1、基金申請策略與技巧講座l選題l撰寫申請書l答辯l好心情、好身體 邊想邊寫 3h /天l讀指南、讀通知 注意截止期l讀標書、讀高手、讀同行l讀自己 賣點??？選題 創新性 工作基礎 l想法變文字 一氣呵成 “立項依據”l溝通 科研科87330567、醫科處 87333055 1. 1. 基礎：繼續和深入基礎：繼續和深入 發表和未發表發表和未發表 創新創新2. 2. 問題問題 中肯中肯 3. 3. 預實驗預實驗 針對針對“問題問題”的預實驗結果的預實驗結果4. 4. 假設假設 思想性、創新性思想性、創新性5. 5. 方法方法 可靠性第一可靠性第一 先進性第二先進性第二6. 6. 目標目標 明確、具體

2、明確、具體7. 7. 意義意義 理論性和應用性理論性和應用性2. 2. 要求：充分的理由和意義要求：充分的理由和意義 思想性思想性 與摘要呼應與摘要呼應 3. 3. 自己的工作為依據自己的工作為依據 圖文并茂圖文并茂 規范規范 4. 4. 參考文獻參考文獻 時效性時效性 自己的文章自己的文章 規范化規范化5. 5. 深入淺出深入淺出 內行、外行讀得懂內行、外行讀得懂 6. 6. 人文文化人文文化 素質素質 精神精神 動人的故事動人的故事 細胞凋亡細胞凋亡 時時SP1對對BH3-only蛋白蛋白Bim的轉錄調控的轉錄調控神經元凋亡時神經元凋亡時 BH3-only蛋白蛋白Bim的轉錄調控的轉錄調控

3、神經元凋亡時神經元凋亡時SP1對對BH3-only蛋白蛋白Bim的的 調控調控 SP1對對BH3-only蛋白蛋白Bim的轉錄調控的轉錄調控 SP1對神經元凋亡的調控作用對神經元凋亡的調控作用l關鍵詞關鍵詞：SP1/Bim /基因調控基因調控/信號轉導信號轉導/神經元凋亡神經元凋亡 l獲得獲得SP1SP1直接調控直接調控bimbim基因表達的可靠證據，闡明促凋基因表達的可靠證據，闡明促凋亡蛋白亡蛋白BimBim由由SP1SP1轉錄調控的新機制，為確立轉錄調控的新機制，為確立SP1SP1作為作為神經退行性疾病治療的新靶點提供更充分的科學依據。神經退行性疾病治療的新靶點提供更充分的科學依據。明確、

4、具體明確、具體 解決學術問題解決學術問題與題目相呼應與題目相呼應 （緊緊圍繞研究目標）（緊緊圍繞研究目標） 1. 證明證明bim啟動子核心區的啟動子核心區的SP1結合序列是否介導了結合序列是否介導了bim基因的上調基因的上調 為了證實bim啟動子核心區的SP1結合序列是否介導了bim基因的上調，將其中的SP1結合序列進行點突變，使其不能結合SP1；確定這一突變是否能夠消除bim啟動子的撤鉀反應。 2. 分析分析SP1 是否能夠與是否能夠與bim啟動子核心區的啟動子核心區的SP1結合序列結合結合序列結合 應用EMSA (Electrophoretic Mobility Shift Assay)技

5、術，證實bim啟動子核心區的SP1 結合序列是否能夠與SP1結合；進一步采用CHIP(Chromatin immunoprecipitation)方法，獲得SP1與bim啟動子核心區在細胞內結合的證據。 3. 從從 bim 的的mRNA 和蛋白質水平，觀察負顯性和蛋白質水平，觀察負顯性SP1是否能夠抑制撤鉀誘導是否能夠抑制撤鉀誘導的的bim基因的上調基因的上調 質粒轉染CGNs的轉染率只能達到0.1-1.0 %，腺病毒的感染率可達7080%1。 因此，構建dnSP1的腺病毒載體Ad-dnSP1，感染CGNs才能達到可靠分析bim的mRNA和蛋白質表達水平改變的目的。 4. 4. 分析分析SP1

