1、6. 蛋白質(zhì)和氨基酸的測定6.1 概述6.2 凱氏定氮法6.3氨基酸氮的測定教學(xué)內(nèi)容n了解蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)系數(shù)、氨基酸和氨基了解蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)系數(shù)、氨基酸和氨基酸態(tài)氮的概念，凱氏定氮法原理和方法，酸態(tài)氮的概念，凱氏定氮法原理和方法，氨基酸和氨基酸態(tài)氮的測定原理；氨基酸和氨基酸態(tài)氮的測定原理；n掌握凱氏定氮法和雙指示劑甲醛滴定法、掌握凱氏定氮法和雙指示劑甲醛滴定法、電位滴定法。電位滴定法。自學(xué)引導(dǎo)題自學(xué)引導(dǎo)題1、蛋白質(zhì)系數(shù)是如何計算出來的？、蛋白質(zhì)系數(shù)是如何計算出來的？2、蛋白質(zhì)的測定方法有哪些？國家標(biāo)準(zhǔn)是哪、蛋白質(zhì)的測定方法有哪些？國家標(biāo)準(zhǔn)是哪一種方法？一種方法？6.1 概述概述(1)蛋白質(zhì)的生

2、理功能蛋白質(zhì)的生理功能(2)蛋白質(zhì)含量的測定意義蛋白質(zhì)含量的測定意義(3)蛋白質(zhì)的組成及性質(zhì)蛋白質(zhì)的組成及性質(zhì)(4)蛋白質(zhì)的測定方法蛋白質(zhì)的測定方法(5)蛋白質(zhì)系數(shù)蛋白質(zhì)系數(shù)l2004/4安徽阜安徽阜陽劣質(zhì)奶粉致陽劣質(zhì)奶粉致大頭娃娃171,13人死人死l頭臉胖大，四肢細(xì)短，體重比出生時還輕 l205個奶粉品46個不合格生產(chǎn)廠家的55種奶粉。分布8個省，其中蛋白質(zhì)含量低于5%的有31種，最少的僅為0.37%，蛋白質(zhì)是生命的物質(zhì)基礎(chǔ)蛋白質(zhì)是生命的物質(zhì)基礎(chǔ)維持人體的酸堿平衡、水平衡維持人體的酸堿平衡、水平衡遺傳信息的傳遞遺傳信息的傳遞物質(zhì)的代謝及運(yùn)轉(zhuǎn)都與蛋白質(zhì)有關(guān)。物質(zhì)的代謝及運(yùn)轉(zhuǎn)都與蛋白質(zhì)有關(guān)。

3、6.1 概述概述 (2)蛋白質(zhì)含量的測定意義蛋白質(zhì)含量的測定意義人體重要的營養(yǎng)物質(zhì)人體重要的營養(yǎng)物質(zhì), ,食品的營養(yǎng)指標(biāo)。食品的營養(yǎng)指標(biāo)。合理開發(fā)利用食品資源合理開發(fā)利用食品資源、優(yōu)化食品配方優(yōu)化食品配方、指指導(dǎo)經(jīng)濟(jì)核算及生產(chǎn)過程控制導(dǎo)經(jīng)濟(jì)核算及生產(chǎn)過程控制 、提高提高和監(jiān)督和監(jiān)督產(chǎn)產(chǎn)品質(zhì)量品質(zhì)量。蛋白質(zhì)是復(fù)雜的含氮有機(jī)蛋白質(zhì)是復(fù)雜的含氮有機(jī)化合化合物，分子量很大物，分子量很大。組成：組成：2020種氨基酸通過酰胺鍵以一定的方式結(jié)合種氨基酸通過酰胺鍵以一定的方式結(jié)合起來起來化學(xué)元素：化學(xué)元素：C C、H H、O O 、N N（P P、S S、CuCu、FeFe、I I）；）；官能基團(tuán)：肽鍵、氨

