

5、嗜熱型發；嗜熱型發酵劑為酵劑為40405050。三、生產發酵劑制作工藝及操作要點三、生產發酵劑制作工藝及操作要點主要包括以下步驟：主要包括以下步驟：（3 3）接種）接種 經過熱處理的培養基，冷卻至所需溫度后，再經過熱處理的培養基，冷卻至所需溫度后，再加入定量的發酵劑加入定量的發酵劑（4 4）培養）培養 溫度必須嚴格控制，不允許污染源與發酵劑接溫度必須嚴格控制，不允許污染源與發酵劑接觸。觸。（5 5）冷卻）冷卻 當發酵劑達到預定的酸度時開始冷卻，以阻止當發酵劑達到預定的酸度時開始冷卻，以阻止細菌的生長，保證發酵劑具有較高活力。細菌的生長，保證發酵劑具有較高活力。三、生產發酵劑制作工藝及操作要點三

6、、生產發酵劑制作工藝及操作要點主要包括以下步驟：主要包括以下步驟：（6 6）貯存）貯存 為了在貯藏時保持發酵劑的活力，常用的方法為了在貯藏時保持發酵劑的活力，常用的方法是冷凍，溫度越低，保存的越好。用液氮冷凍是冷凍，溫度越低，保存的越好。用液氮冷凍-160-160來保存來保存發酵劑，效果很好。發酵劑，效果很好。 在發酵劑的調制過程中，應注意無菌操作；菌種充分活在發酵劑的調制過程中，應注意無菌操作；菌種充分活化；培養基的選擇、配比和處理；接種量的多少；培養的時化；培養基的選擇、配比和處理；接種量的多少；培養的時間和溫度；器皿的消毒等。只有這樣，才能生產出高質量的間和溫度；器皿的消毒等。只有這樣，

7、才能生產出高質量的發酵劑。發酵劑。四、四、生產生產相關設備相關設備（一）實驗相關設備（一）實驗相關設備（二）生產發酵劑試驗設備（二）生產發酵劑試驗設備（三）發酵劑轉接相關設備（三）發酵劑轉接相關設備（四）發酵生產相關設備（四）發酵生產相關設備（一）實驗（一）實驗相關設備相關設備（1 1）干熱滅菌器）干熱滅菌器 發酵劑容器及吸管等滅菌用。發酵劑容器及吸管等滅菌用。（2 2）高壓滅菌器）高壓滅菌器 培養基等滅菌。培養基等滅菌。（3 3）恒溫箱）恒溫箱 培養發酵劑。培養發酵劑。（4 4）帶棉塞試管）帶棉塞試管 供培養菌種的純培養物用。供培養菌種的純培養物用。（5 5）母發酵劑容器）母發酵劑容器 帶棉

8、塞的三角燒瓶帶棉塞的三角燒瓶 ( (容量容量100100300mL)300mL)。（一）實驗（一）實驗相關設備相關設備（6 6）工作發酵劑容器）工作發酵劑容器 大型三角燒瓶或發酵罐和大型三角燒瓶或發酵罐和發酵槽等，可按生產量選擇。發酵槽等，可按生產量選擇。（7 7）滅菌吸管）滅菌吸管 容量容量2 21OmL1OmL，預先包嚴并進行干，預先包嚴并進行干熱滅菌熱滅菌 (160(160，2h)2h)。（8 8）冰箱）冰箱 能調至能調至0 055的冰箱，存放發酵劑用。的冰箱，存放發酵劑用。（二）生產發酵劑試驗設備（二）生產發酵劑試驗設備 有四個做中間發酵有四個做中間發酵劑容器和四個做母發酵劑容器和四個

