1、糖的呈色反應(yīng)和定性鑒定目的要求(1) 學(xué)習(xí)鑒定糖類(lèi)及區(qū)分酮糖和醛糖的方法。(2) 了解鑒定還原糖的方法及其原理。1. Molish反應(yīng)-萘酚反應(yīng)實(shí)驗(yàn)原理糖在濃硫酸或濃鹽酸的作用下脫水形成糠醛及其衍生物與-萘酚作用形成紫紅色復(fù)合物，在糖液和濃硫酸的液面間形成紫環(huán)，因此又稱(chēng)紫環(huán)反應(yīng)。自由存在和結(jié)合存在的糖均呈陽(yáng)性反應(yīng)。此外，各種糠醛衍生物、葡萄糖醛酸以及丙酮、甲酸和乳酸均呈顏色近似的陽(yáng)性反應(yīng)。因此，陰性反應(yīng)證明沒(méi)有糖類(lèi)物質(zhì)的存在；而陽(yáng)性反應(yīng)，則說(shuō)明有糖存在的可能性，需要進(jìn)一步通過(guò)其他糖的定性試驗(yàn)才能確定有糖的存在。試劑Molish試劑：取5g -萘酚用95%乙醇溶解至100mL，臨用前配制，棕色瓶

2、保存。1%葡萄糖溶液；1%蔗糖溶液；1%淀粉溶液。操作方法取試管，編號(hào)，分別加入各待測(cè)糖溶液1 mL，然后加兩滴Molish試劑，搖勻。傾斜試管，沿管壁小心加入約1mL濃硫酸，切勿搖動(dòng)，小心豎直后仔細(xì)觀(guān)察兩層液面交界處的顏色變化。用水代替糖溶液，重復(fù)一遍，觀(guān)察結(jié)果。2. 蒽酮反應(yīng)實(shí)驗(yàn)原理糖經(jīng)濃酸作用后生成的糠醛及其衍生物與蒽酮（10-酮-9，10-二氫蒽）作用生成藍(lán)綠色復(fù)合物。試劑蒽酮試劑：取0.2g 蒽酮溶于100mL 濃硫酸中，當(dāng)日配制。待測(cè)糖溶液，同Molish試驗(yàn)。操作方法取試管，編號(hào)，均加入1mL蒽酮溶液，再向各管滴加2 3滴待測(cè)糖溶液，充分混勻，觀(guān)察各管顏色變化并記錄。3. 酮糖的

3、Seliwanoff反應(yīng)實(shí)驗(yàn)原理該反應(yīng)是鑒定酮糖的特殊反應(yīng)。酮糖在酸的作用下較醛糖更易生成羥甲基糠醛。后者與間苯二酚作用生成鮮紅色復(fù)合物，反應(yīng)僅需20-30秒。醛糖在濃度較高時(shí)或長(zhǎng)時(shí)間煮沸，才產(chǎn)生微弱的陽(yáng)性反應(yīng)。試劑Sediwanoff試劑：0.5g 間苯二酚溶于1升鹽酸（H2OHCl=21）(V/V)中，臨用前配制。1%葡萄糖；1%蔗糖；1%果糖。操作方法取試管，編號(hào)，各加入Sediwanoff試劑1mL，再依次分別加入待測(cè)糖溶液各4滴，混勻，同時(shí)放入沸水浴中，比較各管顏色的變化過(guò)程。4. Fehling試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)原理費(fèi)林試劑是含有硫酸銅和酒石酸鉀鈉的氫氧化鈉溶液。硫酸銅與堿溶液混合加熱，則生

4、成黑色的氧化銅沉淀。若同時(shí)有還原糖存在，則產(chǎn)生黃色或磚紅色的氧化亞銅沉淀。為防止銅離子和堿反應(yīng)生成氫氧化銅或堿性碳酸銅沉淀，F(xiàn)ehlin試劑中加入酒石酸鉀鈉，它與Cu2形成的酒石酸鉀鈉絡(luò)合銅離子是可溶性的絡(luò)離子，該反應(yīng)是可逆的。平衡后溶液內(nèi)保持一定濃度的氫氧化銅。費(fèi)林試劑是一種弱的氧化劑，它不于酮和芳香醛發(fā)生反應(yīng)。試劑試劑甲：稱(chēng)取34.5g硫酸銅溶于500mL蒸餾水中。試劑乙：稱(chēng)取125g NaOH 137g酒石酸鉀鈉溶于500mL蒸餾水中，貯存于具橡皮塞玻璃瓶中。臨用前，將試劑甲和試劑乙等量混合。1%葡萄糖溶液；1%蔗糖溶液；1%淀粉溶液。操作方法取試管，編號(hào)，各加入Fehlin試劑甲和乙1

5、mL。搖勻后，分別加入4滴待測(cè)糖溶液，置沸水浴中加熱2 3min，取出冷卻，觀(guān)察沉淀和顏色變化。注意事項(xiàng)（1）Molish反應(yīng)非常靈敏，0.001葡萄糖和0.0001蔗糖即能呈現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)。因此，不可在樣品中混入紙屑等雜物。當(dāng)果糖濃度過(guò)高時(shí)，由于濃硫酸對(duì)它的焦化作用，將呈現(xiàn)紅色及褐色而不呈紫色，需稀釋后再做。（2）果糖與Seliwanoff試劑反應(yīng)非常迅速，呈鮮紅色，而葡萄糖所需時(shí)間較長(zhǎng)，且只能產(chǎn)生黃色至淡黃色。戊糖亦與Seliwanoff試劑反應(yīng)，戊糖經(jīng)酸脫水生成糠醛，與間苯二酚縮合，生成綠色至藍(lán)色產(chǎn)物。（3）酮基本身沒(méi)有還原性，只有在變成烯醇式后，才顯示還原作用。（4）糖的還原作用生成氧化亞銅沉淀的顏色決定于顆粒的大小，Cu2O顆粒的大小又決定于反應(yīng)速度。反應(yīng)速度快時(shí)，生成的Cu2O顆粒較小，呈黃綠色；反應(yīng)速度慢時(shí)，生成的Cu2O顆粒較大，呈紅色。溶液中還原糖的濃度可以從生成沉淀的多少來(lái)估計(jì)，而不能依據(jù)沉淀的顏色