4、基酸殘基、酸堿基因、芳香官能基團(tuán)：肽鍵、氨基酸殘基、酸堿基因、芳香基團(tuán)基團(tuán)結(jié)論：結(jié)論：含氮則是蛋白質(zhì)區(qū)別其他有機(jī)化合物的主含氮則是蛋白質(zhì)區(qū)別其他有機(jī)化合物的主要標(biāo)志要標(biāo)志。(3)(3)蛋白質(zhì)的組成及性質(zhì)蛋白質(zhì)的組成及性質(zhì) 可分為兩大類：可分為兩大類： 一類是利用蛋白質(zhì)的共性，如含氮、肽鍵、折射率一類是利用蛋白質(zhì)的共性，如含氮、肽鍵、折射率等等 ； 另一類是利用蛋白質(zhì)中特定氨基酸殘基、酸性或堿另一類是利用蛋白質(zhì)中特定氨基酸殘基、酸性或堿性基團(tuán)以及芳香基團(tuán)等測定蛋白質(zhì)含量。性基團(tuán)以及芳香基團(tuán)等測定蛋白質(zhì)含量。目前目前蛋白質(zhì)測定最常用的方法是凱氏定氮法蛋白質(zhì)測定最常用的方法是凱氏定氮法，通過，通過測

5、總氮量來確定蛋白質(zhì)含量。測總氮量來確定蛋白質(zhì)含量。(4)蛋白質(zhì)的測定方法蛋白質(zhì)的測定方法蛋白質(zhì)系數(shù)：每份氮素相當(dāng)于的蛋白質(zhì)的份蛋白質(zhì)系數(shù)：每份氮素相當(dāng)于的蛋白質(zhì)的份數(shù)。一般蛋白質(zhì)含氮為數(shù)。一般蛋白質(zhì)含氮為16%16%，所以，所以1 1份氮素相份氮素相當(dāng)于當(dāng)于6.256.25份蛋白質(zhì)。份蛋白質(zhì)。此數(shù)值（此數(shù)值（6.256.25）稱為蛋白）稱為蛋白質(zhì)系數(shù)質(zhì)系數(shù)，用，用F F表示。表示。不同的蛋白質(zhì)由于氨基酸的構(gòu)成比例及方式不同的蛋白質(zhì)由于氨基酸的構(gòu)成比例及方式不同，含氮量不同。不同，含氮量不同。不同種類不同種類的的食品的蛋白質(zhì)系數(shù)有所不同食品的蛋白質(zhì)系數(shù)有所不同。(5)蛋白質(zhì)系數(shù)蛋白質(zhì)系數(shù)n不同產(chǎn)

6、品的蛋白質(zhì)系數(shù)不同產(chǎn)品的蛋白質(zhì)系數(shù)(F) 玉米、雞蛋、青豆等：玉米、雞蛋、青豆等：6.25 花生：花生：5.46 大米：大米：5.95 大豆及制品：大豆及制品：5.71 小麥：小麥：5.70 牛乳及制品：牛乳及制品：6.38(1) 原理原理 樣品與濃硫酸和催化劑一同加熱消化，使蛋白樣品與濃硫酸和催化劑一同加熱消化，使蛋白質(zhì)分解，其中碳和氫被氧化為二氧化碳和水逸出，質(zhì)分解，其中碳和氫被氧化為二氧化碳和水逸出，而樣品中的有機(jī)氮轉(zhuǎn)化為氨與硫酸結(jié)合成硫酸銨。而樣品中的有機(jī)氮轉(zhuǎn)化為氨與硫酸結(jié)合成硫酸銨。然后加堿蒸餾，使氨蒸出，用硼酸吸收后再以標(biāo)然后加堿蒸餾，使氨蒸出，用硼酸吸收后再以標(biāo)準(zhǔn)鹽酸或硫酸溶液滴