6、誘導誘導Bim這一機制對神經元凋亡的調控作用這一機制對神經元凋亡的調控作用 確立SP1轉錄激活bim這一機制后，進一步分析這一機制對神經元凋亡的調控作用。 獲得獲得SP1SP1直接調控直接調控bimbim基因表達的可靠依據?；虮磉_的可靠依據。 研究過程中對達到預期目標有重要影響的某些研究內容或因素。 為達到預期目標所必須掌握的關鍵技術或研究手段。找出關鍵問題，問題清晰，分析透徹， 合理的解決方法。 l項目需求為前提；項目需求為前提；l可靠性第一，先進性第二；可靠性第一，先進性第二；l參考文獻；參考文獻；l突出關鍵技術的描述；突出關鍵技術的描述；l不主張使用流程圖，建議開頭：不主張使用流程圖，

7、建議開頭：“有關方法、技術路線、有關方法、技術路線、試試 驗手段、關鍵技術綜述如下驗手段、關鍵技術綜述如下”。 1. 工作基礎工作基礎 （學術思想）（學術思想） 2. 科研梯隊科研梯隊 3. 實驗條件實驗條件 4. 實驗技術實驗技術 5. 交流與合作（國內、國外）交流與合作（國內、國外） 對創新的理解：創新性與先進性是有根本區別的。對創新的理解：創新性與先進性是有根本區別的。 原始創新：原始創新： 填補空白或修改傳統的理論；填補空白或修改傳統的理論； 新技術、新方法的發明創造。新技術、新方法的發明創造。 跟蹤創新：跟蹤創新： 在前人工作基礎上補充、完善現有理論；在前人工作基礎上補充、完善現有理

8、論； 對原有技術、方法進行修改后產生對原有技術、方法進行修改后產生1 11 12 2的效果。的效果。申請人首次報道了神經元凋亡時促凋亡蛋白Bim上調是不依賴于JNK/c-Jun通路(Leyu Shi,et al, Neurosci Lett. 2005)一觀察之后，又以可靠的實驗結果證明PI3K/Akt/FKHRL1信號通路也不參與bim的上調（見立項依據）。 bim上調的轉錄機制是什么？我們率先對bim啟動子進行了5末端序列續減分析，確立了誘導bim表達的啟動子核心區， 進而發現一個典型的轉錄因子SP1結合序列位于其中。進一步實驗顯示：神經元凋亡時SP1被激活；負顯性SP1突變體和SP1-D

9、NA結合抑制劑mithramycin A可抑制bim的上調。根據以上生物信息學分析和實驗觀察，我們首次提出了SP1介導bim上調這一新的bim轉錄機制：神經元凋亡時轉錄因子SP1被激活，激活的SP1與bim啟動子核心區的SP1結合序列結合，從而轉錄激活bim的表達。 本項目擬進一步采用負顯性SP1突變體的腺病毒表達技術以及啟動子點突變、EMSA和CHIP方法，旨在獲得SP1直接調控bim基因的可靠證據，為闡明SP1對促凋亡蛋白Bim的調控作用和機制并進一步確立SP1作為神經退行性疾病治療的新靶點提供更充分的科學依據。 ( (對于自由申請項目，著重填寫申請對于自由申請項目，著重填寫申請人近期的主

10、要工作業績；對于重點項目，請著重填寫本課題組人近期的主要工作業績；對于重點項目，請著重填寫本課題組與本項目相關的研究工作積累和近五年的主要研究業績與本項目相關的研究工作積累和近五年的主要研究業績) ) ( (包括利用國家重點實驗室和部門開放包括利用國家重點實驗室和部門開放實驗室的計劃與落實情況實驗室的計劃與落實情況) ) 在國家自然科學基金在國家自然科學基金(已結題三項、正進行一項已結題三項、正進行一項)的資助下，近的資助下，近五年有如下工作積累和成績：五年有如下工作積累和成績： 1. SCI論文論文 近五年發表了近五年發表了14篇篇SCI論文；其中與神經元凋亡的信號轉導和基因論文；其中與神經

