1、祁自柏-體外診斷試劑分類和基本原理十六個體系考核類型分類表十六個體系考核類型分類表分類產品型別及產品舉例（第一類）酶聯免疫（酶標板、磁珠、微粒子）類試劑酶聯免疫法：乙型肝炎病毒e抗體診斷試劑盒（酶聯免疫法）；癌胚抗原定量測定試劑盒(免疫熒光法)化學發光法：人生長激素（GH）定量測定試劑盒增強化學發光免疫分析法：巨細胞病毒抗體檢測試劑盒時間分辨熒光法：游離甲狀腺素（FT4）定量測定試劑盒電化學發光法：甲型肝炎病毒抗體診斷試劑盒微粒子酶免法：丙型肝炎病毒抗體診斷試劑盒（第二類）膠體金（硒、乳膠）類試劑膠體金法：梅毒抗體-乙肝表面抗原診斷試劑盒膠體硒法：HIV(1+2+0)試劑盒（第三類）免疫印跡試

2、劑免疫印跡試劑盒:風濕病自身抗體檢測試劑盒（免疫印跡法）（第四類）蛋白芯片（微陣列）類試劑蛋白芯片（微陣列）：丙型肝炎病毒抗體檢測試劑盒（蛋白芯片法）；多腫瘤標志物檢測試劑盒（蛋白芯片法）（第五類）單抗類試劑血型定型類試劑：血型定型試劑盒（單克隆抗體）免疫組化：ImmuChem免疫組化試劑盒（單抗）免疫比濁：血清載脂蛋白A1免疫比濁試劑盒乳膠凝集：D-dimer二聚體乳膠凝集試劑盒（第六類）多抗類試劑血型定型類試劑：血型定型試劑盒（人血清/馬血清）免疫組化：癌胚抗原檢測試劑盒（多抗）免疫比濁：-微球蛋白測定試劑盒（免疫比濁法）乳膠凝集：沙門氏菌乳膠凝集試劑盒（第七類）診斷血清（菌液）診斷血清：

3、侵襲性大腸埃希氏菌診斷血清；志賀氏菌屬四種混合多價血清診斷菌液：傷寒沙門菌菌體（O）抗原、鞭毛（H）抗原診斷菌液（第八類）血球凝集類試劑抗體致敏血球：破傷風抗體診斷試劑（血凝法）；白喉抗體診斷試劑（血凝法）（第九類）核酸擴增類試劑熒光PCR：乙型肝炎病毒核酸定量測定試劑盒PCR-ELISA：結核分支桿菌檢測試劑盒（核酸擴增酶聯免疫法）PCR-毛細管電泳：性染色體多倍體（分型與突變）檢測試劑盒；PCR-電泳：-地中海貧血基因診斷試劑盒（gap-PCR法）轉錄介導擴增（TMA）：沙眼衣原體與結核分枝桿菌檢測試劑盒第十類）基因芯片（微陣列）類試劑基因芯片（微陣列）：-地中海貧血基因芯片診斷試劑盒PC

4、R-雜交：人乳頭瘤病毒基因分型檢測試劑盒（PCR-反向雜交法）（第十一類）探針放大（原位雜交）類試劑bDNA類：HIV-1bDNA檢測試劑盒；mRNA檢測試劑盒(生物素原位雜交法)（第十二類）普通生化類試劑（十萬級要求）（包括酶類化學試劑、凝血試劑類等試劑）酶類化學試劑:丙氨酸氨基轉移酶（ALT）測定試劑盒；堿性磷酸酶（ALP）測定試劑盒凝血試劑:凝血酶原時間（PT）測定試劑盒；組織纖溶酶原激活物（t-PT）測定試劑盒（第十三類）普通生化類試劑（清潔環境）（包括一般化學試劑、血氣電解質類、血液分析儀用試劑類等）一般化學試劑：無機離子（鋁、鎘等）測定試劑盒；白蛋白測定試劑盒（BCG法）；總膽固醇

