1、精選優質文檔-傾情為你奉上ABO血型鑒定的方法步驟與注意事項一.原理根據紅細胞上有或無A抗原或B抗原，將血型分為A型、B型、AB型及O型4種。可利用紅細胞凝集試驗，通過正、反定型準確鑒定ABO血型。所謂正定型，是用已知抗A和抗B分型血清來測定紅細胞上有無相應的A抗原或B抗原；所謂反定型，是用已知A細胞和B細胞來測定血清中有無相應的抗A或抗B。二.試劑和材料1抗A(B型血)、抗B(A型血)及抗A十B(O型血)分型血清（制備方法見本節附注）25A、B及O型試劑紅細胞鹽水懸液，制備方法見本節附注；3受檢者血清；4受檢者5紅細胞鹽水懸液，制備方法見本節附注。三.方法1試管法(1)取潔凈小試管3支，分別

2、標明抗A、抗B和抗A十B，用滴管分別加抗A、抗B和抗A十B。分型血清各l滴于試管底部，再以滴管分別加入受檢者5紅細胞鹽水懸液1滴，混和。(2)另取潔凈小試管3支，分別標明A、B和O細胞。用滴管分別加入受檢者血清l滴于試管底部，再分別以滴管加入A、B和O型5試劑紅細胞懸液l滴，混和。(3)立即以1000rmin離心1min。(4)將試管輕輕搖動，使沉于管底的紅細胞浮起，先以內眼觀察有無凝集(或溶血)現象。如內眼不見凝集，應將反應物倒于玻片上，再以低倍鏡檢查。(5)觀察結果時既要看有無凝集，更要注意凝集強度，此有助于A、B亞型、類B或cisAB的發現。(6)凝集強度判斷標準凝集強度判斷標準4+紅細

3、胞凝集成一大塊，血清清晰透明。3+紅細胞凝集成數小塊，血清尚清晰。2+紅細胞凝塊分散成許多小塊，見到游離紅細胞。1+肉眼可見大顆粒，周圍有較多游離紅細胞+-鏡下可見數個紅細胞凝集在一起，周圍有很多游離紅細胞MF混合凝集外觀(mixed field)是指鏡下可見少數紅細胞凝集，而極大多數紅細胞仍呈分散分布。-表示陰性，鏡下未見凝集，紅細胞均勻分布。2.玻片法（1）取清潔玻片1張(或白瓷板1塊)，用蠟筆劃成方格，標明抗-A、抗-B和抗-A十B，分別用滴管滴加抗-A、抗-B和抗-A十B分型血清 l滴于標明的方格內，再各加受檢者2紅細胞懸液1滴，混和。(2)另取潔凈玻片一張(或白瓷板1塊)，用蠟筆劃成

4、方格，標明A細胞、B細胞和O細胞，用滴管各加受檢者血清1滴，再分別用滴管滴加A、B和O型試劑紅細胞懸液1滴。(3)將玻片(或白瓷板)不斷輕輕轉動，使血清與細胞充分混勻，連續約15min，以肉眼觀察有無凝集(或溶血)反應。如以玻片作試驗時，也可用低倍鏡觀察結果。四.結果判定ABO血型正反定型結果分型血清+受檢者紅細胞受檢者血清+試劑紅細胞受檢者血型抗-A抗-B抗-ABA細胞B細胞O細胞+-+-+-A-+-B-+-O+-AB注；“十”為凝集；“-”為不凝集。五.附注及注意事項1分型血清質量性能符合要求，用畢后應放置冰箱保存，以免細菌污染。2試劑紅細胞以3個健康者同型新鮮紅細胞混和，用生理鹽水洗滌1

5、次，以除卻存在于血清中的抗體及可溶性抗原。3試管、滴管和玻片必須清潔干燥，防止溶血。4操作方法應按規定，一般應先加血清，然后再加紅細胞懸液，以便容易核實是否漏加血清。5按理IgM抗-A和抗-B與相應紅細胞的反應溫度以4為最強，但為了防止冷凝集現象的干擾，一般仍在室溫(2024)內進行試驗，37可使反應減弱。6離心時間不宜過長或過短，速度不宜過快或過慢，以防假陽性或假陰性結果。7觀察時應注意紅細胞呈特異性凝集、繼發性凝固以及緡錢狀排列的區別。8判斷結果后應仔細核對、記錄，避免筆誤。正反定型結果不一致的原因六.常見有技術性問題或紅細胞和血清本身的問題1. 分型血清效價太低、親和力不強。如抗A血清效

6、價不高，可將A亞型誤定為O型，AB型誤定為B型。2紅細胞懸液過濃或過淡，抗原抗體比例不適當，使反應不明顯，誤判為陰性反應。3受檢者紅細胞上抗原位點過少(如亞型)或抗原性減弱(見于白血病或惡性腫瘤：以及類B或cisAB等。4受檢者血清中蛋白紊亂(高球蛋白血癥)，或實驗時溫度過高，常引起紅細胞呈緡錢狀排列。5受檢者血清中缺乏應有的抗-A及或抗B抗體，如丙種球蛋白缺乏癥。6各種原因引起的紅細胞溶解，誤判為不凝集。部分溶血時，可溶性血型物質中和了相應的抗體.7由細菌污染或遺傳因素引起多凝集或全凝集往往是正反定型不符的原因。8血清中有意外抗體，如自身抗-I，常引起干擾。9老年人血清中抗體水平大幅度下降正

7、反定型結果不一致的解決辦法如發現ABO正反定型結果不一致，先要重復作試驗1次。嚴格執行操作規程，使用質量合格的試劑以及細心觀察和解釋試驗結果，就可解決明顯的問題，對一些疑難問題月必須進一步研究。檢查步驟1另從受檢者采取l份新鮮血液標本這樣可以糾正因污染或搞錯樣本造成的不符合。2將紅細胞洗滌數次，配成5鹽水細胞懸液，用抗A、抗B、抗Al，抗A十B及抗H做試驗可以得到其它有用的信息。3對受檢紅細胞作直接抗球蛋白試驗，如結果呈陽性，表示紅細胞已被抗體致敏。4用Al、Az、B、O紅細胞及自身紅細胞檢查受檢血清。如果懷疑是抗I，用O型(或ABO相合的)臍血紅細胞檢查。5如果試驗結果未見凝集，應將細胞及血

8、清試驗至少在室溫和4放置30min，用顯微鏡檢查核實。6如疑為A抗原或B抗原減弱，則可將受檢紅細胞與抗A或抗B血清作吸收及放散試驗以及受檢者唾液作A、B、H血型物質測定。后者只對80HAB分泌型的人有用。7如試驗結果紅細胞呈絹錢狀排列，加等滲鹽水l滴，混和，往往可使絹錢現象消失。應注意不應先加鹽水l滴于受檢者血清中而后和紅細胞作試驗，以免使血清中抗體被稀釋。8如受檢者為A型血而疑為有類B抗原時，可用下列方法進行鑒別：(1)觀察細胞與抗A及抗B的凝集強度，與抗A的反應要比與抗B的反應強。這種區別用玻片法作試驗更為明顯。(2)用受檢者紅細胞與自身血清作試驗，血清中的抗B不凝集自身紅細胞上的類B抗原。(3)檢查唾液中是否有A、B物質，如果是分泌型，可檢出A物質而無B物質。(4)核對患者的診斷，類B抗原的形成與結腸癌、直腸癌、革蘭陰性桿菌感染有關。9如發現多凝集現象，應考慮由遺傳產生的Cad