11、元凋亡的信號轉導和基因調控有關的論文，作為第一作者的有調控有關的論文，作為第一作者的有2篇，作為通訊作者的有篇，作為通訊作者的有4篇篇(見后見后)，作為共同，作為共同作者的有作者的有8篇篇。 2. Bim轉錄機制的前期工作轉錄機制的前期工作 我們首次報道了神經元凋亡時我們首次報道了神經元凋亡時JNK/c-Jun不不參與參與bim的上調的上調1，隨后，我們又以可靠的證據揭示了，隨后，我們又以可靠的證據揭示了PI3K/Akt/ FKHRL1也不介導也不介導bim的上調的上調(未發表資料未發表資料)。這些研究工作改變了以往的觀點。這些研究工作改變了以往的觀點,也是本項目重要的立也是本項目重要的立項依

12、據之一。項依據之一。 3. Bim啟動子核心區確立啟動子核心區確立 啟動子啟動子5末端序列續減分析確立了誘導末端序列續減分析確立了誘導Bim表表達的啟動子核達的啟動子核 心區，并發現一個典型的轉錄因子心區，并發現一個典型的轉錄因子SP1結合序列位于其中。進一步結合序列位于其中。進一步實驗顯示：神經元凋亡時實驗顯示：神經元凋亡時SP1被激活；負顯性被激活；負顯性SP1突變體和突變體和SP1-DNA結合抑制劑結合抑制劑均可抑制均可抑制Bim的上調。這些實驗資料揭示了的上調。這些實驗資料揭示了SP1介導介導 bim轉錄調控的新機制，也轉錄調控的新機制，也為本項目申請提供了最根本的實驗依據。為本項目申

13、請提供了最根本的實驗依據。 4. 轉錄因子調控神經元凋亡的工作基礎轉錄因子調控神經元凋亡的工作基礎 另一項轉錄因子另一項轉錄因子MEF2抗神經元凋亡的工抗神經元凋亡的工作也顯示了申請人與本項目相關的較扎實的研究工作積累。本人首次報道作也顯示了申請人與本項目相關的較扎實的研究工作積累。本人首次報道(Mingtao Li, et al, J of Neurosci. 2001, 21:6544-6552 )、隨后被他人證實、隨后被他人證實(Shu-ichi Okamoto, et al, PNAS 2002, 99:3974-3979)，神經元凋亡時轉錄因子，神經元凋亡時轉錄因子MEF2A和和ME

14、F2D不僅活性降低和失去抗凋亡作用，而不僅活性降低和失去抗凋亡作用，而且被凋亡殺手且被凋亡殺手caspase 剪切，其剪切，其N-末端產物反而具有促凋亡活性。這一末端產物反而具有促凋亡活性。這一MEF2調控凋亡機制的調控凋亡機制的發現，不僅對于我們理解神經元存活或凋亡具有重要的意義，而且也為神經系統的發育和分化發現，不僅對于我們理解神經元存活或凋亡具有重要的意義，而且也為神經系統的發育和分化的研究開拓了一條嶄新的思路，具有創新性。的研究開拓了一條嶄新的思路，具有創新性。 5. 信號轉導的工作基礎信號轉導的工作基礎 較早的一項對較早的一項對cAMP / PKA 抗神經元凋亡機制的研究也反抗神經元