5、測定試劑盒（COD-CE-PAP法）血氣電解質:電解質分析儀隨機試劑；生化分析儀用稀釋液、沖洗液血液分析儀用試劑:血液分析儀用稀釋液、溶血劑（第十四類）干化學類試劑干化學試劑（條、卡或盒）：干化學尿液分析試紙條；尿微量白蛋白（UALB）測試卡（第十五類）藥敏類試劑藥敏紙片（卡）：抗生素藥敏紙片；隨機專用藥敏試劑（盒）（卡）（第十六類）培養基類馬丁干粉培養基；人胚胎干細胞無血清培養基 我國體外試劑的幾個發展階段我國體外試劑的幾個發展階段1 七十年代末，七十年代末， 乳膠凝集，血球凝乳膠凝集，血球凝(PHA,RPHA）2 八十年代初期，放射免疫測定八十年代初期，放射免疫測定(RIA)， 抗抗HBs

6、單克隆抗體單克隆抗體3 八十年代中期，酶聯免疫試劑，基因工程表達乙肝八十年代中期，酶聯免疫試劑，基因工程表達乙肝 病毒核心抗原和病毒核心抗原和e抗原抗原4 九十年代，九十年代， 聚合酶鏈反應聚合酶鏈反應(PCR)，丙肝，戊肝，丙肝，戊肝 病毒基因被克隆，各種基因工程抗病毒基因被克隆，各種基因工程抗 原被應用原被應用5 近期，近期， 發光免疫發光免疫,生物芯片技術生物芯片技術(基因芯片，基因芯片， 蛋白芯片蛋白芯片)（第一類）酶聯免疫（酶標板、磁珠、微粒子）類試劑 酶聯免疫法：乙型肝炎病毒e抗體診斷試劑盒（酶聯免疫法）； 癌胚抗原定量測定試劑盒(免疫熒光法) 化學發光法：人生長激素（GH）定量測

7、定試劑盒 增強化學發光免疫分析法：巨細胞病毒抗體檢測試劑盒 時間分辨熒光法：游離甲狀腺素（FT4）定量測定試劑盒 電化學發光法：甲型肝炎病毒抗體診斷試劑盒 微粒子酶免法：丙型肝炎病毒抗體診斷試劑盒酶聯免疫試劑 抗原抗體之間的特異反應與酶的高效催化反應有機的結合。固相樣品放大 抗原抗體抗抗體-酶-底物-顯色 抗體抗原抗體-酶-底物-顯色酶標板酶標板樣品中樣品中HCV 抗原抗原HRP 酶標記抗酶標記抗HCV抗體抗體抗抗 HCV 抗體抗體HRP酶酶單克隆抗體單克隆抗體丙肝抗原ELISA試劑HIV-1p24抗原檢測試劑的原理 1 雙抗體夾心法應用雙抗體夾心法應用 HBsAg, HBeAg, HBcAg

8、, pres1, pres22 雙抗原夾心法雙抗原夾心法 應用應用 抗抗HBs，抗，抗HIV 3競爭法競爭法 應用應用 抗抗HBc, 抗抗pres2 4 中和抑制法中和抑制法 應用應用 抗抗Hbe 5 捕獲法捕獲法 應用應用 抗抗HBc IgM 6 間接法應用間接法應用 抗抗HCV, 抗抗HEV, 幾種主要的酶聯免疫方法模式幾種主要的酶聯免疫方法模式（AMPPD) 魯米諾及其衍生物的增敏化學發光系統（魯米諾及其衍生物的增敏化學發光系統（HRPHRP） NH2NHONHONH2NHNHOOOOH-N2NH2OOOOH*NH2OOOOH+光魯米諾及其衍生物的增強劑（魯米諾及其衍生物的增強劑（Enh

9、ancerEnhancer）+電化學發光法原理電化學發光法原理 在電場的作用下，三丙胺 （TPA） 被氧化成陽離子自由基TPA+，后者很不穩定，可自發失去一個質子（H+），形成自由基TPA，這是一種很強的還原劑，可將一個電子給三價的三聯吡啶釕衍生物 Ru(bpy)33+，使其形成激發態的Ru(bpy)32+，而TPA自身被氧化成二丙胺和丙醛。 激發態的Ru(bpy)32+通過熒光機制衰減，發射出一個波長620nm的光子，重新生成基態的Ru(bpy)32+。該過程在電極表面周而復始地進行，產生許多光子，光電倍增管檢測光強度，光強度與Ru(bpy)32+的濃度呈線性關系，故可測出待測抗原的含量。

