1、生物實驗室疾病診斷工作流程流程：業務接收流程：客戶內勤研發部生物實驗室業務反饋流程：生物實驗室內勤客戶實施細則:一、樣品采集與運輸1.病料的采集要求：（1）新鮮，代表性。病料存放時間夏天少于6h，冬天12-24h.（2）減少污染。第一時間采取病料，減少病料因暴露于空氣中而造成的污染。（3）病料采集后，應先存放于冰箱中1-2小時后，再做微生物檢驗 2.病料的采集方法（1）組織和實質器官的采集 采集病料心、肝、脾臟、胰腺、肺等，剪切小塊組織，放入滅菌試管（青霉素瓶），密封。（2）液體病料的采集 血液、膽汁、膿腫液、滲出物等液體病料，使用注射器（或滅菌吸管）吸取病變組織的液體，將病料注入滅菌試管（青

2、霉素瓶），塞好棉塞送檢。（3）全血的采集方法 用注射器自雞的心臟或翅靜脈采血2-5毫升，注入滅菌試管（青霉素瓶）中。（4）血清的采集方法 用滅菌注射器自雞的心臟或翅靜脈采血2毫升，注入滅菌試管中（青霉素瓶）擺成斜面，待血液凝固血清析出后，將血清吸出注入另一個滅菌試管中，備用。采樣的比例：按每個舍0.5%的比例采集，但每舍不得少于15份，一般常規采樣15-30份即可。二、檢測項目項目一、藥敏試驗一、 試驗步驟 1.試驗材料：培養基、藥敏試紙、細菌、接種環、酒精燈、打孔器、移液器、滴頭。2.試驗準備：藥液的制備(用于商品藥的試驗)：按商品藥使用治療量的比例配制藥液；如商品藥“百病消”按其說明量治療

3、量0.01%飲水，可按這個比例配制藥液，可取10毫克加入10毫升的水中混勻。此稀釋液即為用于做藥敏試驗的藥液。 3.試驗操作方法：3.1藥敏片法 在“超凈臺”中，用經(酒精燈)火焰滅菌的接種環挑取適量細菌培養物，以劃線方式將細菌涂布到平皿培養基上。具體方式；用滅菌接種環取適量細菌分別在平皿邊緣相對四點涂菌，以每點開始劃線涂菌至平皿的1/2。找到第二點劃線至平皿的1/2，依次劃線，直至細菌均勻密布于平皿。(另可挑取待試細菌于少量生理鹽水中制成細菌混懸液，用滅菌棉拭子將待檢細菌混懸液涂布于平皿培養基表面，涂布均勻致密)。 將鑷子于酒精燈火焰滅菌后略停，取藥敏片貼到平皿培養基表面。為了使藥敏片與培養

4、基緊密相貼，可用鑷子輕按幾下藥敏片。為了使能準確的觀察結果，要求藥敏片能有規律的分布于平皿培養基上；一般可在平皿中央貼一片，外周可等距離貼若干片(外周一般可貼七片)，每種藥敏片的名稱要記住。 將平皿培養基置于37溫箱中培養24小時后，觀察效果。 二、結果觀察： 過夜培養后形成一個抑菌圈，抑菌圈越大，說明該菌對此藥敏感性越大，反之越小，若無抑菌圈，則說明該菌對此藥具有耐藥性。其直徑大小與藥物濃度、劃線細菌濃度有直接關系。 三、結果判定 藥敏試驗的結果，應按抑菌圈直徑大小作為判定敏感度高低的標準。實驗條件不同，判定標準有所不同。對于一般抑菌環的直徑，20 mm以上極敏;15 mm以上者為高度敏感；

5、10-15 mm為中度敏感；10mm以下為低度敏感；無抑菌環者為耐藥。抗菌藥物紙片含藥量(g /mL) 抑菌圈直徑(mm) 不敏感低度敏感中度敏感敏感青霉素5001010 26 26鏈霉素5000101015 15氯霉素7000101020 20新霉素3000101025 25多黏菌素抑菌圈在9毫米以上為高敏，6-9毫米為低敏，無抑菌圈為不敏。 四、應用 藥物敏感試驗后，應選擇高敏藥物進行治療，也可選用兩種藥物協助使用。在選擇高敏藥物時應考慮藥物的吸收途徑，這樣才會達到好的治療效果。項目二、抗體試驗一、實驗用設備： 離心機 1臺 、冰箱 1臺、振蕩器 1臺、抗原、96孔V型板、八道移液器、吸頭

6、、積液槽、一次性采血管、2毫升注射器、紅細胞、檸檬酸三鈉、重鉻酸鉀、硫酸、吸管、吸耳球、針頭、蒸餾水、10毫升離心管 、生理鹽水。二、實驗過程：（一）血凝（HA）試驗：采用96孔V型反應板，測定抗原效價 （二）4單位抗原校正： （三）血凝抑制（HI）試驗：每排孔檢查1份血清。（四）結果判定：1）判定結果：以完全抑制紅細胞凝集的血清最大稀釋度為該血清的HI滴度，以2的指數表示。2）判定標準： 1.新城疫抗體：育雛育成雞在7以上，產蛋雞在9以上。 2.H5抗體：抗體值在6以上。 3.H9抗體：抗體值在7以上。 注：低于以上標準，則需要進行免疫。 3)免疫后抗體規律 一般活疫苗免后7-10天產生抗體

7、，2-3周抗體到達峰值，可以維持2個月。滅活疫苗免后10-15天產生抗體，3-4周抗體到達峰值，可以維持3-4個月。項目三、PCR檢測一、PCR反應的條件設置PCR反應條件為溫度、時間和循環次數。1溫度與時間的設置基于PCR原理三步驟而設置變性-退火-延伸三個溫度點。在標準反應中采用三溫度點法，雙鏈DNA在9095變性，再迅速冷卻至4060，引物退火并結合到靶序列上，然后快速升溫至7075，在Taq DNA 聚合酶的作用下，使引物鏈沿模板延伸。對于較短靶基因（長度為100300bp時）可采用二溫度點法，除變性溫度外、退火與延伸溫度可合二為一，一般采用94變性，65左右退火與延伸（此溫度Taq DNA酶仍有較高的催化活性）。2循環次數循環次數決定PCR擴增程度。PCR循環次數主要取決于模板DNA的濃度，一般的循環次數選在3040次之間，循環次數越多，非特異性產物的量亦隨之增多。二、PCR擴增產物分析PCR產物是否為特異性擴增，其結果是否準確可靠，必須對其進行嚴格的分析與鑒定，才能得出正確的結論。PCR產物的分析，可依據研究對象和目的不同而采用不同的分析方法。三、PCR結果異常分析PCR產物的電泳檢測時間一般為48h以內，有些最好于當日電泳檢測，