15、凋亡機制的研究也反映了本人在神經元凋亡信號轉導的研究方面有較厚實的工作積累。申請者首次發現促凋映了本人在神經元凋亡信號轉導的研究方面有較厚實的工作積累。申請者首次發現促凋亡激酶亡激酶 GSK-3 和和GSK- 3是是PKA的天然底物；闡明的天然底物；闡明cAMP/PKA 通過磷酸化并抑通過磷酸化并抑制制GSK-3發揮其促神經元存活的作用，此內容發表在分子細胞生物學發揮其促神經元存活的作用，此內容發表在分子細胞生物學( Mingtao Li, et al, Mol Cell Biol. 2000, 20: 9356-9363)。 6. JNK/c-Jun通路的工作基礎通路的工作基礎 我們首次以我

16、們首次以JNK/c-Jun為直接靶點、用小分子為直接靶點、用小分子JNK抑制劑抑制劑(SP600125)治療帕金森病動物，證實治療帕金森病動物，證實JNK是有效的治療靶點。此工作發是有效的治療靶點。此工作發表后表后 (Neuroscience Research, 2004; 48:195-202)，得到了國際同行的認可。，得到了國際同行的認可。SCI期刊期刊Drug News Perspectives邀請本人撰寫了有關邀請本人撰寫了有關“以以JNK為靶點治療帕金森病為靶點治療帕金森病”的專題綜述的專題綜述“JNK Inhibition as a Potential Strategy in Tr

17、eating Parkinsons Disease”(Drug News Perspect. 2004; 17:646-54)。 1. Leyu Shi , Shoufang Gong, Zhongmin Yuan , Chi Ma, Yanling Liu, Chuanfu Wang , Wenming Li, Rongbiao Pi, Shoujian Huang, Ruzhu Chen , Yifan Han , Zixu Mao, and Mingtao Li(通訊作者). Activity deprivation-dependent induction of the proapopt

18、otic BH3-only protein Bim is independent of JNK/c-Jun activation during apoptosis in cerebellar granule neurons. Neurosci Lett. 2005, 375：712. 2. Wenya Wang, Chi Ma, Zixu Mao and Mingtao Li. (通訊作者). JNK inhibition as a potential strategy in treating Parkinsonss disease. Drug News Perspect, 2004, 17(

19、10):646-54. 3. Wenya Wang, Leyu Shi, Yuanbin Xie, Chi Ma, Wenming Li, Xingwen Su, Shoujian Huang, Ruzhu Chen, Zhenyu Zhu, Zixu Mao, Yifan Han and Mingtao Li. (通訊作者). SP600125, a new JNK inhibitor, protects dopaminergic neurons in the MPTP model of Parkinsons disease. Neurosci Res 2004；48:195-202 4.

20、Yuanbin Xie, Yanling Liu, Chi Ma, Zhongmin Yuan, Wenya Wang, Zhenyu Zhu, , Guoquan Gao, Xianguo Liu, Hengxin Yuan, Ruzhu Chen, Shoujian Huang, Xuelan Wang, Xiaonan Zhu, Xuemin Wang, Zixu Mao and Mingtao Li (通訊作者). Indirubin-3-oxime inhibits c-Jun NH2-terminal kinase: anti-apoptotic effect in cerebel

21、lar granule neurons. Neurosci Lett. 2004, 367:355-359. 5. Rongbiao Pi, Wenming Li Nelson T.K.Lee, Hugh H.N.Chan, Yongmei Pu, Ling Nga Chan, Nikolaus J.Sucher, Doanld C. Chang, Mingtao Li and Yifan Han. Minocycline prevents glutamate-induced apoptosis of cerebellar granule neurons by differential reg

22、ulation of p38 and Akt pathways. J Neurochem. 2004, 91:1212-1230. Wenya Wang, Chi Ma, Zixu Mao and Mingtao Li. (通訊作者). JNK inhibition as a potential strategy in treating Parkinsonss disease. Drug News Perspect, 2004, 17(10):646-54. 6. Wenming Li, Rongbiao Pi, Hugh H. N. Chan, Hongjun Fu, Nelson T. K