7、定。從消耗的標(biāo)準(zhǔn)酸計算出準(zhǔn)鹽酸或硫酸溶液滴定。從消耗的標(biāo)準(zhǔn)酸計算出總氮量，再折算為粗蛋白含量。總氮量，再折算為粗蛋白含量。 1、通過學(xué)習(xí)覬氏定氮法的原理，我們可知道、通過學(xué)習(xí)覬氏定氮法的原理，我們可知道操作分為哪幾個大的步驟？操作分為哪幾個大的步驟？2、加入、加入硫酸鉀硫酸鉀、硫酸銅的作用是什么？、硫酸銅的作用是什么？自學(xué)引導(dǎo)1、消化消化反應(yīng)方程式如下：反應(yīng)方程式如下： 使有機(jī)物脫水后被炭化為碳、使有機(jī)物脫水后被炭化為碳、氫、氮。氫、氮。將有機(jī)物炭化后的碳氧化將有機(jī)物炭化后的碳氧化為二氧化碳，硫酸則被還原成二氧化硫：為二氧化碳，硫酸則被還原成二氧化硫： 2H2H2 2SOSO4 4 C C 2

8、SO2SO2 2 2H2H2 2O O COCO2 2 在消化完全的樣品溶液中加入濃氫氧在消化完全的樣品溶液中加入濃氫氧化鈉使呈堿性，加熱蒸餾，即可釋放出氨化鈉使呈堿性，加熱蒸餾，即可釋放出氨氣，反應(yīng)方程式如下：氣，反應(yīng)方程式如下：3、吸收、吸收 加熱蒸餾所放出的氨，可用硼酸溶液進(jìn)行吸收：加熱蒸餾所放出的氨，可用硼酸溶液進(jìn)行吸收：2NH3 + 4H3BO3 (NH4)2 B4O7 + 5H2O4、滴定、滴定 待吸收完全后，再用鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定：待吸收完全后，再用鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定：(NH4)2 B4O7 + 2HCl + 5H2O 2NH4Cl + 4H3BO3 準(zhǔn)確稱取均勻的固體樣品準(zhǔn)確稱取均

9、勻的固體樣品0.53g,或半固或半固體樣品體樣品25g,或吸取溶液樣品或吸取溶液樣品1525ml。小心移入干燥的凱氏燒瓶中小心移入干燥的凱氏燒瓶中(勿粘附在瓶壁勿粘附在瓶壁上上)。加入。加入0.51g硫酸銅硫酸銅、10g硫酸鉀及硫酸鉀及25ml濃硫酸，小心搖勻后，于瓶口置一小濃硫酸，小心搖勻后，于瓶口置一小漏斗，瓶頸漏斗，瓶頸45角傾斜置電爐上，在通風(fēng)角傾斜置電爐上，在通風(fēng)櫥內(nèi)加熱消化櫥內(nèi)加熱消化。n若無通風(fēng)櫥可于瓶口倒插入一口徑適宜的若無通風(fēng)櫥可于瓶口倒插入一口徑適宜的干燥管，用膠管與水力真空管相連接，利干燥管，用膠管與水力真空管相連接，利用水力抽除消化過程所產(chǎn)生的煙氣。用水力抽除消化過程所

10、產(chǎn)生的煙氣。n先以小火緩慢加熱，待內(nèi)容物完全炭化先以小火緩慢加熱，待內(nèi)容物完全炭化、泡沫消失后，加大火力消化至溶液呈藍(lán)綠泡沫消失后，加大火力消化至溶液呈藍(lán)綠色。取下漏斗，繼續(xù)加熱色。取下漏斗，繼續(xù)加熱0.5h，冷卻至室冷卻至室溫。溫。注意問題：注意問題：n加入樣品不要沾附在凱氏燒瓶瓶頸；加入樣品不要沾附在凱氏燒瓶瓶頸；n消化開始時不要用強(qiáng)火，要控制好熱源，消化開始時不要用強(qiáng)火，要控制好熱源，并注意不時轉(zhuǎn)動凱氏燒瓶，以便利用冷凝并注意不時轉(zhuǎn)動凱氏燒瓶，以便利用冷凝酸液將附在瓶壁上的固體殘渣洗下并促進(jìn)酸液將附在瓶壁上的固體殘渣洗下并促進(jìn)其消化完全；其消化完全；n樣品中若含脂肪或糖較多，在消化前應(yīng)樣