10、時間分辨熒光增強原理時間分辨熒光增強原理優點：結構簡單，運行成本低優點：結構簡單，運行成本低缺點：明顯的易產生交叉污染，工作效缺點：明顯的易產生交叉污染，工作效率受限。率受限。生產廠商產品技術類型反應體系產品特點儀器類型ROCHE電化學發光、磁微珠腫瘤標志物E170ABBOTT化學發光、磁微珠堿性磷酸酶、吖啶酯乙肝項目I2000Bayer化學發光、磁微珠吖啶酯內分泌項目ADVIACentaurBeckman化學發光、磁微珠堿性磷酸酶UniCelDxI800DPC化學發光、塑料球堿性磷酸酶藥物分析Immuline2000強生化學發光辣根過氧化物酶丙肝生物梅里埃化學發光堿性磷酸酶HIVPE(Wal

11、lac)時間分辨熒光（第二類）膠體金（硒、乳膠）類試劑 膠體金法：梅毒抗體-乙肝表面抗原診斷試劑盒 膠體硒法：HIV(1+2+0)試劑盒膠體金試劑原理硝酸纖維膜加樣檢測區對照區(HBsAg)-玻璃纖維膜-抗HBs羊抗鼠鼠抗HBs膠體金免疫層析法反應示意圖膠體金免疫層析法反應示意圖吸樣墊膠體金墊包被T線包被C線上樣墊NC膜支撐物HIV膠體金類快速診斷試劑檢測結果第三類）免疫印跡試劑 免疫印跡試劑盒:風濕病自身抗體檢測試劑盒（免疫印跡法）免免 疫疫 印印 跡跡 法法 示示 意意 圖圖q 用于用于RR樣品的樣品的HCV抗體確認抗體確認q 獨特的獨特的IgG（I/II）及）及hSOD內部質控設計內部質

12、控設計q 用于檢測的固相化抗原用于檢測的固相化抗原 重組表達蛋白重組表達蛋白：c33c，NS5 合成肽抗原合成肽抗原：c100p（5-1-1p），），c22pIgG control IIIgG control IIDc100(p)5-1-1(p)c33cc22(p)hSODNS5RIBA HCV 3.0c100-3NS5c33cc22-3SOD3+ Control1+ ControlPosINDPosNegINDRIBA模式圖模式圖3 + control band (serum addition)CapsidNS3-1NS3-2NS4NS51+ control band(reagent add

13、ition)GLD HCV BLOT 3.0（第四類）蛋白芯片（微陣列）類試劑 蛋白芯片（微陣列）：丙型肝炎病毒抗體檢測試劑盒（蛋白芯片法）； 多腫瘤標志物檢測試劑盒（蛋白芯片法）每張芯片檢測48個樣本，每個樣本同時檢測5個指標，丙型肝炎病毒分片斷抗體檢測蛋白芯片NS4NS4NS3NS3CC總總NS5NS5（C代表核心,NS3,NS4,NS5代表非結構區抗原）陽性對照陰性對照空白對照（第五類）單抗類試劑 血型定型類試劑：血型定型試劑盒（單克隆抗體） 免疫組化：ImmuChem免疫組化試劑盒（單抗） 免疫比濁：血清載脂蛋白A1免疫比濁試劑盒 乳膠凝集：D-dimer二聚體乳膠凝集試劑盒（第六類）

