1、Countstar 細胞計數(shù)儀操作手冊計數(shù)儀的標準操作程序和細胞計數(shù)和活率檢測標準操作程序一、啟動Cedex XS 系統(tǒng)1. 打開計數(shù)儀: 按下計數(shù)儀上的ON/OFF按鈕, 按鈕亮起藍色光表示儀器已打開;2. 打開 Cedex XS 控制軟件:打開配套電腦, 進入Windows操作系統(tǒng);雙擊桌面上的Cedex XS 圖標 , 進入 Cedex XS 控制中心;3. 調(diào)節(jié)白平衡: 首次安裝Cedex XS系統(tǒng)或移動系統(tǒng)后必須調(diào)節(jié)白平衡。把樣品板支架拉出;點擊 Cedex XS 控制中心中的HWM鍵 , 打開硬件管理對話框;點擊 WHITE BALANC鍵進行調(diào)節(jié)E, 結(jié)果將自動保存;調(diào)節(jié)完畢后關(guān)

2、閉對話框。二、細胞計數(shù)與活性測定1. 樣品制備用培養(yǎng)基或PBS將樣品稀釋至細胞數(shù)不高于5× 106/ml;使用0.2%臺盼藍染色(一般為10 l 、 1:1): 臺盼藍對血清蛋白親和力更強若大量血清蛋白導致圖像背景過暗, 可以將樣品離心, 用無蛋白培養(yǎng)基或生理鹽水懸浮細胞進行計數(shù);將細胞懸液充分混勻;用移液槍取細胞懸液加入樣品板, 每槽10 l; 可以一次測定八槽, 也可測定單槽。2. 進樣 : 樣品板有八個槽, 一次可測定四個樣品槽。拉出樣品板支架;加有樣品方向朝里, 將樣品板放上支架;將支架推入計數(shù)儀, 有少許卡扣感表示已就位: 樣品槽位置指示燈表示樣品測定進程。三、軟件設置:1

3、. 打開測定界面: 在 Cedex XS 控制中心點擊MEASUR鍵E, 進入測定界面;2. 設置樣品參數(shù):在樣品參數(shù)欄輸入樣品名(Reactor ID), 可在下拉欄選擇或手動輸入, 最多可輸入 21 個字符 ;輸入樣品編號(Sample ID), 最多 21 個字符 ; 若樣品名已存在, 軟件將自動延續(xù)樣品編號, 也可手動重新輸入編號;軟件將自動記錄日期和時間, 表明樣品測定的實際時間點擊MI×鍵, 出現(xiàn)進樣體積對話框;輸入?yún)?shù): 樣品量 (Sample V olume) 、臺盼藍用量(Dye Volume) 、稀釋劑用量 (Diluent V olume);系統(tǒng)將自動計算稀釋比

4、例等, 可以手動輸入注釋(Comments)。3. 設置測定與分析參數(shù):在分析參數(shù)欄選擇需要的精度水平(Precision): 精度水平表示單次測定樣品數(shù) , 最多 8 個 ;選擇細胞類型, 默認的細胞類型有: 標準大小細胞直徑約12-14 m;可識別對象 ; 小細胞直徑約8 m;系統(tǒng)自動添加系統(tǒng)名和測定時間。四、開始測定點擊 START MEASUREM鍵EN; T測定多個樣品時, 在彈出對話框后將樣品板支架推進一格, 點擊確定自動開始測定程序;重復上一步驟測定其他樣品;若測定樣品多于四個, 可將支架抽出后樣品板調(diào)轉(zhuǎn)方向重新插入進行上述測定程序 ;全部測定結(jié)束后關(guān)閉對話框。五、計數(shù)結(jié)果1.

5、在測定界面獲得結(jié)果測定程序完成后, 結(jié)果在測定界面的數(shù)據(jù)欄(Result Data) 顯示 , 數(shù)據(jù)欄有兩個表格 : 第一個表格顯示總細胞數(shù), 第二個表格顯示單次測定中每個樣品室的測定結(jié)果。兩個表中分別列出以下參數(shù): Viable Cell Conc.: 活細胞濃度 × 105/mL Total Cell Conc.: 總細胞濃度 × 105/mL Viability (%):細胞總數(shù)中活細胞的百分比 Total Cell Count: 測定總細胞數(shù) Avg Compactness: 活細胞與理想狀態(tài)細胞形狀的平均變異程度(1 表示細胞形狀均一) Avg Diameter:

6、 測定活細胞平均直徑 m Aggregate Rate (%): 成團細胞占總細胞數(shù)的比值 Dead Cell Conc.: 死細胞濃度 × 105/mL Viable Cell Count: 測定活細胞數(shù) Dead Cell Count: 測定死細胞數(shù) Total Object Count: 全部測定數(shù) Total Object Conc.: 總濃度 × 105/mL Avg Object Diameter: 測定總?cè)后w平均直徑 m Avg Object Compactness: 所有測定群體與理想狀態(tài)細胞形狀的平均變異 程度。在單個樣品結(jié)果表中, 會有三項列在表頭: I

7、mage No.: 圖像編號 Valid: 表示圖像質(zhì)量是否能夠達到分析要求 Excluded: 復選框以排除或包括該樣品在總結(jié)果表中的顯示2. 在柱形圖中看結(jié)果: 此結(jié)果不包括已經(jīng)由上述復選框選擇排除的計數(shù)結(jié)果在測定界面點擊HISTOGRAM鍵 S, 打開柱形圖對話框;可選擇以下項目:成團細胞柱形圖細胞直徑柱形圖細胞形狀均一度柱形圖總?cè)褐睆街螆D六、查看圖像單副圖像: 在測定界面的右側(cè)顯示的是選定的單個樣品測定結(jié)果所對應的圖像多幅圖像: 在圖像顯示區(qū)點擊VIEW IMAGES鍵出現(xiàn)圖像列表, 可顯示單次測定的多個樣品。1. 在圖像框查看圖像圖像框提供放大圖像, 系統(tǒng)自動分析活細胞與死細胞,

8、并用綠色圈和紅色圈分別標出 , 還可以使用下列功能: 雙擊圖像可打開大圖, 調(diào)節(jié)對比、亮度和焦距; 顯示或隱藏細胞的圈標記 ; 瀏覽前后樣品的圖像;按住左鍵圈定可將選定圖像放大或自定義尺寸 , 右鍵點擊圖像進行保存或復 制。七、系統(tǒng)優(yōu)化: 調(diào)節(jié)白平衡若圖像亮度不均衡, 則需調(diào)節(jié)白平衡, 影響圖像亮度的調(diào)節(jié)。把載物支架拉出;點擊 Cedex XS 控制中心中的HWM鍵 , 打開硬件管理對話框;點擊 WHITE BALANC鍵進行調(diào)節(jié)E, 結(jié)果將自動保存;調(diào)節(jié)完畢后關(guān)閉對話框。八、結(jié)果列表1. 點擊 Cedex XS 控制中心中的LIST 鍵 , 或在 Measurements菜單中選擇Measurement List, 可選擇以下功能:查找結(jié)果打印報