1、    心脈靈注射液對內毒素休克大鼠海馬組織NOS活性的影響        摘要：采用尾靜脈注射大腸桿菌內毒素復制大鼠內毒素休克模型，檢測動物血壓、腦系數、海馬組織一氧化氮合酶(NOS)活性及海馬CA1區形態學改變，探討心脈靈注射液對內毒素休克大鼠的作用機理。結果顯示：與病理組相比，注入心脈靈注射液后1h、6h，動物血壓上升，腦系數下降，海馬組織NOS活性顯著增高，海馬CA1區神經元損傷明顯減輕，動物無死亡。提示心脈靈注射液能夠改善內毒素休克所致的低血壓及腦水腫，保護海馬CA

2、1區神經元，增強海馬組織NOS活性，起到抗內毒素休克的作用。關鍵詞：心脈靈注射液；內毒素休克；一氧化氮合酶；海馬；大鼠 Effects of Xinmailing Injection on NOS Activity of HippocampalTissue of the Endotoxin Shocked RatTao Hong(陶虹),Li Xiaoyue(李小粵),Liu Zhaohui(劉朝暉),et al.(Beijing University of Traditional Chinese Medicine, Beijing 100029)ABSTRACT: Injecting col

3、itoxin to caudal vein was used to duplica te rat mod el of endotoxin shock. Examine blood pressure, cerebral coefficient, nitrous oxi de synthetase (NOS) activity of hippocampal tissue and morphological modificatio n in the CA1 section of the hippocampal tissue, to discuss the mechanism of action of

4、 Xinmailing Injection on the endotoxin shocked rat. Results: Compared with the pathologic group, after injecting Xinmailing 1h and 6h respectively, the blood pressure was increased, cerebral coefficient decreased, NOS activity of hippocampal tissue markedly acce ntuated, the injured neurons of the C

5、A1 section of hippocampal tissue markedl y rel ieved. It suggests that Xinmailing Injection can improve the hypotension and ven ous edema caused by endotoxin shock, protect neurons of the CA1 section of hippo campal tissue, enhance the NOS activity of hippocampal tissue, so to take an eff ection of

6、anti-endotoxin shock.KEY WORDS: Xinmailing Injection; Endotoxin shock; NOS; hippocamp al tissue; Rat心脈靈注射液是在四逆湯基礎上研制成的注射液，具有回陽救逆，益氣固脫的功效。研究表明1,2，它對狗、兔、大鼠等內毒素休克有顯著療效。本實驗著重檢測內毒素休克大鼠海馬組織一氧化氮合酶(NOS)活性，觀察海馬CA1區神經元形態變化，以及心脈靈注射液對其的影響，為闡明心脈靈注射液抗休克的作用機制提供實驗依據。1材料與方法1.1材料雄性Wistar大鼠(北京醫科大學實驗動物中心提供)，體重140200g；大

7、腸桿菌內毒素(北京生物制品所提供，批號：810011)；心脈靈注射液(北京中醫藥大學制劑教研室提供)；RBP-1型大鼠尾壓心率測定儀(中日友好醫院臨床醫學研究所提供)；NOS活性試劑盒(軍事醫學科學院放射醫學研究所提供，批號：970825)；紫外分光光度計(HITACHI，U-2000)。1.2方法1.2.1模型制備：實驗動物禁食1d，隨機分為3組。正常組：尾靜脈一次推注生理鹽水10mL/kg，5min后再注射1次，劑量同前；病理組：將10mg/kg大腸桿菌內毒素溶于10mL/kg生理鹽水中，尾靜脈推注，5min后再注入同等劑量的生理鹽水；治療組：按10mL/kg注入心脈靈注射液，5min后再

8、給予內毒素，劑量與方法同病理組。1.2.2血壓測定：用RBP-1型大鼠尾壓心率測定儀測量造模后1h、6h大鼠尾動脈血壓。1.2.3大鼠海馬組織NOS活性測定：大鼠分別于造模1h、6h殺檢、取腦，冰浴下分離腦組織，取海馬200mg。組織樣品按200g/L加入40mmol/LpH7.2磷酸鉀緩沖液中，勻漿，10000r/min離心20min，取上清液，加入反應底物L-Arg、NaDPH等，立即計時、振蕩，分別在401nm、421nm波長下測定每一樣品的OD值，同時每隔30s記錄1次，最后計算出每克組織每分鐘產生的一氧化氮(NO)量，即NOS活性。1.2.4腦系數測定：腦組織稱重，按腦濕重/體重&#

9、215;100%計算。1.2.5海馬CA1區神經元形態檢測：取大鼠腦組織冠狀切面，20%福爾馬林固定，石蠟切片，HE染色，光鏡下觀察。1.2.6死亡率檢測：按各組動物6h死亡數/各組動物數×100%計算。1.2.7統計學處理用±s表示檢測結果，用t檢驗法比較組間差異的顯著性。2實驗結果2.1心脈靈注射液對內毒素休克大鼠血壓的影響實驗前大鼠平均血壓為(18.30±0.56)kPa(n=25)，注入內毒素后血壓呈不可逆性下降，1h降至(4.40±2.72)kPa，6h降為(3.36±3.36)kPa，與實驗前相比有顯著差異(P0.001)；治療組血

