1、精選優質文檔-傾情為你奉上課時跟蹤檢測(二)基因工程的基本操作程序 (滿分：50分時間：25分鐘)一、選擇題(每小題2分，共20分)1下列關于基因工程的敘述，正確的是()A目的基因和受體細胞均可來自動、植物或微生物B限制酶和DNA連接酶都能識別特定的堿基序列，是兩類常用的工具酶C人胰島素原基因在大腸桿菌中表達的胰島素原具有生物活性D載體上的抗性基因有利于篩選含重組DNA的細胞和促進目的基因的表達2利用外源基因在受體細胞中表達，可生產人類所需要的產品。下列各項中能說明目的基因完成了在受體細胞中表達的是()A棉花二倍體細胞中檢測到細菌的抗蟲基因B大腸桿菌中檢測到人胰島素基因及其mRNAC山羊乳腺細

2、胞中檢測到人生長激素DNA序列D酵母菌細胞中提取到人干擾素蛋白3下列關于PCR技術的敘述，正確的是()APCR技術建立在對擴增的目的基因序列完全已知的基礎上B該技術需要解旋酶和熱穩定的DNA聚合酶C該技術需要一對特異性的引物，要求一對引物的序列是互補的D該技術應用體內DNA雙鏈復制原理，也需要模板、原料、能量、酶等條件4下列關于基因表達載體的敘述，不正確的是()A基因表達載體的構建是基因工程的核心B其上的啟動子和終止子都是有特殊結構的DNA片段C一般用抗生素抗性基因作為標記基因D雖然基因工程中的受體細胞有所不同，但構建的基因表達載體都是一樣的5右圖是基因工程中基因表達載體的模式圖，若結構X是表

3、達載體所必需的，則X最可能是()A熒光蛋白基因B啟動子C限制酶DDNA連接酶6下列關于基因表達載體導入微生物細胞的敘述中，不正確的是()A常用原核生物作為受體細胞，是因為原核生物繁殖快，且多為單細胞，遺傳物質相對較少B受體細胞所處的一種能吸收周圍環境中DNA分子的生理狀態稱為感受態C感受態細胞吸收DNA分子需要適宜的溫度和酸堿度D感受態細胞吸收重組表達載體DNA分子的液體只要調節為適宜的pH即可，沒必要用緩沖液7(廣東高考)利用基因工程技術生產羧酸酯酶(CarE)制劑的流程如下圖所示，下列敘述正確的是(雙選)()A過程需使用逆轉錄酶B過程需使用解旋酶和PCR獲取目的基因C過程使用的感受態細胞可

4、用NaCl溶液制備D過程可利用DNA分子雜交鑒定目的基因是否已導入受體細胞8以下甲、乙兩圖表示從細菌細胞中獲取目的基因的兩種方法，以下說法中錯誤的是()A甲方法可建立該細菌的基因組文庫B乙方法可建立該細菌的cDNA文庫C甲方法要以脫氧核苷酸為原料D乙方法需要逆轉錄酶參與9右圖表示細胞膜上乙酰膽堿(一種神經遞質)受體基因的克隆技術操作過程，下列相關分析中正確的是()A獲得該mRNA的最佳材料是受精卵B構建基因表達載體最可能使用的載體是大腸桿菌C完成過程必不可少的酶分別是逆轉錄酶、DNA聚合酶D探針篩選的目的是淘汰被感染的細菌，獲得未被感染的細菌10藍藻擬核DNA上有控制葉綠素合成的ch1L基因。

5、某科學家通過構建該種生物缺失ch1L基因的變異株細胞，以研究ch1L基因對葉綠素合成的控制，技術路線如下圖所示，下列相關敘述錯誤的是()A過程應使用不同的限制性內切酶B過程都要使用DNA連接酶C終止密碼子是基因表達載體的重要組成部分D若操作成功，可用含紅霉素的培養基篩選出該變異株二、非選擇題(共30分)11(10分)(江蘇高考)圖1表示含有目的基因D的DNA片段長度(bp即堿基對)和部分堿基序列，圖2表示一種質粒的結構和部分堿基序列。現有Msp、BamH、Mbo、Sma4種限制性核酸內切酶，它們識別的堿基序列和酶切位點分別為CCGG、GGATCC、GATC、CCCGGG。請回答下列問題：(1)