9、做母發酵劑三角瓶的發酵培養器，劑三角瓶的發酵培養器，水浴溫度能通過面板進水浴溫度能通過面板進行精確控制。行精確控制。（三）發酵劑轉接相關設備（三）發酵劑轉接相關設備1 1、母發酵劑與中間發酵劑轉接相關設備、母發酵劑與中間發酵劑轉接相關設備 一般情況下，生產發酵劑的制一般情況下，生產發酵劑的制作要用兩個罐循環使用，其中一個作要用兩個罐循環使用，其中一個罐準備的是當天要使用的發酵劑，罐準備的是當天要使用的發酵劑，另一個做準備第二天要用的發酵劑。另一個做準備第二天要用的發酵劑。母發酵劑與中間發酵劑的無菌轉運母發酵劑與中間發酵劑的無菌轉運設備。設備。2 2、中間發酵劑與生產發酵劑轉接相關設備、中間發酵

10、劑與生產發酵劑轉接相關設備 從中間發酵劑到生產發酵劑需無菌轉運。從中間發酵劑到生產發酵劑需無菌轉運。（四）（四）發酵發酵生產相關設備生產相關設備1 1、發酵設備的主要組成、發酵設備的主要組成2 2、發酵罐的衛生要求、發酵罐的衛生要求3 3、發酵罐的操作步驟、發酵罐的操作步驟4 4、發酵罐操作的注意事項、發酵罐操作的注意事項1 1、發酵設備的主要組成、發酵設備的主要組成（1 1）培養器；）培養器；（2 2）中間發酵劑容器；）中間發酵劑容器；（3 3）生產發酵劑罐；）生產發酵劑罐；（4 4）空氣過濾器；）空氣過濾器；（5 5）氣閥；）氣閥；（6 6）蒸汽過濾器；）蒸汽過濾器；（7 7）pHpH測定

11、部分。測定部分。2 2、發酵罐的衛生要求、發酵罐的衛生要求（1 1）發酵罐必須是無菌設計。如）發酵罐必須是無菌設計。如: :全封密，三層夾套等，全封密，三層夾套等，能承受負壓至能承受負壓至3OkPa3OkPa和壓力至和壓力至1OOkPa1OOkPa，攪拌器應該是二層，攪拌器應該是二層密封，動力為二速馬達。密封，動力為二速馬達。（2 2）應該安裝符合環保要求過濾器，以防當罐清洗后冷）應該安裝符合環保要求過濾器，以防當罐清洗后冷卻和培養基熱處理后冷卻到培養溫度時，被吸入的空氣卻和培養基熱處理后冷卻到培養溫度時，被吸入的空氣污染發酵劑。污染發酵劑。（3 3）生產發酵罐需要安裝一個固定、完整的）生產發

12、酵罐需要安裝一個固定、完整的pHpH計，它應計，它應能承受在清洗和熱處理時發生的較大的溫差。能承受在清洗和熱處理時發生的較大的溫差。3 3、發酵罐的操作步驟、發酵罐的操作步驟（1 1）校正）校正pHpH電極和溶氧電極。電極和溶氧電極。（2 2）罐體滅菌。根據需要將培養基配入罐體，按要求封）罐體滅菌。根據需要將培養基配入罐體，按要求封好后將罐體放入大滅菌鍋滅菌好后將罐體放入大滅菌鍋滅菌 (1l5 (1l5，3Omin)3Omin)。（3 3）待罐體冷卻后，將其置于發酵臺上，安裝完好；打）待罐體冷卻后，將其置于發酵臺上，安裝完好；打開冷卻水，打開氣泵電源，連接通氣管道開始通氣，調開冷卻水，打開氣泵

13、電源，連接通氣管道開始通氣，調節進氣旋鈕使通氣量適當；打開發酵罐電源，設置溫度、節進氣旋鈕使通氣量適當；打開發酵罐電源，設置溫度、pHpH、攪拌速度等，、攪拌速度等，640r/min640r/min下開機轉動下開機轉動3Omin3Omin，設定溶氧，設定溶氧電極為電極為100100。3 3、發酵罐的操作步驟、發酵罐的操作步驟（4 4）待溫度穩定，各項參數都正確后，將預搖好的種子）待溫度穩定，各項參數都正確后，將預搖好的種子接入，開始發酵計時，并開始記錄各種參數。接入，開始發酵計時，并開始記錄各種參數。（5 5）發酵完畢后清洗罐體和電極，將電極插入有氯化鉀）發酵完畢后清洗罐體和電極，將電極插入有

