1、p53和VEGF在前列腺癌組織中的表達及臨床意義 作者：閻洪濤龔百生董丹丹楊紅陳照祥【摘要】 目的 研究p53和血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)在同一前列腺癌(prostate cancer, Pca)組織中的表達及與Pca臨床參數的關系，探討腫瘤血管形成及調節機制。方法 應用免疫組織化學LDP法檢測46例Pca組織及20例良性前列腺增生癥(benign prostatic hyperplasia, BPH)組織中p53蛋白及VEGF的表達。結果 Pca組織中p53與VEGF陽性表達率分別為41.30%(19/46)和71.7

2、4%(33/46)，均明顯高于BPH組(P<0.05)；p53與VEGF表達呈明顯正相關(P<0.05)；二者在Pca組織中的表達水平與其病理分級和臨床分期均呈正相關(P<0.05)；p53和VEGF陽性表達的腫瘤復發迅速、易轉移，p53陰性而VEGF陽性表達較陰性表達者預后差。結論 p53和VEGF與Pca組織學分級惡性程度和預后密切相關，是檢測Pca的較好分子標志物；Pca是典型的血管依賴性病變，p53可能通過p53VEGF調節旁路途徑促進Pca的腫瘤血管形成，聯合檢測p53和VEGF的表達可作為判斷Pca生物學行為及預后的重要指標。 【關鍵詞】

3、前列腺癌p53基因血管內皮生長因子免疫組織化學The expression of p53 and VEGF in human prostatic carcinoma and their clinical significancesABSTRACT: Objective To study the expression of p53 and vascular endothelial growth factor (VEGF) in human prostatic carcinoma tissue and their relationship with the clinicopathological

4、parameters, and to understand the role of p53 and VEGF in the progression of tumors. Methods The expression of p53 and VEGF in 46 cases of prostatic carcinoma and 20 cases of BPH were determined by immunohistochemical LDP methods. Results The positive expression rates of p53 and VEGF in 46 cases of

5、Pca were 41.30% and 71.74%, respectively. The expression levels of p53 and VEGF in prostatic carcinoma were much higher than those in BPH (P<0.05); the positive correlation was noted between p53 expression and VEGF expression (P<0.05); and both of them were significantly related to the

6、 tumor pathologic grades (P<0.05) and tumor clinical stage (P<0.05). Tumors with high levels of p53 that were VEGF positive recurred earlier and had a greater risk of stage progression than those with low levels of p53 and VEGF negative. The high levels of VEGF also indicated the poore

7、st prognosis in p53 negative tumors than those with low levels of VEGF. Conclusion This study indicates that p53 and VEGF are closely related to the histopathological grading, the tumor differentiation and prognosis of Pca. p53 and VEGF are good molecular markers of Pca. The pathological changes in

8、the tumor are typically vessel dependent, and vascularization is favourable to tumor growth, infiltration and recurrence. Mutanttype p53 protein accumulation may be associated with tumor angiogenesis through the way of VEGF upregulation. The combined detection of p53 and VEGF may serve as an importa

9、nt index to estimate the biological behavior and prognosis of Pca.KEY WORDS: prostatic carcinoma; p53 gene; vascular endothelial growth factor; immunohistochemistry前列腺腺癌(prostate cancer, Pca)是老年男性常見的惡性腫瘤之一，血管形成是腫瘤生長和轉移的基礎1。腫瘤血管生長的調控是一個復雜的機制，其中，血管內皮細胞生長因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)是目前公

10、認為刺激腫瘤血管生長的最主要的因子。而VEGF的表達又受多種因素調節。p53基因是一種腫瘤抑制基因，近年來有學者報道，突變型p53基因通過調節腫瘤組織VEGF的表達水平，具有促進腫瘤血管形成的作用2。說明突變型p53與VEGF的表達密切相關。有關Pca中p53與VEGF表達的相關性的研究國內外報道較少。為此，我們采用免疫組織化學標記菌葡萄聚糖聚合物法(labeled dextran polymer method, LDP法)檢測了Pca組織中p53與VEGF的表達情況，并對它們表達的關系及臨床意義作了初步探討。1 資料與方法1.1 臨床資料 選自我院泌尿外科1997年1月至2005年1月間經病

11、理證實的46例Pca患者作為研究對象，年齡51-83歲，中位年齡69歲。按WHO病理學分級標準，G1級6例，G2級14例，G3級26例；按國際TNM臨床分期標準(UICC，1997年)將46例Pca分為二組：T1-T2期15例，T3-T4期31例。另取20例良性前列腺增生癥(benign prostatic hyperplasia, BPH)作為對照，所有組織均為同期手術標本(包括經尿道電切的前列腺組織塊、前列腺摘除標本、前列腺癌根治術及前列腺穿刺活檢的標本)，所有患者術前均未接受放療和化療。標本經10%(體積分數)甲醛溶液固定，常規石蠟包埋，制成4m厚切片備染。2005年12月終止隨訪，隨訪