6、圖1的一條脫氧核苷酸鏈中相鄰兩個堿基之間依次由_連接。(2)若用限制酶Sma完全切割圖1中DNA片段，產生的末端是_末端，其產物長度為_。(3)若圖1中虛線方框內的堿基對被TA堿基對替換，那么基因D就突變為基因d。從雜合子中分離出圖1及其對應的DNA片段，用限制酶Sma完全切割，產物中共有_種不同長度的DNA片段。(4)若將圖2中質粒和目的基因D通過同種限制酶處理后進行連接，形成重組質粒，那么應選用的限制酶是_。在導入重組質粒后，為了篩選出含重組質粒的大腸桿菌，一般需要用添加_的培養基進行培養。經檢測，部分含有重組質粒的大腸桿菌菌株中目的基因D不能正確表達，其最可能的原因是_。12(10分)下

7、面是口蹄疫疫苗生產過程示意圖，請據圖回答下列問題：(1)首先從口蹄疫病毒中提取部分合成病毒蛋白的RNA，而不是用口蹄疫病毒的全部RNA，原因是合成病毒蛋白的RNA控制合成的病毒蛋白質，具有_特性，又不會使動物致病。以合成病毒蛋白的RNA產生病毒蛋白的DNA，需用到的工具酶是_。(2)構建基因表達載體所需要的工具酶是_。基因表達載體除目的基因外，還應包括_。(3)導入大腸桿菌前需先將大腸桿菌處理為_細胞。(4)為檢測目的基因是否導入受體細胞，常常要借助載體上_的表達，更準確的方法是利用放射性同位素標記的_作探針與基因組DNA雜交。最后還要檢測目的基因是否翻譯成了病毒蛋白質，利用的技術是_。13(

8、10分)菊天牛是菊花的主要害蟲之一。科研人員將抗蟲基因轉入菊花，培育出抗蟲菊花。下圖是獲得轉基因菊花的技術流程，請據圖回答：注：卡那霉素抗性基因(KanR)作為標記基因，菊花葉片對卡那霉素高度敏感。(1)為了促進土壤農桿菌吸收重組質粒，可用_處理土壤農桿菌，使其處于感受態。(2)將重組質粒導入土壤農桿菌的目的是利用農桿菌能夠_的特點，使目的基因進入受體細胞中，并插入到菊花細胞的_上，最終形成轉基因植株。(3)將愈傷組織轉移到添加一定濃度植物激素和_的培養基中，在適宜條件下進行培養，篩選轉基因菊花。(4)用PCR方法檢測轉基因菊花是否含有目的基因時，需根據_的核苷酸序列設計特異引物，以_為模板進

9、行第一輪擴增。(5)將轉基因菊花嫩莖及葉片與人工飼料以適當比例混合后飼喂菊天牛2齡幼蟲，實驗結果如下表所示。組別死亡率(%)實驗組轉基因植株160.00轉基因植株253.33對照組13.33對照組應飼喂等量的_。據表分析，_差異顯著，說明轉基因菊花對菊天牛2齡幼蟲有較強的毒殺作用。答 案1選A目的基因和受體細胞均可來自動、植物或微生物；基因工程中常用的工具酶有限制酶和DNA連接酶，前者能識別特定的堿基序列；大腸桿菌為原核生物，不含有內質網和高爾基體等細胞器，不能對蛋白質進行加工，其合成的胰島素原無生物活性；載體中的抗性基因為標記基因，其作用是有利于篩選含重組DNA的細胞，不能促進目的基因的表達

10、。2選D基因的表達即控制蛋白質的合成，只有合成了相應的蛋白質才能證明目的基因完成了在受體細胞中的表達。3選DPCR技術擴增的目的基因序列不一定是已知的，A錯誤；PCR技術是通過高溫來使DNA解旋的，不需要解旋酶，B錯誤；該技術需要的一對引物，分別能與模板DNA的兩條鏈的末端堿基配對，其序列不是互補的，C錯誤。4選D由于受體細胞有植物、動物、微生物之分，目的基因導入受體細胞的方法不同，所以，表達載體的構建也有所差別。5選B一個完整的基因表達載體應包括啟動子、終止子、目的基因和標記基因。6選D將基因表達載體導入微生物細胞時，需在一定條件(如適宜的溫度、pH等)下，將基因表達載體和感受態的微生物細胞