14、氯化鉀的三角瓶中待用。的三角瓶中待用。（6 6）按要求填寫登記本，由負責人簽字。）按要求填寫登記本，由負責人簽字。4 4、發酵罐操作的注意事項、發酵罐操作的注意事項（1 1）罐體滅菌前務必檢查其中液面高度，要求所有的電）罐體滅菌前務必檢查其中液面高度，要求所有的電極都沒于液面以下。極都沒于液面以下。（2 2）打開發酵罐電源前務必檢查冷卻水是否已打開，溫）打開發酵罐電源前務必檢查冷卻水是否已打開，溫度探頭是否已插入槽中，否則會燒壞加熱電路。度探頭是否已插入槽中，否則會燒壞加熱電路。（3 3）發酵過程中一定要保持工作臺的清潔，用過的培養）發酵過程中一定要保持工作臺的清潔，用過的培養瓶及其他物品及時

15、清理，因故濺出的酸堿液或水應立即瓶及其他物品及時清理，因故濺出的酸堿液或水應立即擦干。擦干。4 4、發酵罐操作的注意事項、發酵罐操作的注意事項（4 4）對罐體安裝、拆卸和）對罐體安裝、拆卸和滅菌時要特別小心滅菌時要特別小心pHpH電極和電極和罐體的易損而又昂貴部件。罐體的易損而又昂貴部件。（5 5）使用發酵罐應登記，）使用發酵罐應登記，使用后由負責人檢查簽字。使用后由負責人檢查簽字。五五、發酵終止、發酵終止 為合理地確定發酵周期，準確判斷放罐時間，通常需考為合理地確定發酵周期，準確判斷放罐時間，通常需考慮的因素：慮的因素：（1 1）經濟因素）經濟因素 發酵時間要以最低的成本獲得最大的生產發酵時

16、間要以最低的成本獲得最大的生產能力的時間為最適發酵時間。發酵后期，生產率大幅度下降，能力的時間為最適發酵時間。發酵后期，生產率大幅度下降，此時延長周期會增加動力消耗，提高管理費用支出等，提高此時延長周期會增加動力消耗，提高管理費用支出等，提高成本。因此，要從經濟學觀點確定合理的放罐時間。成本。因此，要從經濟學觀點確定合理的放罐時間。五五、發酵終止、發酵終止（2 2）產品質量因素）產品質量因素 放罐時間對后續工序有很大影響。若放罐時間過早，發放罐時間對后續工序有很大影響。若放罐時間過早，發酵液內殘留糖、氮、消沫油等含量過多，則將增加過濾難度，酵液內殘留糖、氮、消沫油等含量過多，則將增加過濾難度，

17、且乳化作用增加會干擾樹脂吸附。若放罐時間太晚，菌體會且乳化作用增加會干擾樹脂吸附。若放罐時間太晚，菌體會自溶，釋放出菌體蛋白或體內的酶，發酵液變黏，自溶，釋放出菌體蛋白或體內的酶，發酵液變黏，pHpH上升，上升，不但造成過濾困難、延長過濾時間，有時還會使發酵單位大不但造成過濾困難、延長過濾時間，有時還會使發酵單位大量下降。因此，要考慮發酵周期長短對產物提取工序的影響。量下降。因此，要考慮發酵周期長短對產物提取工序的影響。五五、發酵終止、發酵終止（3 3）特殊因素）特殊因素 在發酵異常的情況下，如染菌、菌體提早自溶或發生事在發酵異常的情況下，如染菌、菌體提早自溶或發生事故時，則需要根據當時的具體