12、時間12-96個月，平均(46±4.2)個月。1.2 試劑與方法 實驗用鼠抗人p53單克隆抗體(工作濃度1100)單抗VEGF(工作濃度1100)及EnvisionTM試劑盒均為DAKO公司產品。采用免疫組織化學LDP法進行檢測，染色步驟按試劑盒說明分別進行，分別選用已知陽性組織切片作陽性對照，用PBS液分別代替一抗作陰性對照。1.3 結果判定 p53表達的判定：p53蛋白陽性著色細胞表現為細胞核顯棕黃色，切片中陽性細胞率10%者為p53染色陽性，<10%為陰性。VEGF表達的判定：腫瘤細胞胞漿出現棕黃色顆粒即為VEGF陽性染色。我們以兩方面評分：陽性染色深度(未著色0

13、分，輕度著色1分，中度著色2分，重度著色3分)和陽性細胞百分比(無陽性細胞0分，陽性細胞<25%為1分，25%-50%為2分，>50%為3分)，這兩方面相加，得分0-2分者為陰性表達，3-6分者為陽性表達。1.4 統計學處理 組間比較采用2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。2 結果2.1 p53、VEGF在Pca組織及BPH組織中的表達(表1) p53在Pca與BPH組織中表達存在統計學差異(P<0.05，圖1、圖3-4)；VEGF在二組中表達亦具有顯著性差異(P<0.01，圖2、圖5-6)。圖1 前列腺增生癥(BPH)

14、，p53呈陰性表達 LDP法×200（略）圖2 前列腺增生癥(BPH)，VEGF呈陰性表達 LDP法×200（略）圖3 前列腺癌，p53呈陽性表達()(箭頭指示處) LDP法×200（略）圖4 前列腺癌，p53呈陰性表達 LDP法×200（略）圖5 前列腺癌,VEGF呈陰性表達 LDP法×200（略）圖6 前列腺癌，VEGF呈陽性表達()(箭頭指示處) LDP法×200（略）2.2 p53、VEGF的表達與Pca臨床病理學特點的相關性(表2) p53的表達在臨床分期T3-T4期組和T1-T2期組之間差異顯著(P<0.01

15、)。在G1、G2、G3級癌組織中，各組間p53蛋白的表達比較無統計學意義(P>0.05)，但G1+G2組與G3組比較差異有統計學意義(P<0.05)。提示分化程度越低，p53蛋白陽性表達率越高。表1 p53、VEGF在Pca與BPH組織中的表達（略）與BPH組織比較*P<0.05,*P<0.01表2 Pca癌組織中p53、VEGF的表達與Pca臨床病理特點的相關性（略）VEGF的表達與Pca病情發展及腫瘤細胞的分化程度關系密切，VEGF的陽性表達率隨組織學分級增高呈升高趨勢。G1與G2比較無統計學意義(P>0.05)，G1與

16、G3G1+G2與G3比較，差異均有統計學意義(P<0.05)。高分期組(T3-T4期)VEGF表達明顯高于低分期組(T1-T2期)，差異有統計學意義(P<0.05)。表明Pca組織中VEGF的表達水平與Pca的病理分級和臨床分期均呈正相關。2.3 Pca組織中p53表達與VEGF表達的關系(表3) 連續切片對比分析發現，在VEGF表達較高的區域，p53表達亦較強，兩者在Pca中表達一致的符合率達60.9%，相關分析顯示，兩者表達具有相關性(P<0.05)。 本研究結果還發現，p53表達陽性的19例Pca組織中VEGF的陽性表達率為89.5%(17/19

17、)，p53表達陰性的27例Pca組織中VEGF的陽性表達率為59.3%(16/27)，前者明顯高于后者，其差異有統計學意義(P<0.05)。表3 p53與VEGF表達的關系（略）對有完整隨訪資料的患者研究表明，p53與VEGF陽性表達患者的術后生存期明顯低于p53、VEGF陰性表達者。 3 討論3.1 p53基因在Pca中表達的意義 p53基因是迄今發現與人類腫瘤相關性最高的基因。本研究結果表明，p53蛋白陽性表達率為41.3%，提示Pca腫瘤組織中有p53蛋白存積(還可能與本組所選擇病例大多為中晚期患者有關)。并且發現p53蛋白陽性表達隨細胞分化惡化程度呈遞增趨勢，與病理分級密

18、切相關，p53蛋白積累量隨著Pca惡性程度的增大而逐漸增多。突變的p53的過度表達不僅揭示了Pca發生與發展的可能機制，而且與Pca細胞惡化有直接關系，更可能是腫瘤發生的晚期事件，同時，也提示p53基因表達可作為前列腺良惡性疾病鑒別的一種方法3。隨訪發現：治療前，腫瘤分化越差，p53蛋白陽性率越高，對治療的有效性越差，復發的可能性就越大，預后差。反之，則治療有效性好，預后好。我們認為，p53蛋白的過度表達是Pca高度惡性和預后不良的重要指標之一4。而且p53蛋白還可能作為一個開關蛋白，上調VEGF的表達，促進腫瘤新生血管生成。3.2 VEGF在Pca中表達的意義 VEGF是目前已知的一簇最強的