23、. Lee, Hing Wai Tsang, Yongmei Pu, Donald C. Chang, Chaoying Li, Jialie Luo, Keming Xiong, Zhiwang Li, Hong Xue, Paul R. Carlier, Yuanping Pang, Karl W. K. Tsim, Mingtao Li and Yifan Han. Novel dimeric AChE inhibitor Bis(7)-tacrine, but not Donepezil, prevents glutamate-induced neuronal apoptosis by

24、 blocking NMDA receptors. J Biol Chem. 2005, 280(18):18179-88. 7. Xuemin Wang, Xiaoli Tang, Mingtao Li, John Marshall, Zixu Mao. Regulation of neuroprotective activity of myocyte enhancer factor 2 by cAMP-PKA signaling pathway in neuronal survival. J Biol Chem. 2005, 280(17):16705-13. 8. Marcus Wied

25、mann, Xuemin Wang, X.iaoli Tang, Mingtao Li, Zixu Mao. PI3K/Akt-dependent regulation of the transcription factor myocyte enhancer factor-2 in insulin-like growth factor-1- and membrane depolarization-mediated survival of cerebellar granule neurons. J Neurosci Res. 2005 2005 81(2):226-234. 9.9. Mingt

26、ao Li，Xiaomin Wang，Mary Kay Meintzer，Tracey Laessig，Morris J. Birnbaum and Kim A. Heidenreich. Cyclic AMP promotes neuronal survival by phosphorylation of glycogen synthase kinase 3. Mol Cell Biol. 2000, 20（24）：9356-9363. 10.10. Mingtao Li，Daniel A. Linsenman，Melissa P.Allen，Mary Kay Meintzer， Xiaom

27、in Wang，Tracey Laessig，Margaret E. Wierman & Kim A. Heidenreich. MEF2A and MEF2D undergo phosphorylation and caspase-mediated degradation during apoptosis of rat cerebellar granule neurons. J. Neurosci. 2001; 21(17):6544-6552. 11.11. Daniel A. Linseman, Christopher M. Bartley, Shoshona S. Le, Tr

28、acey A. Laessig, Ron J. Bouchard, Mary Kay Meintzer, Mingtao Li and Kim A. Heidenreich . Inactivation of the Myocyte Enhancer Factor-2 Repressor Histone Deacetylase-5 by Endogenous Ca2/Calmodulin-dependent Kinase II Promotes Depolarization-mediated Cerebellar Granule Neuron Survival. J Biol Chem 200

29、3, 278:4147241481. 12.12. Jing-Ping Yun, Choong-Tsek Liew, Eng Ching Chew, Xiao-Yu Yin, Paul Bo San Lai, Yam Hin Fai, H.K. Richard Li, Mei-Lin Jin, Ming-Xiao Ding, Mingtao Li, Han-Liang Lin, and Wan Yee Lau. Nuclear Matrix Protein Expressions in Hepatocytes of Normal and Cirrhotic Rat Livers Under N

30、ormal and Regenerating Conditions. J Cell Biochem. 2004, 91:12691279. 13. Hongwei Yang, Xiaodong Hu, Hongmei Zhang, Wenjun Xin, Mingtao Li, Tong Zhang, Lijun Zhou and Xianguo Liu. Roles of CaMKII, PKA, and PKC in the induction and mainternance of LTP of C-fiber-evoked field potentials in rat spinal

31、dorsal horn. J Neurophysiol. 2004, 91: 1122-1133.14 . Nengwei Hu, Hongmei Zhang, Xiaodong Hu , Mingtao Li, Tong Zhang, Lijun Zhou and Xianguo Liu. Protein Synthesis Inhibition Blocks the Late-Phase LTP of C-Fiber Evoked Field Potentials in Rat Spinal Dorsal Horn. J Neurophysiol, 2003;89:2354- 235915

