1、微衛星不穩定狀態對散發性直腸癌預后的影響         08-07-19 16:05:00     編輯：studa20            作者：孟文建 孫曉峰 田超 王玲 于永揚 辜俊 夏慶杰 周總光 【摘要】  目的 研究漢族人散發性直腸癌的微衛星不穩定狀態(microsatellite instability,MSI)及其與臨床病理學和預后的關系

2、。方法 應用PCR擴增患者腫瘤組織和對應正常組織的DNA，分析微衛星不穩定狀態，并采用單因素、多因素分析評估預后。結果 MSI分為高頻率微衛星不穩定(microsatellite instabilityhigh,MSIH)、低頻率微衛星不穩定(microsatellite instabilitylow,MSIL)、微衛星穩定(microsatellite stability,MSS)。93例直腸癌患者中，MSIH 11例(12%)，MSIL和MSS分別為23例(25%)和59例(63%)。與MSIL和MSS相比，大多數MSIH為高分化腫瘤、患者年齡小、術前CEA水平高、總的生存率高。結論 在漢

3、族人群散發性直腸癌中，MSIH發生率高，且MSI是一個相對較好的預后預測指標。 【關鍵詞】  微衛星不穩定； 直腸腫瘤； 散發性     【Abstract】  Objective  To investigate the relationship between microsatellite instability (MSI) status and clinicopathological features and prognosis of sporadic rectal cancer in Chinese Han popul

4、ation. Methods  DNAs from freshfrozen paired samples of tumors and corresponding normal tissue from 93 rectal cancer patients were analyzed for MSI by PCR amplification. Cox proportional hazards model was used to assess prognostic significance. Results  Eleven (12%) tumors in our study wer

5、e highfrequency MSI (MSIH), 23 (25%) were lowfrequency MSI (MSIL) and 59 (63%) were microsatellite stable (MSS).  Compared with MSIL and MSS tumors, most of the MSIH tumors were found in young patients, had high grade of differentiation and high level of preoperative serum carcinoembryonic anti

6、gen. The survival rates of rectal cancer patients with MSIH were higher than those with MSIL or MSS (RR, 2.373; 95% CI, 1.351 to 4.167, P<0.01). Conclusions  There is high incidence of MSIH in sporadic rectal carcinoma in Chinese Han population. MSI is a comparatively good prognostic factor

7、of sporadic rectal carcinoma.    【Key words】  Microsatellite instability;  Rectal cancer;  Sporadic    在國內，腫瘤引起的死亡中結直腸癌居第5位，并且有上升的趨勢。過去30多年由于技術的進步使其病死率有所下降，但總的預后仍然很差。微衛星不穩定狀態(microsatellite instability，MSI)的評估能為結直腸腫瘤提供有用的預后信息1。本研究旨在通過檢測漢族人散發性直腸癌的微衛星不穩定狀態，

8、研究其與臨床病理學和預后的關系。    1  材料與方法    1.1  臨床資料    收集2002-2005年四川大學華西醫院胃腸外科經手術切除的102例漢族患者直腸癌標本中的腫瘤組織與正常直腸黏膜組織。基于缺乏相關家族史，經詳細詢問，均被認為散發性。根據文獻2，懷疑具有遺傳性非息肉病性大腸癌的患者被排除。入選病例術前均未行放、化療。102例患者中， 9例由于標本不足或失訪，僅93例進行研究。家族史、民族情況通過口頭詢問獲得。腫瘤組織學類型及分化程度根據WHO標準,臨床病理學分期根

9、據第六版美國癌癥聯合委員會(AJCC)分期指南。    隨訪采用門診復查、電話及書信。30例期和30例期直腸癌患者接受術后化療(5氟尿嘧啶+四氫葉酸+奧沙利鉑)，15例期患者中，10例接受術后化療，其余患者接受中藥治療。生存時間定義為自手術治療之日至末次隨訪日或死亡所經歷的時間，以月為單位計算。研究終點為2006年10月，中位隨訪時間為34個月(448個月)。    1.2  DNA提取    石蠟組織連續切片，再進行顯微切割，把切割后含70%以上腫瘤細胞的組織和正常大腸組織用二甲苯和酒精多次脫

10、蠟,加蛋白酶K消化后，用快速鹽析法提取DNA，4 保存備用。    1.3  MSI測定    引物由寶生物工程(大連)公司合成。選擇美國國立癌癥研究所(NCI)推薦的5個標記(BAT25、BAT26、D2S123、D5S346和D17S250)進行MSI研究。所有引物序列根據基因數據庫。將腫瘤與其相應正常組織基因組DNA的PCR結果同時比較，若腫瘤標本電泳帶對照正常組織相應電泳帶出現移位帶或額外帶即為MSI，若5個微衛星位點中有2位點表現為MSI則為高頻率微衛星不穩定(microsatellite instabilityh

11、igh,MSIH)；若僅1個位點出現MSI，則為低頻率微衛星不穩定(microsatellite instabilitylow,MSIL)；若沒有位點出現MSI則為微衛星穩定(microsatellite stability,MSS)。PCR條件參照文獻3，PCR產物采用2%含Goldview的凝膠進行電泳，然后用紫外線透照燈檢查并證實為一條帶。證實后的PCR產物在6%含8 mol/L尿素的變性聚丙烯酰胺凝膠中電泳分離。凝膠參照文獻4的方法進行銀染。出現MSI的病例分別重復23次PCR和電泳。1.4  統計學分析    數據采用SPSS 13.0軟件包分析。用2檢驗、t檢驗和Fisher確切概率法對臨床病理學各參數進行統計；生存曲線通過KaplanMeier法生成并采用Logrank檢驗進行比較；多因素分析采用Cox比例風險模型，僅統計有意義變量進入最終Cox模型分析，雙側檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。    2  結果    2.1  患者基本特征    93例中，男