18、情況緊急處理。為了能夠得到故時，則需要根據當時的具體情況緊急處理。為了能夠得到盡可能多的產物，應該及時采取措施盡可能多的產物，應該及時采取措施( (如改變溫度或補充營如改變溫度或補充營養等養等) )，并適當提前或拖后放罐時間。，并適當提前或拖后放罐時間。 合理的放罐時間是由試驗來確定的，即根據不同的發酵合理的放罐時間是由試驗來確定的，即根據不同的發酵時間所得的產物量計算出發酵罐的生產力和產品成本，以生時間所得的產物量計算出發酵罐的生產力和產品成本，以生產力高而成本又低的發酵時間作為放罐時間。產力高而成本又低的發酵時間作為放罐時間。五五、發酵終止、發酵終止2 2、物料的發酵終點判定依據、物料的發

19、酵終點判定依據（1 1）鏡檢觀察菌體的形態、密度，要求芽孢菌發酵結束時）鏡檢觀察菌體的形態、密度，要求芽孢菌發酵結束時芽孢形成率芽孢形成率80%80%；（2 2）監測發酵液中還原糖、總糖、氨基氮、）監測發酵液中還原糖、總糖、氨基氮、pHpH、溶解氧濃、溶解氧濃度、光密度及黏度等理化參數；度、光密度及黏度等理化參數；（3 3）檢測發酵過程中好氧、）檢測發酵過程中好氧、COCO2 2、產生率、呼吸熵、氧傳遞、產生率、呼吸熵、氧傳遞系數等發酵代謝特征參數；系數等發酵代謝特征參數；（4 4）固體發酵中物料的顏色、形態、氣味、含水量等變化。）固體發酵中物料的顏色、形態、氣味、含水量等變化。六、發酵過程生

20、產記錄六、發酵過程生產記錄1 1、記錄的內容、記錄的內容（1 1）編號；）編號；（2 2）產品名稱、規格；）產品名稱、規格；（3 3）生產批號、生產指令；）生產批號、生產指令；（4 4）開始生產的日期和時間、各工序中間產品及成品的完）開始生產的日期和時間、各工序中間產品及成品的完成日期；成日期；（5 5）各工序生產負責人、操作人及檢查員姓名；）各工序生產負責人、操作人及檢查員姓名；（6 6）各工序清場操作記錄、操作者及檢查者姓名；）各工序清場操作記錄、操作者及檢查者姓名；六、發酵過程生產記錄六、發酵過程生產記錄1 1、記錄的內容、記錄的內容（7 7）各工序采用的原輔料名稱、規格、質量情況及數量

21、；）各工序采用的原輔料名稱、規格、質量情況及數量；（8 8）工藝過程中各種關鍵參數及產品數量；）工藝過程中各種關鍵參數及產品數量；（9 9）各工序使用的設備及使用情況；）各工序使用的設備及使用情況；（1010）各工序生產過程中質量控制記錄及質控人員姓名；）各工序生產過程中質量控制記錄及質控人員姓名；（1111）各工序的物料平衡及評估和說明；）各工序的物料平衡及評估和說明；（1212）本批產量；）本批產量；六、發酵過程生產記錄六、發酵過程生產記錄1 1、記錄的內容、記錄的內容（1313）本批產品成品檢驗記錄及檢驗報告單號碼；）本批產品成品檢驗記錄及檢驗報告單號碼；（1414）對特殊情況的記要和注

22、釋；）對特殊情況的記要和注釋；（1515）該產品生產負責人簽名。）該產品生產負責人簽名。 清場記錄的內容包括清場記錄的內容包括: :工序、品名、生產批號、清場日工序、品名、生產批號、清場日期、檢查項目及結果、清場負責人及復查人簽名等。期、檢查項目及結果、清場負責人及復查人簽名等。六、發酵過程生產記錄六、發酵過程生產記錄2 2、生產記錄的填寫要求、生產記錄的填寫要求（1 1）崗位操作記錄由崗位操作人員填寫，崗位負責人、崗）崗位操作記錄由崗位操作人員填寫，崗位負責人、崗位工藝員審核并簽字。位工藝員審核并簽字。（2 2）批生產記錄可由車間工藝員匯總，車間主任審核并簽）批生產記錄可由車間工藝員匯總，車間主任審核并簽字。字。（3 3）原始記錄填寫時不得使用鉛筆。要做到字跡清晰、真）原始記錄填寫時不得使用