32、 . Juan Sun, Mingtao Li, Jiahuai Han and Jun Gu. Sensitization of differentiated PC12 cells to apoptosis by presenilin-2 is mediated by p38. Biochem. Biophy. Res. Commun., 2001, 287: 536-541. 16. Weibin Cai, Jianfang Ma , Chaoyang Li, Zhonghan Yang, Xia Yang, Wei Liu , Zuguo Liu , Mingtao Li, Guoqua

33、n Gao. Enhanced anti-angiogenic effect of a deletion mutant of plasminogen kringle 5 on neovascularization. J Cell Biochem. 2005 Sep 15;(in press).17. Ming YANG, Cun-you WAGN, Feng ZHOU, Jing TAO, Tao LIU, Hai-yan WEI, Wei LIU, Ming-tao Li, Xian-song FENG. Proteomic Analysis in the Early Process of

34、Pancreatic Regeneration in the Pancreatectomized Rat. Acta Pharmacologica Sinica 2005 (in press) 2001年回國，獲得211基金180萬元，組建了一流的分子、細胞生物學實驗室。2002年，作為負責人獲得一期985學科建設經費700萬元，籌建了一流的蛋白質組學實驗室并正在主持開展蛋白質科學的前沿性工作。近三年，培養和匯聚了一支從事分子神經生物學和蛋白質組學研究的科研隊伍。 這些建設性工作為解決細胞信號轉導、基因調控以及本項目的核心問題奠定了扎實的基礎。 項目負責人黎明濤所在單位中山大學基礎醫學院藥理教

35、研室是211項目資助學科和國家重點學科。人才濟濟，科研裝備精良。近三年，藥理教研室獲得學科建設資金3000萬元，已購置大型儀器如質譜儀、激光共聚焦顯微鏡、超速離心機、流式細胞儀、高效液相和蛋白質分離純化系統等。這是申請者視為非?？少F的研究工作環境。 申請者和項目組主要成員申請者和項目組主要成員 l學歷l研究工作簡歷l近期已發表與本項目有關的文章目錄l獲得學術獎勵情況l在本項目中承擔的任務。 黎明濤黎明濤 (Li Mingtao) 項目負責人，中山大學基礎醫學院藥理教研室教授，博士生導師，中山醫學院蛋白質組學實驗室主任。于1984年、1989年和1996年分別獲得醫學學士、碩士和博士學位。 主要

36、研究領域是神經元凋亡的信號轉導、基因調控和蛋白質組學。在美國Department of Pharmacology, University of Colorado Health Sciences Center從事兩年博士后研究（1999-2001），主攻凋亡的信號轉導、基因調控和蛋白質組學。 近五年發表了14篇SCI論文，其中：作為第一作者，在國際核心雜志Molecular and Cellular Biology(Impact Factor, 10.03)和 Journal of Neuroscience(IF, 8.4)發表了具有創新性的文章；作為通訊作者，最近在Neurosci Res(I

37、F, 2.4) 和Neurosci Lett（IF，2.2）等期刊上發表了開拓性的文章。近五年（19982004）作為第一主持人獲得13項基金，包括：4項國家自然科學基金；5項省自然科學基金；3項市基金；1項教育部基金。 發表的相關論文發表的相關論文 1. Leyu Shi , Shoufang Gong, Zhongmin Yuan , Chi Ma, Yanling Liu, Chuanfu Wang , Wenming Li, Rongbiao Pi, Shoujian Huang, Ruzhu Chen , Yifan Han , Zixu Mao, and Mingtao Li(通訊

38、作者). Activity deprivation-dependent induction of the proapoptotic BH3-only protein Bim is independent of JNK/c-Jun activation during apoptosis in cerebellar granule neurons. Neurosci Lett. 2005, 375:712. 2. 3. 皮榮標皮榮標(Pi Rongbiao) 33歲，博士學位，講師。2002年畢業于中山大學，獲神經藥理學博士。同年赴香港科技大學生物化學系從事博士后研究，現在中山大學藥學院任講師。主

