1、有關(guān)基因工程中的酶切問題、單選題:1 已知某種限制性內(nèi)切酶在一線性DNA 分子上有 3 個(gè)酶切位點(diǎn)，如圖中箭頭所指，如果該線性DNA 分子在 3 個(gè)酶切位點(diǎn)上都被該酶切斷，則會(huì)產(chǎn)生a、b、c、d四種不同長度的 DNA 片段。現(xiàn)在多個(gè)上述線性 DNA 分子， 若在每個(gè)DNA 分子上至少有 1 個(gè)酶切位點(diǎn)被該酶切斷，則 從理論上講，經(jīng)該酶切后，這些線性DNA 分子最多能產(chǎn)生長度不同的 DNA 片段種類數(shù)是A. 3 B. 4 C . 9D.122.現(xiàn)有一長度為 1000 堿基對（bp）的 DNA 分子，用限制性核酸內(nèi)切酶 lOOObp,用 Kpnl 單獨(dú)酶切得到 4OObp 和 600bp 兩種長度

2、的 DNA 分子, bp 和 600 bp 兩種長度的 DNA 分子。該DNA 分子的酶切圖譜正確的是的3.現(xiàn)有一長度為 3000 堿基對（bp）的線性 DNA 分子，用限制性核酸內(nèi)切酶酶切后，進(jìn)行凝膠電泳，使降解哉性DNA分子的#（切示盤甩EcoRI 酶切后得到的 DNA 分子仍是用 EcoRI、Kpnl 同時(shí)酶切后得到 200民oRIKp/il Kpnii石00I 200 | 200coRIKpnlKp/i1 600 | 200 | 2001EcoRI600產(chǎn)物分開。用酶 H 單獨(dú)酶切，結(jié)果如圖 1;用酶 B 單獨(dú)酶切，結(jié)果如圖如圖 3。該 DNA 分子的結(jié)構(gòu)及其酶切圖譜是（）2000bp

3、lOOObp2000bp600bp4D0bp1400b?600bp40Obp辛耳 4.DD 6001400601)12;用酶 H 和酶 B 同時(shí)酶切，結(jié)果6J0400 600400B 0；40。60014Q0 BODD4.在DNA 測DNA 上定位，使其成為 DNA 分子中的物理參照點(diǎn)。這項(xiàng)工作叫做“限制酶圖譜的構(gòu)建”。假設(shè)有以下一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)：用限制酶Hi ndin,BamH和二者4kb （1kb 即 1 千個(gè)堿基對）大小的線性電泳，在電場的作用下，降解產(chǎn)物分開，如右圖所示。據(jù)此分析，這兩種限制性內(nèi)切核酸酶在該DNA 分子上的限制位點(diǎn)數(shù)目是以下哪一組？A. Hi ndn1 個(gè)，BamH2 個(gè) B

4、. Hi ndn2 個(gè)，BamHt 3 個(gè)C. Hi ndn2 個(gè)，BamH1 個(gè) D . Hi ndn和 BamHt 各有 2 個(gè)MndmHlndmBdMlIHBJIIIHI2 J kb1 Skh1,kb1Jkb1.0kO.Skb0.9 kb0.3kb、填空題:400 500 001400DNA 分子，降解產(chǎn)物分別進(jìn)行凝膠請根據(jù)以上圖表回答下列問題。(1)在采用常規(guī) PCR 方法擴(kuò)增目的基因的過程中，使用的DNA 聚合酶不同于一般生物體內(nèi)的DNA 聚合酶,其最主要的特點(diǎn)是_。(2)PCR 過程中退火(復(fù)性)溫度必須根據(jù)引物的堿基數(shù)量和種類來設(shè)定。表1 為根據(jù)模板設(shè)計(jì)的兩對引1.圖為某種質(zhì)粒表