10、壓回升，1h升至(10.42±2.61)kPa，6h繼續上升到(12.22±3.10)kPa(各組均為n=5)，病理組6h死亡率為57.14%，其余組無死亡。2.2心脈靈注射液對內毒素休克大鼠海馬組織NOS活性的影響病理組1h、6h海馬組織NOS活性迅速降低，與正常組比較有顯著差異(P0.001)，隨著休克的發展，NOS活性呈下降趨勢；治療組1h、6hNOS活性較病理組明顯升高(分別為P0.01、P0.001)。見表1。表1心脈靈注射液對內毒素休克大鼠海馬組織NOS活性的影響(nmol/(ming)；±s；n=5)組別NOS活性1h6h正常組0.6218±

11、;0.0719病理組-0.3109±0.0777*-0.4275±0.0719*治療組0.1166±0.0991*0.3109±0.0777*注：與正常組比較*P0.05*P0.01*P0.001； 與病理組比較P0.01P0.0012.3心脈靈注射液對內毒素休克大鼠腦系數的影響正常組1h腦系數為0.93±0.01，病理組1h、6h腦系數分別為1.05±0.05，1.09±0.04，均顯著高于正常組(P0.05)；用心脈靈注射液治療后，腦系數呈持續降低趨勢；1h、6h分別為1.03±0.06，1.00±0

12、.06，與病理組比較差異不明顯(各組均為n=5)。2.4心脈靈注射液對內毒素休克大鼠海馬CA1區神經元形態結構的影響光鏡下，正常組CA1區神經元呈復層排列，細胞形態正常；病理組1h變化不明顯，6h可見神經元排列紊亂，有的出現核固縮、核碎裂、空泡變性，部分神經元腫脹、溶解、脫失成為鬼影細胞，并有神經細胞被噬現象，血管與周圍組織間隙加寬；治療組CA1區神經元排列整齊，細胞結構基本正常，神經元周圍組織未見明顯異常，6h比1h有更明顯的改善。3討論用靜脈注射內毒素的方法復制大鼠休克模型，結果顯示動脈血壓呈不可逆下降。動物表情淡漠，四肢厥冷，呼吸微弱，相當于中醫厥證的陽氣衰微型，進一步發展可導致死亡。用

13、心脈靈注射液治療后，大鼠血壓持續回升，動物肢體轉溫、表情自然、呼吸平穩，并且無死亡。說明心脈靈注射液具有回陽救逆、益氣固脫的作用，能夠升高血壓、降低死亡率，對內毒素休克有顯著療效。一氧化氮(NO)是一種具有多種生理功能的介質，能夠調節微血管血流、抑制血小板聚集、防止白細胞激活和附壁4。NO合成釋放異常與內毒素休克有密切關系，由于NO必須在NOS催化下以L-Arg為底物合成，故本實驗通過檢測海馬組織NOS活性來反映NO的變化情況，以探討心脈靈注射液抗內毒素休克的機理。實驗結果顯示，內毒素休克大鼠的海馬組織NOS活性較正常組明顯降低，并隨休克的發展呈持續下降趨勢。海馬神經元對缺血缺氧尤為敏感5，當

14、內毒素入血激活機體某些潛在的反應系統引起微循環障礙時，腦組織灌流不足，可導致海馬神經元的損傷；此外內毒素刺激機體產生細胞因子、氧自由基等，也可在一定程度上造成海馬神經元的損傷。這與我們在光鏡下觀察到的病理組海馬CA1區神經元明顯損傷、脫失、神經細胞及細胞間質水腫的結果是一致的。由于海馬神經元中有濃集的NOS，結合NOS活性及海馬神經元形態觀察結果，我們推測：NOS活性降低是由海馬組織被破壞、大量NOS神經元損傷、丟失引起的。NOS活性下降使NO的產生減少，因而血管收縮，血液灌流更加不足，海馬組織的損傷和腦細胞的破壞愈加嚴重。對海馬CA1區形態結構觀察結果顯示：病理組6h的損傷明顯重于1h。同時血液灌流障礙引起腦組織缺血缺氧，腦細胞能量代謝障礙，鈉泵功能減低，毛細血管通透性增高，導致腦水腫。病理組腦系數較正常組明顯升高，正反映了腦水腫的存在。提示：NOS活性下降促進了海馬損傷及腦水腫，進一步導致腦功能障礙，使休克惡化。由此推測：NOS活性降低在內毒素休克的發展過程中有重要意義。實驗還觀察到，治療組海馬組織NOS活性較病理組顯著增高，這反映出海馬組織結構得到保護、NOS神經元功能逐漸恢復，與光鏡下對海馬CA1區的形態學觀察結果相吻合。可見心脈靈注射液有良好的保護腦組織、增強海馬組織NOS活性的作用。作者簡介：