14、多抗類試劑 血型定型類試劑：血型定型試劑盒（人血清/馬血清） 免疫組化：癌胚抗原檢測試劑盒（多抗） 免疫比濁：-微球蛋白測定試劑盒（免疫比濁法） 乳膠凝集：沙門氏菌乳膠凝集試劑盒抗原 抗原：指進入有免疫活性的組織（宿主）而引發免疫應答的物質。或雖不能引發免疫，但可以同抗體結合的物質。蛋白質，多糖，核酸，糖脂，青霉素 全抗原性具有多個抗原決定族抗體 宿主對體內存在的外來分子，微生物或其他因子的應答而產生的蛋白質（免疫球蛋白，丙種球蛋白） 根據抗體性質：多克隆抗體，單克隆抗體 根據抗體分子結構：IgA,D,E,G,MIgGIgM抗體模式圖抗體模式圖單克隆抗體 由一株淋巴細胞產生，針對一種抗原決定族

15、 抗原免疫小鼠-取脾臟-與瘤細胞融合-克隆篩選-單克隆抗體細胞株 擴增細胞-注射入小鼠腹腔-采腹水-純化抗體流流程程雜交瘤技術雜交瘤技術多克隆抗體 針對多個抗原決定族 抗原免疫動物-采集動物血清 純化抗體 血型血型 抗原抗原/RBC 抗體抗體/外周血外周血 A A anti-B B B anti-A O none anti-A & anti-B AB A & B noneABO血型測定血型測定空氣柱空氣柱玻璃珠玻璃珠反應艙反應艙試劑試劑（第七類）診斷血清（菌液） 診斷血清：侵襲性大腸埃希氏菌診斷血清； 志賀氏菌屬四種混合多價血清 診斷菌液：傷寒沙門菌菌體（O）抗原、鞭毛（H）抗

16、原診斷菌液診斷血清工藝流程診斷血清工藝流程采集血清收集抗體（離心機）效價檢測等分裝、凍干免疫動物免疫抗原制備分離血清滅活處理吸收非特異性抗體吸收用抗原制備診斷菌液工藝流程診斷菌液工藝流程效價檢測等效價檢測等分裝、包裝分裝、包裝細菌培養細菌培養滅活處理滅活處理（第八類）血球凝集類試劑 抗體致敏血球：破傷風抗體診斷試劑（血凝法）； 白喉抗體診斷試劑（血凝法）間接凝集試驗示意圖間接凝集試驗示意圖+ 用可溶性抗原致敏紅細胞或其它顆粒性介質，可以用可溶性抗原致敏紅細胞或其它顆粒性介質，可以用來測定細菌、病毒等微生物的抗體用來測定細菌、病毒等微生物的抗體。間接血凝試劑基本生產工藝流程間接血凝試劑基本生產工

17、藝流程 醛化紅細胞的制備醛化紅細胞的制備致敏抗原或抗體的制備致敏抗原或抗體的制備紅細胞的采集紅細胞的采集致敏抗原（或抗體）的制備致敏抗原（或抗體）的制備 紅細胞的醛化紅細胞的醛化（洗滌、離心、醛化）（洗滌、離心、醛化）致敏抗原（或抗體）的檢定致敏抗原（或抗體）的檢定對照血球的制備對照血球的制備 紅細胞的致敏紅細胞的致敏（鞣化、致敏、封閉）（鞣化、致敏、封閉）稀釋液的制備稀釋液的制備半成品檢定半成品檢定分裝、凍干、包裝分裝、凍干、包裝成品檢定成品檢定（第九類）核酸擴增類試劑 熒光PCR：乙型肝炎病毒核酸定量測定試劑盒 PCR-ELISA：結核分支桿菌檢測試劑盒（核酸擴增酶聯免疫法） PCR-毛細

18、管電泳：性染色體多倍體（分型與突變）檢測試劑盒； PCR-電泳：-地中海貧血基因診斷試劑盒（gap-PCR法） 轉錄介導擴增（TMA）：沙眼衣原體與結核分枝桿菌檢測試劑盒PCR基本原理示意圖PCR過氧化過氧化物酶聯物酶聯物物96孔酶標法孔酶標法加樣加樣分析分析觀察觀察數據數據96孔酶標法孔酶標法Polymerization5 5 3 3 5 Forward Primer5 Reverse PrimerStrand Displacement5 5 3 3 5 5 P 3 RQRQProbeP 3 RQCleavage5 5 3 3 5 5 P 3 RQPolymerizationComplete

