1、1 果蠅唾腺染色體果蠅唾腺染色體 的制備與觀察的制備與觀察21. 練習剖取果蠅三齡幼蟲唾液腺的方法。練習剖取果蠅三齡幼蟲唾液腺的方法。2. 掌握制作果蠅唾腺染色體標本的技術。掌握制作果蠅唾腺染色體標本的技術。3. 觀察果蠅唾腺染色體的形態(tài)特征。觀察果蠅唾腺染色體的形態(tài)特征。一、實驗目的一、實驗目的34二二、實驗原理實驗原理1881年年D. Kostoff用壓片法首先在用壓片法首先在D. melanogaster 果蠅幼蟲的唾液腺細胞核中發(fā)現(xiàn)了特別巨大的染色體果蠅幼蟲的唾液腺細胞核中發(fā)現(xiàn)了特別巨大的染色體唾唾液腺染色體（液腺染色體（salivary gland chromosome）。但到后來，

2、）。但到后來，EHeitz和和HBauer（1933）以及）以及TSParnter（1933）才指出它在細胞學上的意義。）才指出它在細胞學上的意義。事實上，雙翅目昆蟲（如搖蚊、果蠅等）的幼蟲期都具事實上，雙翅目昆蟲（如搖蚊、果蠅等）的幼蟲期都具有很大的唾腺細胞，其中的染色體就是巨大的唾液腺染色體。有很大的唾腺細胞，其中的染色體就是巨大的唾液腺染色體。這些巨大的唾液腺染色體具有許多重要特征，為遺傳學研究這些巨大的唾液腺染色體具有許多重要特征，為遺傳學研究的許多方面，如染色體結構、化學組成、基因差別表達等提的許多方面，如染色體結構、化學組成、基因差別表達等提供了獨特的研究材料。供了獨特的研究材料。

3、5果蠅唾腺染色體的特點：果蠅唾腺染色體的特點：1.巨大染色體：巨大染色體：這種染色體比普通染色體大得多，寬約這種染色體比普通染色體大得多，寬約5um，長約長約400um，相當于普通染色體的，相當于普通染色體的100150倍，因而又稱為倍，因而又稱為巨大染色體。巨大染色體。62.2.多線染色體：多線染色體：果蠅的唾腺細胞停止在分裂間期（永久間果蠅的唾腺細胞停止在分裂間期（永久間期期 ），染色體核蛋白纖維不斷復制，平行排列形成巨大），染色體核蛋白纖維不斷復制，平行排列形成巨大而伸展的多線染色體唾腺染色體經(jīng)過多次復制而并不分開，而伸展的多線染色體唾腺染色體經(jīng)過多次復制而并不分開，每條染色體大約有每條

4、染色體大約有10004000根染色體絲的拷貝，所以根染色體絲的拷貝，所以又稱多線染色體又稱多線染色體(polytene chromosome)。72.體聯(lián)會：體聯(lián)會：類似有絲分裂中的同源染色體聯(lián)會。由于同源染類似有絲分裂中的同源染色體聯(lián)會。由于同源染色體緊密配對幾乎相互融合，使果蠅的唾腺染色體只有二色體緊密配對幾乎相互融合，使果蠅的唾腺染色體只有二倍體染色體數(shù)目的單元數(shù)。倍體染色體數(shù)目的單元數(shù)。83.橫紋結構：橫紋結構：染色體上有橫紋結構，這些橫紋的數(shù)目和位置染色體上有橫紋結構，這些橫紋的數(shù)目和位置往往是恒定的，代表著果蠅等昆蟲的種的特征；可用于基往往是恒定的，代表著果蠅等昆蟲的種的特征；可用

5、于基因定位；因定位；4.Puff結構：幼蟲的不同發(fā)育期，濃縮的染色質纖維會成群結構：幼蟲的不同發(fā)育期，濃縮的染色質纖維會成群解旋、松開，形成解旋、松開，形成泡狀松散結構泡狀松散結構，使相應的基因得以表達，使相應的基因得以表達，這種泡狀結構稱這種泡狀結構稱Puff結構，亦稱染色體的疏松。結構，亦稱染色體的疏松。9 1. 材料：材料： 普通果蠅的三齡幼蟲。普通果蠅的三齡幼蟲。 2. 器具：器具： 雙筒體視解剖鏡、顯微鏡、鑷子、解剖針、載雙筒體視解剖鏡、顯微鏡、鑷子、解剖針、載玻片、蓋玻片、培養(yǎng)皿、吸水紙等。玻片、蓋玻片、培養(yǎng)皿、吸水紙等。 3. 藥品：藥品： 改良苯酚品紅溶液、生理鹽水、改良苯酚品

6、紅溶液、生理鹽水、1mol/L鹽酸。鹽酸。三、實驗材料、器具和藥品三、實驗材料、器具和藥品10四、實驗步驟四、實驗步驟 1. 材料準備：材料準備： 將幼蟲放在含有一滴生理鹽水的潔凈載玻片上。在解剖將幼蟲放在含有一滴生理鹽水的潔凈載玻片上。在解剖鏡下觀察：幼蟲頭部有黑色的口溝，尾端有一對黃色的后氣鏡下觀察：幼蟲頭部有黑色的口溝，尾端有一對黃色的后氣門。門。 雙手各持一枚解剖針，用左手解剖針壓住幼蟲中部，用雙手各持一枚解剖針，用左手解剖針壓住幼蟲中部，用右手解剖針自幼蟲口溝后切斷頭部，體內(nèi)各器宮便從切口處右手解剖針自幼蟲口溝后切斷頭部，體內(nèi)各器宮便從切口處擠出，一對唾腺也隨之而出。擠出，一對唾腺也

7、隨之而出。 唾液腺體是一對半透明棒狀腺體。迅速剝離唾腺周圍的唾液腺體是一對半透明棒狀腺體。迅速剝離唾腺周圍的脂肪體，將唾腺保留在載片中央。脂肪體，將唾腺保留在載片中央。111213 2. 解離：用吸水紙吸去生理鹽水，然后加解離：用吸水紙吸去生理鹽水，然后加1滴滴Imol/L HCl溶液于腺體上，作用溶液于腺體上，作用12min。 3. 沖洗：用吸水紙吸去沖洗：用吸水紙吸去HCl ，滴加蒸餾水于腺體上進行，滴加蒸餾水于腺體上進行沖洗（兩次）。沖洗（兩次）。 4. 染色：吸去蒸餾水，加染色：吸去蒸餾水，加1滴改良苯酚品紅溶液，染色滴改良苯酚品紅溶液，染色30min以上。用鑷子加蓋玻片。以上。用鑷子加蓋玻片。 5. 觀察：觀察： 鏡檢。鏡檢。14五、注意事項五、注意事項1. 盡可能完整剖取唾腺，小心撥除脂肪；盡可能完整剖取唾腺，小心撥除脂肪；2.沖洗染色時防止腺體丟失；沖洗染色時防止腺體丟失；3.謹防腺體干固，及時滴加謹防腺體干固，及時滴加HCl或染液；或染液； 4.掌握好染色時間。掌握好染色時間。 15繪制