11、品中若含脂肪或糖較多，在消化前應(yīng)加入少量辛醇或液體石蠟或硅油作消泡劑，加入少量辛醇或液體石蠟或硅油作消泡劑，以防消化過程中產(chǎn)生大量泡沫；以防消化過程中產(chǎn)生大量泡沫；n消化完全后要冷至室溫才能稀釋或定容。消化完全后要冷至室溫才能稀釋或定容。所用試劑溶液應(yīng)用無氨蒸餾水配制。所用試劑溶液應(yīng)用無氨蒸餾水配制。 蒸餾蒸餾、吸收吸收n按圖裝好蒸餾裝置，按圖裝好蒸餾裝置，冷凝管下端浸入冷凝管下端浸入接受瓶液面之下接受瓶液面之下（瓶內(nèi)預(yù)先裝有（瓶內(nèi)預(yù)先裝有50ml 40gL硼酸溶液及混合指示劑硼酸溶液及混合指示劑56滴）。滴）。注意問題：注意問題：n安裝的裝置應(yīng)整齊美觀、協(xié)調(diào)，儀器各部安裝的裝置應(yīng)整齊美觀、協(xié)

12、調(diào)，儀器各部件應(yīng)在同一平面內(nèi)平行或垂直。件應(yīng)在同一平面內(nèi)平行或垂直。n不能漏氣。不能漏氣。n要注意控制熱源要注意控制熱源使蒸汽產(chǎn)生穩(wěn)定使蒸汽產(chǎn)生穩(wěn)定，不能時，不能時猛時弱，以免吸收液倒吸；蒸餾前加堿量猛時弱，以免吸收液倒吸；蒸餾前加堿量應(yīng)使消化液呈深藍(lán)色或產(chǎn)生黑色沉淀。應(yīng)使消化液呈深藍(lán)色或產(chǎn)生黑色沉淀。n冷凝管下端先插入硼酸吸收液液面以下才冷凝管下端先插入硼酸吸收液液面以下才能蒸餾。能蒸餾。3、滴定、滴定n將接受瓶內(nèi)的硼酸液用將接受瓶內(nèi)的硼酸液用0.1mol/L鹽酸鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至終點。同時做一試劑標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至終點。同時做一試劑空白（除不加樣品，從消化開始操作空白（除不加樣品，從消化開始操

13、作完全相同）。完全相同）。注意問題：注意問題：n所用試劑溶液應(yīng)用無氨蒸餾水配制。所用試劑溶液應(yīng)用無氨蒸餾水配制。（3）試劑消化用：消化用：n濃硫酸濃硫酸n硫酸鉀硫酸鉀n硫酸銅硫酸銅蒸餾用：蒸餾用：n40%氫氧化鈉溶液氫氧化鈉溶液吸收用：吸收用：n4%硼酸硼酸滴定用：滴定用：n0.1000mol/L HCl標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)準(zhǔn)溶液n0.1%甲基紅乙醇溶液與甲基紅乙醇溶液與0.1%溴甲酚綠乙溴甲酚綠乙醇溶液混合指示劑醇溶液混合指示劑硫酸鉀硫酸鉀的作用的作用 加入硫酸鉀可以加入硫酸鉀可以提高溶液的沸點提高溶液的沸點而加而加快快有有機(jī)物的分解，它與硫酸作用生成硫酸氫鉀可提機(jī)物的分解，它與硫酸作用生成硫酸氫鉀可

14、提高反應(yīng)溫度其反應(yīng)式如下：高反應(yīng)溫度其反應(yīng)式如下： K2SO4+H2SO4=2KHSO4 2KHSO4=K2SO4+H2O+SO3但硫酸鉀加入量不能太大，否則消化體系但硫酸鉀加入量不能太大，否則消化體系溫度過高，又會引起已生成的銨鹽發(fā)生熱分解溫度過高，又會引起已生成的銨鹽發(fā)生熱分解而造成損失：而造成損失： （NH4）2SO4=NH3+(NH4)HSO4 2(NH4)HSO4=2NH3+2SO3+2H2O硫酸銅的作用 催化作用、指示作用催化作用、指示作用（消化完全指示：藍(lán)（消化完全指示：藍(lán)綠色；蒸餾時堿性反應(yīng)完全指示：變深藍(lán)綠色；蒸餾時堿性反應(yīng)完全指示：變深藍(lán)色或產(chǎn)生黑色沉淀）色或產(chǎn)生黑色沉淀）

