1、實驗二實驗二溫度、溫度、pHpH值、激活值、激活劑和抑制劑和抑制劑對酶活劑對酶活性的影響性的影響及特異性及特異性一、實驗目的一、實驗目的1 1通過實驗，觀察溫度、通過實驗，觀察溫度、pHpH值、激活劑與值、激活劑與抑制劑對酶促反應速度的影響。抑制劑對酶促反應速度的影響。2 2能運用所學的生化知識對實驗結果進行能運用所學的生化知識對實驗結果進行正確的分析。正確的分析。二、實驗原理二、實驗原理 利用淀粉及其水解產物的顏色反應，來比較唾液淀粉酶在利用淀粉及其水解產物的顏色反應，來比較唾液淀粉酶在不同條件下催化淀粉水解的程度，從而判斷溫度、不同條件下催化淀粉水解的程度，從而判斷溫度、pHpH、激、激動

2、劑和抑制劑對酶的活性影響。動劑和抑制劑對酶的活性影響。淀粉淀粉糊精糊精麥芽糖和葡萄糖麥芽糖和葡萄糖藍藍色色碘碘紫色紫色紅色紅色無色無色無色無色碘碘碘碘二、實驗原理二、實驗原理 u在低溫時，酶活性降低，酶促反應速度較慢，甚在低溫時，酶活性降低，酶促反應速度較慢，甚至停止；隨著溫度升高，酶的活性恢復，反應速至停止；隨著溫度升高，酶的活性恢復，反應速度加快；當達到最適溫度時，酶的活性最大，酶度加快；當達到最適溫度時，酶的活性最大，酶促反應速度達到最大。人體內大多數的酶的最適促反應速度達到最大。人體內大多數的酶的最適溫度在溫度在3737左右。溫度過高，酶變性失活，酶促左右。溫度過高，酶變性失活，酶促反

3、應速度下降，甚至停止。反應速度下降，甚至停止。u每種酶都有最適的每種酶都有最適的pHpH值，在最適值，在最適pHpH值時，酶的活值時，酶的活性最大，酶促反應速度最快；偏離酶的最適性最大，酶促反應速度最快；偏離酶的最適pHpH均均可引起酶蛋白變性而降低或失去活性。唾液淀粉可引起酶蛋白變性而降低或失去活性。唾液淀粉酶的最適酶的最適pHpH值為值為6.86.8。u氯離子對唾液淀粉酶有激活作用；銅離子對唾液氯離子對唾液淀粉酶有激活作用；銅離子對唾液淀粉酶有抑制作用。淀粉酶有抑制作用。三、實驗材料三、實驗材料u1.1%1.1%淀粉溶液淀粉溶液 取可溶性淀粉取可溶性淀粉1g, 1g, 加加5ml5ml蒸餾

4、水蒸餾水, , 調成糊狀調成糊狀, , 再加再加80ml80ml蒸餾水蒸餾水, , 加熱并不斷攪拌加熱并不斷攪拌, , 使其充分溶解使其充分溶解, , 放冷放冷, , 最后用蒸餾水稀釋至最后用蒸餾水稀釋至100ml100ml。u2.pH3.02.pH3.0緩沖液緩沖液 取取0.2mmol/LNa2HPO40.2mmol/LNa2HPO4溶液溶液205ml205ml，0.1mol/L0.1mol/L檸檬酸溶液檸檬酸溶液795ml, 795ml, 混合即成混合即成. .u3.pH6.83.pH6.8緩沖液緩沖液 取取0.2mmol/LNa2HPO40.2mmol/LNa2HPO4溶液溶液772ml

5、772ml，0.1mol/L0.1mol/L檸檬酸溶液檸檬酸溶液228ml, 228ml, 混合即成混合即成. .u4.pH8.04.pH8.0緩沖液緩沖液 取取0.2mmol/LNa2HPO40.2mmol/LNa2HPO4溶液溶液972ml972ml，0.1mol/L0.1mol/L檸檬酸溶液檸檬酸溶液28ml28ml混合即成混合即成. .5.0.9%NaCl溶液溶液 6.1% CuSO4溶液溶液7.碘液碘液 9.試管架試管架 11.試管夾試管夾 12.滴管滴管 13.白瓷板白瓷板 14.恒溫水浴箱恒溫水浴箱 15.電爐電爐 16.燒杯燒杯【注意事項注意事項】1.注意實驗器材的干凈，避免雜

6、質影響反應注意實驗器材的干凈，避免雜質影響反應結果結果2.各管反應時間應嚴格控制，保證一致。各管反應時間應嚴格控制，保證一致。四、實驗方法四、實驗方法 稀釋唾液制備稀釋唾液制備 用水漱口，含蒸餾水咀嚼用水漱口，含蒸餾水咀嚼2 2分鐘分鐘后，把唾液吐進燒杯中備用。后，把唾液吐進燒杯中備用。（注：唾液淀粉酶（注：唾液淀粉酶活性具有個體差異，按下述各實驗方法進行實驗，活性具有個體差異，按下述各實驗方法進行實驗，有部分同學可能失敗，可重新操作，但在重做過有部分同學可能失敗，可重新操作，但在重做過程中，要根據第一次實驗結果改變稀釋唾液的用程中，要根據第一次實驗結果改變稀釋唾液的用量，反應太慢，則增加稀釋

