1、什么是動物細胞融合技術？單克隆抗體是如何是如何制備的的? ?在臨床上有哪在臨床上有哪些應用？些應用？12A A細胞B B細胞正在融合的原生質體再生出細胞壁高CaCa2+2+ 高p pH H融合法等脫分化再分化移栽植物細胞融合植物細胞融合植物組織培養植物組織培養雜種植株愈傷組織A A原生質體B B原生質體移栽后的植株植物體細胞雜交技術植物體細胞雜交技術植物體細胞雜交技術的優勢：植物體細胞雜交技術的優勢：打破生殖隔離，實現遠緣雜交育種，培育出新的作物類型。打破生殖隔離，實現遠緣雜交育種，培育出新的作物類型。 回顧舊知實驗：實驗：熒光標記融合實驗熒光標記融合實驗融合細胞融合細胞細胞細胞融合融合373

2、740min40min正在融合正在融合的細胞的細胞紅色熒光紅色熒光染料標記染料標記膜蛋白膜蛋白綠色熒光綠色熒光染料標記染料標記膜蛋白膜蛋白人細胞人細胞小鼠細胞小鼠細胞該實驗說明：該實驗說明：細胞膜具有流動性細胞膜具有流動性有沒有技術能讓有沒有技術能讓不同種動物不同種動物的體細胞雜交，培育出集不同細胞的優勢于一的體細胞雜交，培育出集不同細胞的優勢于一身的動物細胞呢？身的動物細胞呢？ 回顧舊知使兩個或多個動物細胞結合形成一個細胞的技術。細胞膜的流動性PEG融合法、電融合法和滅活病毒誘導法等。（化學法、 物理法、 生物法 ）突破了有性雜交的局限，使遠緣雜交成為可能。已成為研究細胞遺傳、細胞免疫、腫瘤

3、和培育生物新品種等的重要手段，特別是雜交瘤技術，。動物細胞融合特有雜交細胞：具有原來兩個或多個細胞的遺傳信息 01使病毒或細菌失去感染能力使病毒或細菌失去感染能力動物細胞融合實質及完成的動物細胞融合實質及完成的標志：標志：細胞核的融合細胞核的融合 相關信息注意注意說明說明動物細胞融合與受精作用的區別動物細胞融合與受精作用的區別（1 1）受精作用受精作用：是在：是在同種生物同種生物之間進行的，精子與卵之間進行的，精子與卵細胞的融合細胞的融合不需要任何誘導劑不需要任何誘導劑，受精卵內，受精卵內具備同種生物具備同種生物的兩個親本的遺傳物質。的兩個親本的遺傳物質。（2 2）可在可在進行，由于物種間存進

4、行，由于物種間存在生殖隔離，所以自然條件下不能融合成雜交細胞，必須在生殖隔離，所以自然條件下不能融合成雜交細胞，必須有誘導劑才能融合。形成的雜交細胞有誘導劑才能融合。形成的雜交細胞，從而體現兩個親本的遺傳特性。，從而體現兩個親本的遺傳特性。 向動物體內反復向動物體內反復注射注射某種某種抗原抗原，使，使動物動物產生抗體產生抗體，然后從動物血清中，然后從動物血清中分離分離所需抗體。所需抗體。抗體不純為解決這一難題，科學家為解決這一難題，科學家進行了多年的研究和探索。進行了多年的研究和探索。 02缺點：缺點：產量低、純度低、特異性差產量低、純度低、特異性差動物體內產生的特異性抗體種類超特異性抗體種類

5、超過百萬種過百萬種，但，但每每一個一個B B淋巴細胞只分泌淋巴細胞只分泌一種一種特異性抗體特異性抗體。因此，要想獲得大量單一抗體，必須克隆單一的B淋巴細胞，形成細胞群。 023.19753.1975年，英國科學家米爾斯坦和德國科學家科勒在前人工作的年，英國科學家米爾斯坦和德國科學家科勒在前人工作的基礎上，充分發揮想象力，設計了一個極富創造性的實驗方案：基礎上，充分發揮想象力，設計了一個極富創造性的實驗方案：一種B淋巴細胞（只產生一種特定抗體）能在體外大量增殖的骨髓瘤細胞融合雜交瘤細胞產生足夠數量的特定抗體米爾斯坦科勒大量增殖單克隆抗體單克隆抗體：單克隆抗體：由單個由單個B B淋巴細胞經過克隆（