39、要研究興趣涉及神經保護藥物的作用及其機制的研究。曾負責或參加包括國家自然科學基金等多項研究。已發表或待發表論著近20篇，其中SCI論文5篇。 皮博士與本人合作達11年，有共同的研究趣向，作為共同作者發表多篇SCI論文。他掌握了本項目涉及的大部分實驗方法和技術，尤其在腺病毒載體構建方面積累了經驗（見文章）。主要負責腺病毒載體構建等工作。 發表的相關論文發表的相關論文 1. Rongbiao Pi, Wenming Li, Nelson T.K.Lee, Hugh H.N.Chan, Yongmei Pu, Ling Nga Chan, Nikolaus J. Sucher, Doanld C.

40、Chang, Mingtao Li and Yifan Han. Minocycline prevents glutamate-induced apoptosis of cerebellar granule neurons by differential regulation of p38 and Akt pathways. J Neurochem. 2004, 91:1212-1230. 2. 3. 黎明濤先生：黎明濤先生： 您好！您申請的項目經專家投票表決，同意資助。您好！您申請的項目經專家投票表決，同意資助。關于你的項目的同行評議意見如下： 1. 本項目在小腦顆粒細胞撤鉀的離體凋亡模型中

41、，發現了一種直接調節Bim的新轉錄因子SP1，申請人試圖采用腺病毒轉染技術、基因突變以及分子生物學方法進一步論證SP1是直接調控bim基因的這一假說。立項具有前言性，申請人工作基礎好，并與美國Emory大學、香港大學有長期的合作條件，完全能夠完成本項課題。建議優先資助。 2. 本項課題的立項依據較為充分，具有一定的學術創新及科學意義。研究內容明確、技術路線清晰、研究方法和方案可行。申請者有較高的學術水平，以及多次主持國家自然科學基金課題的經驗。同時，申請者所在單位又有比較好的實驗室及條件。建議給予資助。 3. 課題研究具有較好的工作基礎，研究具有較高的學術價值，建議資助。 4. 同意資助。理由

42、：該項目立論依據充分，其重要的意義表現在澄清撤鉀誘導神經元凋亡時，Bim上調的細胞內信號轉導機制。申請者有較好的研究基礎和研究能力，項目的內容設置合適，重點突出，總體方案合理，技術路線可行，可資助。 5. This is a nicely writen proposal with a clear aim and practical approaches. Further, the group has published results related to the current proposal, indicating the ability of the group to perform

43、the experiments. l工作基礎好l學術創新性及學術價值l立項依據充分l研究內容明確l技術路線清晰l重點突出、方案合理l國際合作l充滿自信、激情 l儀表和體語 l特點： 專家心理？按提前結束做準備！l準備充分 幻燈 小道具l口頭表達 準確性、情感性、可信性和簡明性l開門見山、突出主題 做什么？為什么？怎樣做？l突出特色和創新黎 明 濤中山大學基礎醫學院中山大學基礎醫學院 現現 狀：狀： 1.發病情況：發病情況： 世界性；中國世界性；中國 100萬；美國萬；美國 100萬萬 2.病理特征：病理特征： 黑質多巴胺神經元凋亡黑質多巴胺神經元凋亡 紋狀體多巴胺含量紋狀體多巴胺含量 3.治療

44、現狀：治療現狀： 左旋多巴左旋多巴對癥治療：療效不理想、安全性受對癥治療：療效不理想、安全性受 到質疑到質疑2002年省重點項目（15萬元）資助 MLK JNK SP600125SP600125 c-Jun 凋亡 1. 1. 保護多巴胺能神經元保護多巴胺能神經元2. 2. 改善行為學指標改善行為學指標3. 3. 提高黑質多巴胺濃度提高黑質多巴胺濃度 結題情況結題情況1. 四篇SCI文章， 通訊作者2. 人才培養： 1名 博士 2名 碩士 JNK Neurosci Res 2004, 48:195-202 Drug News Perspect.2004 17(10):646-54 GSK3 Mi