7、唾液用量，如果反應量，反應太慢，則增加稀釋唾液用量，如果反應太快，則減少稀釋唾液的用量）太快，則減少稀釋唾液的用量） 煮沸唾液的制備煮沸唾液的制備 取上述唾液約取上述唾液約5ml5ml，放入沸水中，放入沸水中煮沸煮沸5 5分鐘，取出備用。分鐘，取出備用。（一）溫度對酶促反應速度的影響（一）溫度對酶促反應速度的影響管管 號號 123緩沖液（緩沖液（pH6.8）20滴滴20滴滴20滴滴1%淀粉溶液淀粉溶液10滴滴10滴滴10滴滴把三支管溶液搖勻，然后分別放至相應的溫度中水浴預溫把三支管溶液搖勻，然后分別放至相應的溫度中水浴預溫預溫溫度預溫溫度 0 37 37預溫預溫5分鐘后取出，繼續向各管加入相應

8、唾液分鐘后取出，繼續向各管加入相應唾液稀釋唾液稀釋唾液10滴滴10滴滴 煮沸唾液煮沸唾液10滴滴把三支管搖勻，然后分別放至相應的溫度中水浴把三支管搖勻，然后分別放至相應的溫度中水浴10分鐘，加碘分鐘，加碘2滴滴水浴溫度水浴溫度 03737結果與分析結果與分析 取白瓷板一塊，向各凹分別加取白瓷板一塊，向各凹分別加1 1滴碘液，每滴碘液，每隔半分鐘用滴管或玻棒從隔半分鐘用滴管或玻棒從2 2號管取溶液號管取溶液1 1滴，滴，加到已加有碘液的小凹中，觀察顏色變化，加到已加有碘液的小凹中，觀察顏色變化，直至與碘不呈色時（即只顯棕黃色時），直至與碘不呈色時（即只顯棕黃色時），向各管加碘液向各管加碘液1 1

9、滴，搖勻觀察顏色變化滴，搖勻觀察顏色變化( (切切記勿搖動記勿搖動) )。搖勻再觀察。搖勻再觀察。（二）（二）pH對酶促反應速度的影響對酶促反應速度的影響管號管號1231%淀粉溶液淀粉溶液10滴滴10滴滴10滴滴pH5.0緩沖液緩沖液10滴滴pH6.8緩沖液緩沖液10滴滴pH8.0緩沖液緩沖液10滴滴稀釋唾液稀釋唾液5滴滴5滴滴5滴滴把三支管搖勻，然后放至把三支管搖勻，然后放至 37水浴水浴10分鐘，加碘分鐘，加碘2滴搖勻滴搖勻結果與分析結果與分析 將各管混勻，放進將各管混勻，放進3737水浴箱水浴箱中保溫。中保溫。 取白瓷板一塊，向各凹分別加取白瓷板一塊，向各凹分別加1 1滴碘液，每隔半分鐘

10、用滴管滴碘液，每隔半分鐘用滴管或玻棒從或玻棒從2 2號管取溶液號管取溶液1 1滴，加滴，加到已加有碘液的小凹中，觀察到已加有碘液的小凹中，觀察顏色變化，直至與碘不呈色時顏色變化，直至與碘不呈色時（即只顯棕黃色時），向各管（即只顯棕黃色時），向各管加碘液加碘液1 1滴，搖勻觀察顏色變滴，搖勻觀察顏色變化。化。（三）激活劑與抑制劑對酶促反應速度的影響（三）激活劑與抑制劑對酶促反應速度的影響管號管號12341%淀粉溶液淀粉溶液10滴滴10滴滴10滴滴10滴滴pH6.8緩沖液緩沖液10滴滴10滴滴10滴滴10滴滴蒸餾水蒸餾水2滴滴氯化鈉溶液氯化鈉溶液2滴滴CuSO4溶液溶液2滴滴Na2SO4溶液溶液2

11、滴滴稀釋唾液稀釋唾液5滴滴5滴滴5滴滴5滴滴把三支管搖勻，然后放至把三支管搖勻，然后放至 37水浴水浴10分鐘，加碘分鐘，加碘2滴搖勻滴搖勻結果與分析結果與分析 將各管搖勻，放進將各管搖勻，放進3737水水浴箱中保溫。取白瓷板一浴箱中保溫。取白瓷板一塊，向各凹分別加塊，向各凹分別加1 1滴碘滴碘液，每隔半分鐘用滴管或液，每隔半分鐘用滴管或玻棒從玻棒從2 2號管取溶液號管取溶液1 1滴，滴，加到已加有碘液的小凹中，加到已加有碘液的小凹中，觀察顏色變化，直至與碘觀察顏色變化，直至與碘不呈色時（即只顯棕黃色不呈色時（即只顯棕黃色時），向各管加碘液時），向各管加碘液1 1滴，滴，搖勻，觀察各管顏色變化。搖勻，觀察各管顏色變化。 激活劑與抑制劑激活劑與抑制劑激活劑與抑制劑激活劑與抑制劑五、思考題五、思考題1. 什么是酶的最適溫度？什么是酶的最適溫度？2. 什么是酶的最適什么是酶的最適pH?3. 激活劑與抑制劑對酶活性影激活劑與抑制劑對酶活性影 響實驗中設置第四管的作用響實驗中設置第四管的作用 是什么？是什么？4. 什么是酶的特異性？什么是酶的特異性？（四）（四） 酶的專一性對酶促反應的影響。酶的專一性對酶促反應的影響。加入物加入物1號管號管2號管號管3號管號管PH值值6.8緩