5、到載體簡圖，小箭頭所指分別為限制性內(nèi)切酶EcoRI、BamHI 的酶切位點(diǎn)，ampR為青霉素抗性基因，tctR為四環(huán)素抗性基因，P 啟動(dòng)子，T 為終止子，ori 為復(fù)制原點(diǎn)。已知目的基因的兩端分別有包括EcoRI、BamHI 在內(nèi)的多種酶的酶切位點(diǎn)。據(jù)圖回答：(1)將含有目的基因的DNA 與質(zhì)粒該表達(dá)載體分別用EcoRI 酶切，酶切產(chǎn)物用DNA連接酶進(jìn)行連接后，其中由兩個(gè) DNA 片段之間連接形成的產(chǎn)物有_、_ 、_ 三種。若要從這些連接產(chǎn)物中分(2)用上述 3 種連接產(chǎn)物與無任何抗藥性的原核宿主細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)。之后將這些宿主細(xì)胞接種到含四環(huán)素的培養(yǎng)基中，能生長的原核宿主細(xì)胞所含有的連接產(chǎn)物

6、是；若接種到含青霉素的培養(yǎng)基中能生長的原核宿主細(xì)胞所含有的連接產(chǎn)物是 _(3)目的基因表達(dá)時(shí)，_ RNA 聚合酶識別和結(jié)合的位點(diǎn)是,其合成的產(chǎn)物是 _.(4) 在上述實(shí)驗(yàn)中，為了防止目的基因和基因和質(zhì)粒表達(dá)載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，酶切2.( 8 分)將動(dòng)物致病菌的抗原基因?qū)腭R鈴薯制成植物疫苗，飼喂轉(zhuǎn)基因馬鈴薯可使動(dòng)物獲得免疫力。以下是與植物疫苗制備過程相關(guān)的圖和表。含右抗甌卑兇 的染色休DMAPCRDNAKirTm 11 nij mnni rnmiTiriwI rnwDNA亠模叔引物對A .P A ACTGAA ATGTA GCTAPC P2 TTAACTCC AT IA CTC

7、TA G弓1物對B51GTC C G A CT AGTGG CTG PG52ACCTGGCGITTAGCCTCC表2兒種職制酶識別序列及切割位點(diǎn)衣限制酹ALu IIPsi rSnm IAG I CTG；AATTCCTGCA；GCCC；GGG切割位點(diǎn)TC T GACTTAA T GG T ACGTCGGG f CCCJtcnKlHarnHl1 Mijj Aiu ,圖1赭華固操作濾程圖細(xì)iA引鉤時(shí)表1引物對序列衷圖2引物對與換板結(jié)合厲意圖物序列，圖 2 為引物對與模板結(jié)合示意圖。請判斷哪一對引物可采用較高的退火溫度？_。(3)圖 1 步驟所用的DNA1接酶對所連接的 DNA 兩端堿基序列是否有專一

8、性要求？_。(4)為將外源基因轉(zhuǎn)入馬鈴薯，圖 1 步驟轉(zhuǎn)基因所用的細(xì)菌_ B 通常為。(5)對符合設(shè)計(jì)要求的重組質(zhì)粒 T 進(jìn)行酶切，。假設(shè)所用的酶均可將識別位點(diǎn)完全切開，請根據(jù)圖1 中標(biāo)示的酶切位點(diǎn)和表 2 所列的識別序列，對以下酶切結(jié)果作出判斷。1采用 EcoRI和 PstI酶切，得到 _種 DNA 片斷。2采用 EcoRI和 SmI酶切，得到_ 種 DNA 片斷。3.( 09 江蘇卷)(7 分)蘇云金桿菌(Bt)能產(chǎn)生具有殺蟲能力的毒素蛋白。下圖是轉(zhuǎn) Bt 毒素蛋白基因植物的培育過程示意圖(ampr為抗氨芐青霉素基因)，據(jù)圖回答下列問題。(1)_ 將圖中的 DNA 用 Hind 川、Bam