45、ngtao Li, et al, unpublished data CDK5 PNAS USA 2003,100(23):13650-5 1.三種抑制劑聯合 2.一種抑制劑，“一石三鳥” l Nat Cell Biol. 1999 1(1):60-7l J Biol Chem. 2001, 5;276(1):251-60靛玉紅直接抑制JNK活性靛玉紅直接抑制靛玉紅直接抑制JNK, 保護神經元保護神經元 Indirubin-3-oxime prevented loss of dopamine neurons after MPTP administration. (a) vehicle treat

46、ed (control); (b) MPTP treated; MPTP along with Indirubin-3-oxime 5mg/kg (c); 10mg/kg (d) and 30mg/kg (e). Note Indirubin-3-oxime rescued the dopaminergic neurons loss in a dose-dependent manner (c-e). 以JNK/CDK5/GSK3為明確靶點，以靛玉紅衍生物為抑制劑, 研發出一類毒性小、特異性高、作用強的治療PD的新藥物 1. 篩選對JNK具有特異性抑制作用的靛玉紅衍生物 (11個）2. 篩選對黑

47、質多巴胺神經元凋亡具有保護性干預作用的靛玉紅衍生物 （8個）3. 篩選對PD具有治療作用的衍生物 （4個）4. 藥理、毒理研究1. 首次證實JNK是治療PD的有效靶點2. 證實GSK-3是治療PD的靶點之一3. 發現靛玉紅衍生物能夠抑制JNK，對PD具有治療作用4. 15篇相關SCI文章1.Wiedmann M, Wang X, Tang X, Han M, Li M, Mao Z. J Neurosci Res. 2005 Jun 1 Epub ahead of print 2.Wang X, Tang X, Li M, Marshall J, Mao Z. J Biol Chem. 200

48、5, 280(17):16705-13. 3.Li W, Pi R, Chan HH, Fu H, Lee NT, Tsang HW, Pu Y, Chang DC, Li C, Luo J, Xiong K, Li Z, Xue H, Carlier PR, Pang Y, Tsim KW, Li M, Han Y. J Biol Chem. 2005, 280(18):18179-88. 1. 首次證實JNK是治療PD的有效靶點 2. 證實GSK-3是治療PD的靶點之一 3. 發現靛玉紅能夠抑制JNK，對PD具有治療作用 4. JNK/CDK5/ GSK-3為靶治療PD 5. 用一種化合物

49、抑制JNK/CDK5/ GSK-3 Fig.6 Mithramycin A, a SP1-DNA binding inhibitor, attenuates bim upreguation by activity deprivation in CGNs. (A) Mithramycin A attenuates the upregulation of BimEL induced by activity deprivation in a dose dependent manner. CGNs were placed in 25K or 5K media in the absence or pre

50、sence of mithramycin A at the indicated concentrations for 6 h. BimEL expression was assessed by Western blot as described in Fig.1(A). Results shown are representative of four separate experiments. (B) Mithramycin A inhibits the increase in bim mRNA level in a dose-dependent manner. Neurons were tr

51、eated as described in (A), bim and actin mRNAs were determined by RT-PCR, Results shown are representative of five separate experiments. (C) Mithramycin A suppresses the activation of bim promoter induced by activity deprivation. Neurons were co-transfected with bim-Luc and pEF-RL for 8 hr. Lucifera

52、se activities were measured as described in Fig.2, The experiments were repeated three times with duplicates for each t r e a t m e n t . T h e d a t a r e p r e s e n t S . E . M . o f t h r e e e x p e r i m e n t s . 1. Leyu Shi , Shoufang Gong, Zhongmin Yuan , Chi Ma, Yanling Liu,Chuanfu Wang , Wenming Li, Rongbiao Pi, Shoujian Huang, Ruzhu Chen , Yifan Han , Zixu Mao, and Mingtao Li. Activity deprivation-dependent induction of the proapoptotic BH3-only protein Bim is independent of JNK/c-Jun activatio