6、無限淋巴細胞經過克隆（無限增殖），形成基因型相同的細胞群，這一細胞增殖），形成基因型相同的細胞群，這一細胞群所產生的化學性質單一、特異性強的抗體。群所產生的化學性質單一、特異性強的抗體。4.單克隆抗體制備的過程：注射特定的抗原注射特定的抗原培養骨髓瘤細胞培養骨髓瘤細胞從脾中提取從脾中提取B淋巴細胞淋巴細胞多種多種骨髓瘤細胞骨髓瘤細胞誘導融合誘導融合將骨髓瘤細胞與將骨髓瘤細胞與B淋巴細胞融合淋巴細胞融合能產生抗體，但不能大量增殖不能產生抗體，但能大量增殖PEG融合法、融合法、電融合法、滅電融合法、滅活病毒誘導法活病毒誘導法4.單克隆抗體制備的過程：多種雜交細胞：多種雜交細胞：未融合的細胞未融合的

7、細胞B-骨骨骨骨-骨、骨、B-B、第一次篩選：第一次篩選： 用特定的選擇培養基用特定的選擇培養基在該培養基上，未融合的親本細胞和融合的具有同種在該培養基上，未融合的親本細胞和融合的具有同種核的細胞都會死亡，只有融合的雜交瘤細胞才能生長核的細胞都會死亡，只有融合的雜交瘤細胞才能生長雜交瘤細胞：雜交瘤細胞：（既能迅速大量增殖，又能產生抗體）第二次篩選：第二次篩選： 克隆化培養、抗體檢測克隆化培養、抗體檢測 （可進行多次）（可進行多次）抗體檢測呈陽性的雜交瘤細胞抗體檢測呈陽性的雜交瘤細胞（分泌的抗體能與特定抗原結合）（分泌的抗體能與特定抗原結合）每一個孔中盡量每一個孔中盡量只接種一個雜交只接種一個雜

8、交瘤細胞瘤細胞克隆化培養克隆化培養多孔細胞培養板4.單克隆抗體制備的過程：抗體檢測呈陽性的雜交瘤細胞抗體檢測呈陽性的雜交瘤細胞（分泌的抗體能與特定抗原結合）（分泌的抗體能與特定抗原結合）注射到小鼠腹腔內注射到小鼠腹腔內體外培養體外培養單克隆抗體單克隆抗體從細胞培養液中提取從細胞培養液中提取從小鼠腹水中提取從小鼠腹水中提取單克隆抗體的優點：特異性強、靈敏度高、可大量制備（1 1）篩選原因篩選原因：誘導融合后得到：誘導融合后得到多種雜交細胞多種雜交細胞，另外還有，另外還有未融合未融合的的細胞。細胞。骨髓瘤細胞與骨髓瘤細胞與B B淋巴細胞融合淋巴細胞融合（2 2）篩選方法：用特定的選擇培篩選方法：用

9、特定的選擇培養基篩選養基篩選：未融合的細胞和同種融未融合的細胞和同種融合后形成的細胞合后形成的細胞（“B-B“B-B細胞細胞”、“瘤瘤- -瘤細胞瘤細胞”）都會死亡，只有都會死亡，只有雜交瘤細胞（雜交瘤細胞（“B-“B-瘤細胞瘤細胞”）才能）才能生長。生長。雜交瘤細胞選擇培養基選擇培養基（3 3）篩選目的：得到雜交瘤細胞。篩選目的：得到雜交瘤細胞。注意說明注意說明（1 1）篩選原因篩選原因：由于小鼠在生活：由于小鼠在生活中還受到其他抗原的刺激，所以經中還受到其他抗原的刺激，所以經第一次篩選獲得的雜交瘤細胞中存第一次篩選獲得的雜交瘤細胞中存在產生其他抗體的細胞。在產生其他抗體的細胞。（2 2）篩