15、 說明事項：說明事項： 蒸餾過程應(yīng)注意接頭處無蒸餾過程應(yīng)注意接頭處無松漏松漏現(xiàn)象，蒸現(xiàn)象，蒸餾完畢，先將蒸餾出口離開液面，繼續(xù)餾完畢，先將蒸餾出口離開液面，繼續(xù)蒸餾蒸餾1 1minmin，將附著在尖端的吸收液完全將附著在尖端的吸收液完全洗入吸收瓶內(nèi)，再將吸收瓶移開，最后洗入吸收瓶內(nèi)，再將吸收瓶移開，最后關(guān)閉電源，關(guān)閉電源，絕絕不能先關(guān)閉電源，否則吸不能先關(guān)閉電源，否則吸收液將發(fā)生倒吸。收液將發(fā)生倒吸。微量凱氏定氮法微量凱氏定氮法n微量凱氏定氮法的原理與操作方法，與常微量凱氏定氮法的原理與操作方法，與常量法基本相同，所不同的是樣品質(zhì)量及試量法基本相同，所不同的是樣品質(zhì)量及試劑用量較少，且有一套適

16、于微量測定的定劑用量較少，且有一套適于微量測定的定型儀器型儀器微量凱氏定氮器。微量凱氏定氮器。6.3 氨基酸態(tài)氮的測定氨基酸態(tài)氮的測定n為提高蛋白質(zhì)的生理效價而進(jìn)行食品氨基酸為提高蛋白質(zhì)的生理效價而進(jìn)行食品氨基酸互補(bǔ)和強(qiáng)化的理論，對食品加工工藝的改革，互補(bǔ)和強(qiáng)化的理論，對食品加工工藝的改革，對保健食品的開發(fā)及合理配膳等工作都具有對保健食品的開發(fā)及合理配膳等工作都具有積極的指導(dǎo)作用。因此，食品及其原料中氨積極的指導(dǎo)作用。因此，食品及其原料中氨基酸的分離、鑒定和定量也就具有極其重要基酸的分離、鑒定和定量也就具有極其重要的意義。的意義。n 氨基酸的含量一直是某些發(fā)酵產(chǎn)品如氨基酸的含量一直是某些發(fā)酵產(chǎn)

17、品如調(diào)味品的質(zhì)量指標(biāo)，也是目前許多保健調(diào)味品的質(zhì)量指標(biāo)，也是目前許多保健食品的質(zhì)量指標(biāo)之一，其中的含氮量可食品的質(zhì)量指標(biāo)之一，其中的含氮量可直接測定，不同于蛋白質(zhì)的氮，故稱為直接測定，不同于蛋白質(zhì)的氮，故稱為氨基酸態(tài)氮。氨基酸態(tài)氮。n 氨基酸態(tài)氮反映的是樣品中游離氨基氨基酸態(tài)氮反映的是樣品中游離氨基酸的總量。酸的總量。氨基酸態(tài)氮氨基酸態(tài)氮的測定的測定雙指示劑甲醛滴定法雙指示劑甲醛滴定法電位電位滴定法滴定法6.4.1 雙指示劑甲醛滴定法雙指示劑甲醛滴定法(1) 原理原理 氨基酸具有酸性的氨基酸具有酸性的-COOH基和堿性的基和堿性的-NH2基。它們相互作用而使氨基酸成為中性的基。它們相互作用而使