11、混合培養，在培養過程中，可能會影響pH的變化，因此要加入緩沖液，以保持適宜的pH。7選AD過程是逆轉錄過程，需要逆轉錄酶催化；從cDNA中獲取所需要的目的基因，根據基因的核苷酸序列、基因的功能、基因在染色體上的位置或基因翻譯產物蛋白質等特性來獲取，不需要用解旋酶，也不需要PCR；用CaCl2溶液處理大腸桿菌，可使其成為感受態細胞；鑒別目的基因是否導入受體細胞可利用DNA分子雜交技術。8選C甲方法是從細菌的DNA中直接提取，故可以建立該細菌的基因組文庫；乙方法是由信使RNA逆轉錄的目的基因，故可以建立該細菌的cDNA文庫。乙方法需要逆轉錄酶和脫氧核苷酸為原料。9選C該受體基因在神經細胞中表達，獲

12、得該mRNA的最佳材料是神經細胞。構建基因表達載體最可能使用的載體是質粒。探針篩選的目的是檢測是否存在cDNA。10選C限制性內切酶有特異性，過程要切割的DNA序列不同，故應使用不同的限制性內切酶；DNA連接酶的作用是連接被切開的磷酸二酯鍵，使ch1L基因、紅霉素抗性基因與質粒結合；基因表達載體由目的基因、啟動子、終止子、標記基因組成，終止密碼子是mRNA上密碼子的一種，表示一次翻譯的結束；變異株中ch1L基因被重組基因替換，重組基因中有紅霉素抗性基因，故可用含紅霉素的培養基篩選出該變異株。11解析：(1)一條脫氧核苷酸鏈中相鄰的兩個堿基之間是通過“脫氧核糖磷酸脫氧核糖”相連的。(2)從Sma

13、 的識別序列和酶切位點可知，其切割后產生的是平末端，圖1中DNA片段有兩個Sma 的識別序列，故切割后產生的產物長度為5343537(bp)、79633790(bp)和6583661(bp)的三個片段。(3)圖示方框內發生堿基對的替換后，形成的d基因失去了1個Sma的識別序列，故D基因、d基因用Sma完全切割所得產物中除原有D基因切割后的3種長度的DNA片段外，還增加一種d基因被切割后出現的長度為5377901 327(bp)的DNA片段。(4)目的基因的兩端都有BamH的識別序列，質粒的啟動子后抗生素A抗性基因上也有BamH的識別序列，故應選用的限制酶是BamH，此時將抗生素B抗性基因作為標

14、記基因，故篩選時培養基中要添加抗生素B。經過同種限制酶切割后會產生相同的末端，部分目的基因與質粒會反向連接而導致基因無法正常表達。答案：(1)脫氧核糖、磷酸、脫氧核糖(2)平537 bp、790 bp、661 bp(3)4(4)BamH抗生素B同種限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D與質粒反向連接12解析：(1)病毒由核酸和蛋白質組成，其蛋白質外殼具有免疫特性，故口蹄疫疫苗生產過程只需提取口蹄疫病毒中控制合成病毒蛋白的RNA部分。以RNA為模板合成DNA的過程屬于逆轉錄，需要逆轉錄酶。(2)基因表達載體的組成：目的基因、啟動子、終止子、標記基因。構建基因表達載體一般用一定的限制酶切割質粒，

15、使其出現一個有黏性末端的切口，再用同種限制酶切割目的基因，產生相同的黏性末端。將切下的目的基因片段，插入質粒的切口處，在DNA連接酶的作用下使質粒與目的基因結合形成重組質粒。(3)將目的基因導入微生物細胞前，常用Ca2處理使其成為感受態細胞。(4)標記基因的表達可檢測目的基因是否導入受體細胞，除此之外還可以用DNA雜交法和抗原抗體雜交技術進行檢測。答案：(1)抗原逆轉錄酶(2)限制性核酸內切酶和DNA連接酶啟動子、終止子、標記基因(3)感受態(4)標記基因病毒蛋白基因(目的基因)抗原抗體雜交技術13解析：(1)通常用Ca2處理細菌，使之處于感受態。(2)根據農桿菌的Ti質粒中的T­DNA可以整合到受體細胞的染色體DNA上的特點，通常用農桿菌轉化法將目的基因導入受體細胞。(3)基因表達載體的構建中，需要標記基因，根據題意可知該標記基因為卡那霉素抗性基因，因此需要在加入卡那霉素的培養基中選擇出成功轉入目的基因的菊花。(4)利用PCR技術擴增目的基因時，需要根據目的基因的脫氧核苷酸序列設計引物，同時利用