10、選方法：用多孔培養皿篩選方法：用多孔培養皿培養，培養，在在每個孔內只有一個雜交瘤細胞每個孔內只有一個雜交瘤細胞的情況的情況下開始下開始克隆化培養和抗體檢測克隆化培養和抗體檢測，經多次，經多次篩選得到能產生特異性抗體的細胞群。篩選得到能產生特異性抗體的細胞群。（3 3）篩選目的：得到能分泌所需篩選目的：得到能分泌所需抗體的雜交瘤細胞。抗體的雜交瘤細胞。雜交瘤細胞多孔培養板克隆化培養克隆化培養和抗體檢測和抗體檢測篩選抗體篩選抗體檢測呈陽檢測呈陽性的雜交性的雜交瘤細胞瘤細胞既能迅速大量增殖又能產生特異性抗體注意說明注意說明應用到的技術：應用到的技術：原理：原理： 細胞膜具有一定細胞膜具有一定的流動性

11、、細胞增殖的流動性、細胞增殖多種雜交細胞及多種雜交細胞及未融合的細胞未融合的細胞誘導誘導 融合融合多種多種特定特定提取提取用特定的選擇性培養基用特定的選擇性培養基克隆化培養、抗體檢測克隆化培養、抗體檢測既能迅速大量增殖，又能產生抗體從腹腔液中提取從培養液中提取（可進行多次）（可進行多次）動物細胞融合動物細胞融合動物細胞培養動物細胞培養 歸納單克隆抗體的應用單克隆抗體的應用資料資料1 用抗人絨毛膜促性腺激素用抗人絨毛膜促性腺激素單克單克隆抗體做成的隆抗體做成的“早早孕診斷早早孕診斷試劑盒試劑盒”。在妊娠第。在妊娠第8天就可以作天就可以作出診斷，這比原來的診斷方法提出診斷，這比原來的診斷方法提前了

12、前了10d左右，可以避免孕婦在左右，可以避免孕婦在不知道妊娠的情況下因服用藥物不知道妊娠的情況下因服用藥物而對胎兒造成不利影響。該方法而對胎兒造成不利影響。該方法檢測的準確率在檢測的準確率在90%以上。以上。資料資料2 使用高效的細胞毒素類藥使用高效的細胞毒素類藥物進行化療可以有效殺傷腫瘤細物進行化療可以有效殺傷腫瘤細胞。但細胞毒素胞。但細胞毒素沒有特異性，沒有特異性，在殺傷腫瘤細胞的同時還會對健在殺傷腫瘤細胞的同時還會對健康細胞造成傷害，這限制了它在康細胞造成傷害，這限制了它在臨床上的應用。抗體臨床上的應用。抗體-藥物偶聯藥物偶聯物物（antibody-drugconjugates, ADC

13、）通過將細胞毒素與能特通過將細胞毒素與能特異性識別腫瘤抗原的單克隆抗體異性識別腫瘤抗原的單克隆抗體結合，實現了對腫瘤細胞的選擇結合，實現了對腫瘤細胞的選擇性殺傷。性殺傷。ADC通常由抗體、接通常由抗體、接頭和藥物頭和藥物(如細胞毒素如細胞毒素)三部分組三部分組成，它的作用機制如下圖所示。成，它的作用機制如下圖所示。抗體抗體藥物藥物接頭接頭ADC被細胞吞噬被細胞吞噬釋放釋放藥物藥物溶酶體裂解溶酶體裂解細胞細胞凋亡凋亡1. ADC的抗體和藥物各具有什么作用？的抗體和藥物各具有什么作用？討論：討論：提示：抗體主要發揮提示：抗體主要發揮靶向運輸作用靶向運輸作用，即通過，即通過特異性結合靶細胞表面的抗原

14、特異性結合靶細胞表面的抗原，將連接的將連接的藥物輸送到靶細胞藥物輸送到靶細胞；藥物發揮治療效應藥物發揮治療效應，如殺傷靶細胞。，如殺傷靶細胞。2. 除了細胞毒素，還有哪些物質理論上可以作為除了細胞毒素，還有哪些物質理論上可以作為ADC偶聯的藥物？偶聯的藥物？3. 單克隆抗體診斷試劑盒和單克隆抗體診斷試劑盒和ADC在臨床應用上各具有什么優勢？在臨床應用上各具有什么優勢？提示：提示： 可以用可以用放射性同位素放射性同位素標記單克隆抗體進行標記單克隆抗體進行靶向放療靶向放療； 一些一些作用于細胞信號轉導通路的藥物作用于細胞信號轉導通路的藥物可以通過可以通過阻斷腫瘤細胞的信號通路阻斷腫瘤細胞的信號通路