18、氨基酸成為中性的內(nèi)鹽。當(dāng)加入甲醛溶液時，內(nèi)鹽。當(dāng)加入甲醛溶液時，-NH2基與甲醛基與甲醛結(jié)合，從而破壞內(nèi)鹽。這樣就可以用強(qiáng)堿結(jié)合，從而破壞內(nèi)鹽。這樣就可以用強(qiáng)堿標(biāo)準(zhǔn)溶液來滴定標(biāo)準(zhǔn)溶液來滴定-COOH基，并用間接的方基，并用間接的方法測定氨基酸的總量。法測定氨基酸的總量。（2）操作：）操作：n用中性紅作指示劑，先測定其它游離用中性紅作指示劑，先測定其它游離酸的含量酸的含量n再用百里酚酞作指示劑測定氨基酸和再用百里酚酞作指示劑測定氨基酸和游離酸的總含量。游離酸的總含量。（3）方法適用范圍）方法適用范圍n淺色樣品淺色樣品 (4) 操作方法操作方法 移取含氨基酸約移取含氨基酸約2030mg的樣品溶液的

19、樣品溶液2份，份，分別置于分別置于250ml錐形瓶中，各加錐形瓶中，各加50ml 蒸餾水，其蒸餾水，其中中1份加入份加入3滴中性紅指示劑，用滴中性紅指示劑，用0.1mol/L氫氧化氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至由紅色變?yōu)殓赈c標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至由紅色變?yōu)殓?色為終點；另色為終點；另1份加入份加入3滴百里酚酞指示劑及中性甲醛滴百里酚酞指示劑及中性甲醛20ml，搖勻，搖勻，靜置靜置1分鐘，用分鐘，用0.1ml/L氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至淡藍(lán)色為終點。分別紀(jì)錄兩次所消耗的堿液淡藍(lán)色為終點。分別紀(jì)錄兩次所消耗的堿液ml數(shù)。數(shù)。式中式中 c 氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，mo

20、l/L; V1用中性紅作指示劑滴定時消耗氫氧化鈉標(biāo)用中性紅作指示劑滴定時消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，準(zhǔn)溶液的體積，mL; V2用百里酚酞作指示劑滴定時消耗氫氧化鈉用百里酚酞作指示劑滴定時消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mL; m測定用樣品溶液相當(dāng)于樣品的質(zhì)量，測定用樣品溶液相當(dāng)于樣品的質(zhì)量，g 0.014氮的毫摩爾質(zhì)量，氮的毫摩爾質(zhì)量，g/m mol (5) 結(jié)果計算結(jié)果計算100014. 0)(12mcVV 氨基酸態(tài)氮（%）6.4.2 電位滴定法電位滴定法(1) 原理原理 根據(jù)氨基酸的兩性作用，加入甲醛以固定氨基根據(jù)氨基酸的兩性作用，加入甲醛以固定氨基的堿性，使羧基顯示出酸性，將

21、酸度計的電極的堿性，使羧基顯示出酸性，將酸度計的電極插入被測液中，用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，依插入被測液中，用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，依據(jù)酸度計指示的據(jù)酸度計指示的pH值判斷和控制滴定終點。值判斷和控制滴定終點。(2) 儀器儀器酸度計（附磁力攪攔器）；酸度計（附磁力攪攔器）；(3) 試驗步驟試驗步驟樣品處理樣品處理n吸取樣品液于吸取樣品液于100mL容量瓶中容量瓶中,加水定容。加水定容。吸取定容液吸取定容液20.00mL于于250mL燒杯中燒杯中,加加水水60mL，放入磁力轉(zhuǎn)子，開動磁力攪，放入磁力轉(zhuǎn)子，開動磁力攪拌器使轉(zhuǎn)速適當(dāng)。用標(biāo)準(zhǔn)緩沖液校正好拌器使轉(zhuǎn)速適當(dāng)。用標(biāo)準(zhǔn)緩沖液校正好酸度計，然后將電

22、極清洗干凈，再插入酸度計，然后將電極清洗干凈，再插入到上述樣品液中，用到上述樣品液中，用NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液滴標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至酸度計指示定至酸度計指示pH8.2,記下消耗的記下消耗的NaOH溶液體積。溶液體積。氨基酸的滴定氨基酸的滴定n在上述滴定至在上述滴定至pH8.2的溶液中加入的溶液中加入10.00mL的中性甲醛溶液，再用的中性甲醛溶液，再用NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至至pH9.2,記下消耗的記下消耗的NaOH溶液體積。溶液體積。空白滴定空白滴定n吸取吸取80mL蒸餾水于蒸餾水于250mL的燒杯中，用的燒杯中，用NaOH標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至準(zhǔn)溶液滴定至pH8.2,然后加入然后加入10.00mL