19、d5 5 3 3 5 5 P 3 RQReporterQuencherContinuouscyclingDegrade RNA with RNase H activityand primer 2 hybridizesChiron Procleix HIV-1/HCV AssayStep 2: Transcription-Mediated AmplificationRNA transcription by RNA polymeraseRNA amplification productIsothermalincubation109 foldamplificationin one hourcDNA

20、synthesis by reverse transcriptaseDNA synthesis by reverse transcriptase Target RNAPromoter-primer hybridizes（第十類）基因芯片（微陣列）類試劑 基因芯片（微陣列）：-地中海貧血基因芯片診斷試劑盒 PCR-雜交：人乳頭瘤病毒基因分型檢測試劑盒（PCR-反向雜交法）基因芯片法聯合檢測基因芯片法聯合檢測HBV DNAHCV RNA 乙型肝炎病毒基因多態性檢測芯片芯片外觀及點樣區示意圖如上：芯片外觀及點樣區示意圖如上：點陣信息：點陣信息：點陣信息：點陣信息：A1: 1896A1: 1896野生

21、型野生型 B1: 1896 B1: 1896 突變型突變型A2: 1814A2: 1814野生型野生型 B2: 1814 B2: 1814 突變型突變型A3: 1762A3: 1762野生型野生型 B3: 1762 B3: 1762 突變型突變型A4: 1764A4: 1764野生型野生型 B4: 1764 B4: 1764 突變型突變型A5: PA5: P區區528528位位 野生型野生型 B5: P B5: P區區528528位突變型位突變型A6: PA6: P區區552552位位 野生型野生型 B6: P B6: P區區552552位位 突變型突變型A7: PA7: P區區552552位

22、位 突變型突變型 B7 B7： 陰性參照陰性參照 檢測結果圖1762/64位點聯合變異丙型肝炎病毒基因分型檢測芯片示意圖：陽性內參照：陽性內參照I；：陰性內參照：陰性內參照I； ：陽性內參照：陽性內參照II；：陰性內參照：陰性內參照II。 A1: I型型 B1: I型型A2: 1a/2a B2: 1a/1b A3: 1b B3: 1 b A4: II型型 B4: II型型A5: 2a B5: 2aA6: 3a/3b B6: 3bA7: 3b B7: 6aA8： 陰性陰性 A8：陰性：陰性 丙型肝炎病毒基因分型芯片示意圖（第十一類）探針放大（原位雜交）類試劑 bDNA類：HIV-1bDNA檢測試

23、劑盒； mRNA檢測試劑盒(生物素原位雜交法)探針放大類試劑探針放大類試劑-支鏈支鏈DNA技術技術病毒的病毒的RNA釋放后加入微孔板中釋放后加入微孔板中板孔中包被有可與病毒特異結合的一板孔中包被有可與病毒特異結合的一系列靶探針（系列靶探針（Target Probe），另一系列靶探針的一端可標記在游離的病毒），另一系列靶探針的一端可標記在游離的病毒核酸鏈上，另一端可與核酸鏈上，另一端可與bDNA結合結合bDNA信號放大信號放大加入酶標記物對結加入酶標記物對結合的合的bDNA進行標記進行標記經過清洗后加入底物進行反應，測定反應強度。經過清洗后加入底物進行反應，測定反應強度。（第十二類）普通生化類試

24、劑（十萬級要求）（包括酶類化學試劑、凝血試劑類等試劑） 酶類化學試劑:丙氨酸氨基轉移酶（ALT）測定試劑盒； 堿性磷酸酶（ALP）測定試劑盒 凝血試劑:凝血酶原時間（PT）測定試劑盒； 組織纖溶酶原激活物（t-PT）測定試劑盒普通生化類試劑普通生化類試劑(十萬級要求十萬級要求)（1）原理：原理： 臨床普通生化類試劑是一類用于測定人血液、尿液等中各項生化臨床普通生化類試劑是一類用于測定人血液、尿液等中各項生化指標的試劑。含有各種非特異性蛋白成分，要求在十萬級潔凈環指標的試劑。含有各種非特異性蛋白成分，要求在十萬級潔凈環境中生產。檢測方法均為比色法，方法學原理均為顯色反應。境中生產。檢測方法均為比