15、 來抑制其生長來抑制其生長，理論上也可以將這些藥物與單克隆抗體結合進行治療，理論上也可以將這些藥物與單克隆抗體結合進行治療提示：提示： 單克隆抗體診斷試劑盒中的單克隆抗體診斷試劑盒中的單克隆抗體只與特定的抗原反應單克隆抗體只與特定的抗原反應，因，因此此檢測的特異性和靈敏度大大提高檢測的特異性和靈敏度大大提高；生產單克隆抗體的；生產單克隆抗體的雜交瘤細胞可以傳雜交瘤細胞可以傳代培養、冷凍保存和復蘇利用代培養、冷凍保存和復蘇利用，有利于，有利于控制產品的質量和標準化生產診斷控制產品的質量和標準化生產診斷試劑盒試劑盒； ADC能夠能夠協同發揮抗體特異性識別的靶向作用和細胞毒素對腫協同發揮抗體特異性識

16、別的靶向作用和細胞毒素對腫瘤細胞的殺傷作用瘤細胞的殺傷作用，因此它在臨床上具有，因此它在臨床上具有靶點清楚、毒副作用小靶點清楚、毒副作用小等優點。等優點。4. 單克隆抗體在臨床上還有哪些應用？你可以課后搜集資料，然單克隆抗體在臨床上還有哪些應用？你可以課后搜集資料，然后以后以“單克隆抗體在臨床上的應用單克隆抗體在臨床上的應用”為主題，出一期黑板報或制作為主題，出一期黑板報或制作電子板報宣傳相關知識。電子板報宣傳相關知識。 提示：提示： 單克隆抗體在臨床上的應用涉及治療、診斷等方面單克隆抗體在臨床上的應用涉及治療、診斷等方面。單。單克隆抗體藥物已被廣泛用于腫瘤、自身免疫病等疾病的治療，如利克隆抗

17、體藥物已被廣泛用于腫瘤、自身免疫病等疾病的治療，如利妥昔單抗被用于治療復發難治的低分化妥昔單抗被用于治療復發難治的低分化B細胞淋巴瘤；曲妥珠單抗細胞淋巴瘤；曲妥珠單抗被用于治療乳腺癌等。被用于治療乳腺癌等。在臨床診斷方面，單克隆抗體被廣泛用于在臨床診斷方面，單克隆抗體被廣泛用于-些些感染性疾病的檢測、腫瘤的診斷、激素和細胞因子的測定等感染性疾病的檢測、腫瘤的診斷、激素和細胞因子的測定等。以單。以單克隆抗體在診斷腫瘤方面的應用為例，用放射性同位素或熒光標記克隆抗體在診斷腫瘤方面的應用為例，用放射性同位素或熒光標記抗腫瘤表面抗原的單克隆抗體，可以用這些抗體來對體內的腫瘤進抗腫瘤表面抗原的單克隆抗體

18、，可以用這些抗體來對體內的腫瘤進行定位，輔助診斷并確定腫瘤的復發與轉移等。行定位，輔助診斷并確定腫瘤的復發與轉移等。（1 1）廣泛用作診斷廣泛用作診斷試劑試劑5.單克隆抗體的應用乙肝測定試劑艾滋病檢測試劑（2 2）可以可以運載藥物運載藥物5.單克隆抗體的應用結合同位素的單克隆抗體藥物主要用于癌癥治療。如：單克隆抗體+接頭+藥物（如細胞毒素）=ADC優點：位置準確、療效高、副作用小（3 3）用于治療疾病用于治療疾病5.單克隆抗體的應用 一、概念檢測1.1.下列有關動物細胞融合與植物體細胞雜交比較的敘述，錯誤的是（下列有關動物細胞融合與植物體細胞雜交比較的敘述，錯誤的是（ ）A.A.它們的原理都涉及細胞膜的流動性它們的原理都涉及細胞膜的流動性B.B.都可以用電融合法或都可以用電融合法或PEGPEG融合法誘導融合融合法誘導融合C.C.融合前都需用纖維素酶或果膠酶處理細胞融合前都需用纖維素酶或果膠酶處理細胞D.D.前者主要是為了獲得細胞產品，后者主要是為了獲得雜種植株前者主要是為了獲得細胞產品，后者主要是為了獲得雜種植株2.2.科學家