23、中性甲醛中性甲醛溶液，再用溶液，再用NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至pH9.2,記下加記下加入甲醛后消耗的入甲醛后消耗的NaOH溶液體積。溶液體積。n操作說明：操作說明：第一次滴定是除去其它游離酸，所消第一次滴定是除去其它游離酸，所消耗的耗的NaOH溶液體積不用于計算。溶液體積不用于計算。 第二步滴定才是測定氨基酸，用消耗第二步滴定才是測定氨基酸，用消耗的的NaOH溶液體積進(jìn)行計算。溶液體積進(jìn)行計算。 （ V1 - V2 ） C 0.014氨基酸態(tài)氮氨基酸態(tài)氮% = 100 m 20/100 V1 - 醬油稀釋液在加入甲醛后滴定至醬油稀釋液在加入甲醛后滴定至pH9.2所用所用NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶

24、液的體積標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積mL V2 - 空白滴定在加入甲醛后滴定至空白滴定在加入甲醛后滴定至pH9.2所用所用NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積mL C - NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度mol/L m - 吸取的醬油的質(zhì)量吸取的醬油的質(zhì)量g 0.014 - 氮的毫摩爾質(zhì)量氮的毫摩爾質(zhì)量g/m mol （4）結(jié)果計算作業(yè)作業(yè)n現(xiàn)抽取南寧醬油廠生產(chǎn)的塑料袋裝鐵鳥牌醬油現(xiàn)抽取南寧醬油廠生產(chǎn)的塑料袋裝鐵鳥牌醬油1袋（規(guī)格袋（規(guī)格500mL）（生產(chǎn)日期）（生產(chǎn)日期20050520），要），要求測定氨基酸態(tài)氮含量。求測定氨基酸態(tài)氮含量。n某檢驗員按密度瓶法測定了該醬油的相對密某檢驗員按密度瓶法測定

25、了該醬油的相對密度為度為1.128，然后吸取醬油，然后吸取醬油5.00mL于于100mL容量容量瓶中瓶中,加水定容。加水定容。n吸取定容液吸取定容液20.00mL于于250mL燒杯中燒杯中,加水加水60mL，放入磁力轉(zhuǎn)子，開動磁力攪拌器使轉(zhuǎn)速，放入磁力轉(zhuǎn)子，開動磁力攪拌器使轉(zhuǎn)速適當(dāng)。用適當(dāng)。用pH6.18的標(biāo)準(zhǔn)緩沖液校正好酸度計，然的標(biāo)準(zhǔn)緩沖液校正好酸度計，然后將電極清洗干凈，再插入到上述醬油液中，用后將電極清洗干凈，再插入到上述醬油液中，用0.0498 mol/L NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至酸度計指標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至酸度計指示示pH8.2,消耗的消耗的NaOH溶液體積為溶液體積為2.21mL。n在上

26、述滴定至在上述滴定至pH8.2的溶液中加入的溶液中加入10.00mL的中性甲醛溶液，再用的中性甲醛溶液，再用NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至pH9.2,消耗的消耗的NaOH溶液體積為溶液體積為9.12mL。n吸取吸取80mL蒸餾水于蒸餾水于250mL的燒杯中，用的燒杯中，用NaOH標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至準(zhǔn)溶液滴定至pH8.2,然后加入然后加入10.00mL中性甲醛中性甲醛溶液，再用溶液，再用NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至pH9.2,加入甲加入甲醛后消耗的醛后消耗的NaOH溶液體積為溶液體積為1.36mL。n1、請問在測定過程中為什么要加入中性甲、請問在測定過程中為什么要加入中性甲醛？醛？n