9、H完全酶切后，反應(yīng)管中有 _ 種 DNA 片段。3種限制性核酸內(nèi)切悔識別序列與酶切位點(diǎn)(2)_ 圖中表示 Hind 川與 BamHt 酶切、DNA 連接酶連接的過程，此過程可獲得 _種重組質(zhì)粒；如果換用 Bst l 與 BamH酶切，目的基因與質(zhì)粒連接后可獲得 _ 種重組質(zhì)粒。HAidlll: AAGCTTTTCGAABaraH I: GGATCCCCTAGGBst I: GGATCCCCIAGGHind RE皿嚴(yán)Ba mH II Hind IDNA連接廉rBSJTIHIBaraH IBamH I閔I日沁山 砂J植物DNA毎索蛋口 蘇云金桿菌一目的基因T-DNA(3)_目的基因插入質(zhì)粒后，不能

10、影響質(zhì)粒的 。(4)圖中的Ti質(zhì)粒調(diào)控合成的vir蛋白，可以協(xié)助帶有目的基因的T DNA 導(dǎo)人植物細(xì)胞，并防止植物細(xì)胞中 _ 對 T DNA 的降解。(5) 已知轉(zhuǎn)基因植物中毒素蛋白只結(jié)合某些昆蟲腸上皮細(xì)胞表面的特異受體，使細(xì)胞膜穿孔，腸細(xì)胞裂解，昆蟲死亡。而該毒素蛋白對人類的風(fēng)險(xiǎn)相對較小，原因是人類腸上皮細(xì)胞 _(6)生產(chǎn)上常將上述轉(zhuǎn)基因作物與非轉(zhuǎn)基因作物混合播種，其目的是降低害蟲種群中的_基因頻率的增長速率。4.(09 福建卷)(10 分)轉(zhuǎn)基因抗病香蕉的培育過程如圖所示。質(zhì)粒上有PstI、Smal、EcoRI、ApaI等四種限制酶切割位點(diǎn)。請回答：(1) 構(gòu)建含抗病基因的表達(dá)載體 A 時(shí)

11、，應(yīng) 選用限制酶_:對_ 進(jìn)行切割。(2) 培養(yǎng)板中的卡那霉素會(huì)抑制香蕉愈傷組織細(xì)胞的生長， 欲利用該培養(yǎng)篩選已導(dǎo)入抗病基因的香蕉細(xì)胞，應(yīng)使基因表達(dá)載體A 中含有_作為標(biāo)記基因。(3)_ 香蕉組織細(xì)胞具有， 因此， 可以利用組織培養(yǎng)技術(shù)將導(dǎo)入抗病基因的香蕉組織細(xì)胞培育成植株。圖中、依次表示組織培養(yǎng)過程中香蕉組織細(xì)胞的_ 。5.(18 分)(1)限制性內(nèi)切酶I的識別序列和切點(diǎn)是一&GATC限制性內(nèi)切酶H的識別序列和切點(diǎn)是GATC-。在質(zhì)粒上有酶I的一個(gè)切點(diǎn)，在目的基因的兩側(cè)各有1 個(gè)酶n的切點(diǎn)。1請畫出質(zhì)粒被限制酶I切割后所形成的黏性末端。2請畫出目的基因兩側(cè)被限制酶n切割后所形成的黏性

12、末端。3在 DNA 連接酶的作用下，上述兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端能否連接起來？為什么？參考答案： 1.C 2.D 3.A 4.AGATC的基因GATC用酶n切割.CTAGfCTAGfCTAG3可以連二、填空題：1 . （18 分）（1 ）目的基因一載體連接物物 分離純化（每空 2 分，共 8 分）（其他合理答案也給分） 基因-載體連接物（1 分）、 載體-載體連接物（1 分）（4） EcoRI 和 BamHI （2 分）（只答一個(gè)酶不給分）（1）耐高溫 2 ）引物對 B （3）否（4）農(nóng)桿菌載體-載體連接物目的基因-目的基因連接（2）載體-載體連接物（3）啟動(dòng)子 mRNA （每空（2 分）； 目的2 分，共 4 分）2.(5)213.4.（1） 4 （2） 2 1（ 3）復(fù)制（4） DNA 水解酶 （5）表面無相應(yīng)的特異性受體（1） PstI、EcoRI含抗病基因的 DNA、質(zhì)粒 （2）抗卡那霉素基因（3）全