25、色法，方法學原理均為顯色反應。 產品涉及：產品涉及： 1、酶類：含酶、輔酶與牛血清白蛋白等、劑型為干粉或液體。、酶類：含酶、輔酶與牛血清白蛋白等、劑型為干粉或液體。 2、血凝類：試劑組分中含有其他活性類組分（如兔腦粉等）。、血凝類：試劑組分中含有其他活性類組分（如兔腦粉等）。生產工藝：原材料稱量、溶解、定容、中試、分裝、組裝、成品生產工藝：原材料稱量、溶解、定容、中試、分裝、組裝、成品檢驗。檢驗。 關鍵控制點：原料稱量、配制、物料平衡。關鍵控制點：原料稱量、配制、物料平衡。細則要求：應在細則要求：應在10萬級凈化環境中進行生產操作。萬級凈化環境中進行生產操作。（第十三類）普通生化類試劑（清潔環

26、境）（包括一般化學試劑、血氣電解質類、血液分析儀用試劑類等） 一般化學試劑：無機離子（鋁、鎘等）測定試劑盒； 白蛋白測定試劑盒（BCG法）； 總膽固醇測定試劑盒（COD-CE-PAP法） 血氣電解質:電解質分析儀隨機試劑；生化分析儀用稀釋液、沖洗液 血液分析儀用試劑:血液分析儀用稀釋液、溶血劑普通生化類試劑（清潔環境）普通生化類試劑（清潔環境）原理：與普通生化試劑（十萬級要求）類相同。原理：與普通生化試劑（十萬級要求）類相同。產品涉及：無機離子檢測、血氣電解質類、血產品涉及：無機離子檢測、血氣電解質類、血液分析儀用試劑類等試劑。液分析儀用試劑類等試劑。 工藝要求：除生產可在清潔環境中進行操作工

27、藝要求：除生產可在清潔環境中進行操作外，生產工藝和關鍵控制點與普通生化試劑外，生產工藝和關鍵控制點與普通生化試劑（十萬級要求）類相同。（十萬級要求）類相同。（第十四類）干化學類試劑 干化學試劑（條、卡或盒）：干化學尿液分析試紙條； 尿微量白蛋白（UALB）測試卡干化學類試劑干化學類試劑原理：以濾紙為載體，將各種試劑組分浸漬后干燥，原理：以濾紙為載體，將各種試劑組分浸漬后干燥，作為試劑層，固定在支持物上，試紙上的各測試塊與作為試劑層，固定在支持物上，試紙上的各測試塊與被測樣品中的成分發生酶化學反應，使試紙塊發生不被測樣品中的成分發生酶化學反應，使試紙塊發生不同的顏色變化，顏色深淺與樣品中的成份含

28、量成正比，同的顏色變化，顏色深淺與樣品中的成份含量成正比，再由光電耦合元件對測試塊的顏色進行判讀，達到測再由光電耦合元件對測試塊的顏色進行判讀，達到測定樣品中化學成分含量的目的。定樣品中化學成分含量的目的。 生產工藝主要環節：生產工藝主要環節： 特定試劑的配制、試劑條的浸潤、干燥、切割、分包裝特定試劑的配制、試劑條的浸潤、干燥、切割、分包裝等；等； （第十五類）藥敏類試劑 藥敏紙片（卡）：抗生素藥敏紙片；隨機專用藥敏試劑（盒）（卡）藥敏類試劑藥敏類試劑原理：是將抗菌藥物吸收到特定的紙片中，然后置于已接種待測原理：是將抗菌藥物吸收到特定的紙片中，然后置于已接種待測定菌的固體培養基上，抗菌藥物通過向培養基內的擴散，抑制敏定菌的固體培養基上，抗菌藥物通過向培養基內的擴散，抑制敏感細菌的生長，從而出現抑菌環（帶）。由于藥物擴散的距離越感細菌的生長，從而出現抑菌環（帶）。由于藥物擴散的