27、2、計算該次氨基酸態(tài)氮含量測定結(jié)果。、計算該次氨基酸態(tài)氮含量測定結(jié)果。n3、該檢驗員按同樣的方法另作了、該檢驗員按同樣的方法另作了4次測定，次測定，結(jié)果分別為結(jié)果分別為0.49%,0.36%,0.50%,0.52%，請你寫，請你寫一份完整的檢驗評價報告。一份完整的檢驗評價報告。n相關(guān)知識點回顧：相關(guān)知識點回顧：一、可疑值的取舍一、可疑值的取舍 Q檢驗法：檢驗法：n 當(dāng)測定次數(shù)較少時當(dāng)測定次數(shù)較少時,Q檢驗法是一種常用檢驗法是一種常用n 的簡便方法。該法是將測定值按大小順的簡便方法。該法是將測定值按大小順n 序排列序排列,由可疑值與其相鄰值之差的絕對由可疑值與其相鄰值之差的絕對n 值除以極差值除

28、以極差,求得求得Q值。值。最小最大鄰疑XXXXQn Q值愈大值愈大,表明可疑值離群愈遠(yuǎn)表明可疑值離群愈遠(yuǎn),當(dāng)當(dāng)Q值超過一定界限時應(yīng)舍去可疑值。下值超過一定界限時應(yīng)舍去可疑值。下表為不同置信度時的表為不同置信度時的Q值。當(dāng)計算值大值。當(dāng)計算值大于或等于表中值時于或等于表中值時,該可疑值應(yīng)舍去該可疑值應(yīng)舍去,否否則應(yīng)予保留。則應(yīng)予保留。n 例如例如,平行測定鹽酸濃度平行測定鹽酸濃度(mol/L),結(jié)果為結(jié)果為0.1014, 0.1021, 0.1016, 0.1013。試問。試問0.1021在置信度為在置信度為90%時是否應(yīng)舍去。時是否應(yīng)舍去。63. 01013. 01021. 01016. 01

29、021. 0Qn 查表查表,當(dāng)當(dāng)n=4,Q0.90=0.76。因。因QQ0.90,故故 0.1021不能舍去。不能舍去。n當(dāng)測定次數(shù)在當(dāng)測定次數(shù)在3-10次之間時，最好用次之間時，最好用Q檢檢驗法。驗法。n二、對方法相對標(biāo)準(zhǔn)偏差的要求，一般主要取二、對方法相對標(biāo)準(zhǔn)偏差的要求，一般主要取決于被測對象的含量，含量越高要求相對標(biāo)準(zhǔn)決于被測對象的含量，含量越高要求相對標(biāo)準(zhǔn)偏差越低，例如，大于偏差越低，例如，大于10%的含量相對標(biāo)準(zhǔn)偏的含量相對標(biāo)準(zhǔn)偏差一般不大于差一般不大于1%，隨著含量的降低，相對標(biāo)，隨著含量的降低，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差可逐步增加，準(zhǔn)偏差可逐步增加，5%，10%，20%，30%甚至甚至50%。

30、生產(chǎn)工藝有特殊要求的，由技術(shù)條。生產(chǎn)工藝有特殊要求的，由技術(shù)條件決定。件決定。n fdndnxxSniiniinii12121211）（）標(biāo)準(zhǔn)偏差（%xSCV100）相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（習(xí)題講解：習(xí)題講解：解：解：1、加入中性甲醛是為了固定氨基酸中的、加入中性甲醛是為了固定氨基酸中的氨基，使羧基顯示出酸性，才能進(jìn)行氨基氨基，使羧基顯示出酸性，才能進(jìn)行氨基酸測定。酸測定。2、依據(jù)題意，醬油的相對密度、依據(jù)題意，醬油的相對密度d420=1.128,取樣體積取樣體積V5.00 mL 醬油的質(zhì)量醬油的質(zhì)量md420V1.1285.005.64gn醬油稀釋液在加入甲醛后滴定至醬油稀釋液在加入甲醛后滴定至pH9.2所用所用NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積V19.12mLn空白滴定在加入甲醛后滴定至空白滴定在加入甲醛后滴定至pH9.2所用所用NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積標(biāo)準(zhǔn)