19、促血管形成物質，在許多惡性腫瘤組織中高表達。它可以通過與血管內皮細胞膜上的受體結合而發揮其內皮相關功能，促進內皮細胞的分裂、游走和增殖，誘導宿主毛細血管新生并長入腫瘤組織，是腫瘤新生血管形成的決定因素之一5。而腫瘤組織中VEGF的高表達又可能為其繼續生長和轉移提供必要的內在條件。腫瘤自腫瘤血管從宿主獲得營養，并通過不成熟的腫瘤血管向宿主輸出大量惡性細胞，導致腫瘤不斷生長和轉移。由此可見，VEGF在腫瘤血管生長和調節腫瘤細胞增殖過程中起著十分關鍵的作用。 本組研究結果顯示：VEGF在Pca組中表達強度明顯大于BPH組(P<0.01)，這與VEGF能特異性的刺激血管內皮細胞增殖，并通

20、過增加血管通透性和刺激新生血管的形成促使腫瘤生長有關6。從本組的研究結果中發現，VEGF在Pca中的陽性表達率為71.7%，G1、G2、G3級Pca的陽性表達率分別為16.7%、50.0%、96.2%，G1與G3級之間，G1+G2級與G3級之間比較差異均有統計學意義。顯示VEGF的陽性表達率及表達強度隨著Pca組織學分級的增高而增加，說明VEGF的表達與Pca的分化程度密切相關。在臨床分期T3-T4期Pca組織中VEGF的表達明顯高于T1-T2期Pca組織，即VEGF的表達程度也隨著Pca臨床分期的增高而增加(P<0.05)，說明VEGF與Pca的侵襲能力有關。以上結果表明：VE

21、GF的表達與腫瘤的組織學分級臨床病理分期及預后有明顯的相關性，在腫瘤的生長侵襲轉移過程中起著相當重要的作用，提示VEGF表達的檢測可作為Pca病期進度評估的一項重要指標。3.3 p53與VEGF表達的相關性及臨床意義 有研究報道p53基因對VEGF、血小板反應素1(TSP1)等血管生成調節因子的表達有調控作用2，78，本研究也發現p53的表達與VEGF表達呈顯著正相關。研究表明，p53基因在VEGF介導的腫瘤血管形成方面起重要作用。Giatromanolaki等9發現，野生型p53參與下調內源性VEGF mRNA水平及VEGF啟動子的活性，而且VEGF的表達有賴于野生型p53基因的丟失。Bou

22、vet等10在對轉染細胞模型進行VEGF誘導血管形成研究時，發現1條p53調節VEGF通路，突變型p53可上調VEGF的表達，從而促進腫瘤新生血管的形成。本研究中，p53表達陽性的Pca組織中VEGF的陽性表達率為89.5%，明顯高于p53陰性的Pca組織(P<0.05)，且p53和VEGF表達一致的符合率達60.9%，相關分析顯示二者表達具有顯著正相關(P<0.05)。表明p53突變可能作為一個開關蛋白，上調VEGF的表達，促進其合成，并進一步促進腫瘤的微血管形成。 本研究還發現，Pca中p53和VEGF同時陽性表達多發生在分化差和晚期腫瘤中，且對有完整隨訪資料病

23、例的研究發現，p53和VEGF陽性或同時表達陽性的患者，術后復發迅速，病程進展快，易發生遠處轉移，術后生存期明顯低于p53和VEGF陰性表達者。p53陰性而VEGF陽性表達者較陰性表達者預后差，提示在p53陰性表達時VEGF陽性表達可作為判斷Pca早期復發轉移及預后的一個有效指標。而突變型p53蛋白與VEGF均可能參與了腫瘤血管形成的調控，即在促進腫瘤新生血管形成的機制中存在協同作用4。 關于p53基因對腫瘤血管形成的調控機制，目前有學者認為突變型p53蛋白可通過減少凝血栓蛋白(Thrombospontin, TSP1)或增強蛋白激酶C的活性使VEGF的表達量增加等來促進腫瘤新生血管的形成11

24、。 本研究提示p53蛋白的表達水平和VEGF的表達呈正相關(P<0.05)，結合文獻報道，我們推測，p53蛋白是VEGF表達的重要調控因子之一，但VEGF的表達同時還存在其他調控方式。【參考文獻】 1Bernardini S, Fauconnet S, Chabannes E, et al. Serum levels of vascular endothelial growth factor as a prognosis factor in bladder cancer J. J Urol, 2001,166(4):12751279.2Linderholm BK, Lindahl

25、 T, Holmberg L, et al. The expression of vascular endothelial growth factor correlates with mutant p53 and poor prognosis in humam breast cancer J. Cancer Res, 2001, 61(5):22562260.3閻洪濤，龔百生，廖勇, 等. 前列腺癌p53和PCNA表達的相關性研究 J. 四川醫學，2005, 26(4):429430.4閻洪濤，龔百生，廖勇, 等.膀胱移行細胞癌組織中p53和血管內皮生長因子表達的關系及臨床意義 J. 中華泌尿

26、外科雜志，2005, 27(3):178180.5Ferrara N, Chen H, DavisSmyth T, et al. Vascular endothelial growth factor is essential for corpus luteum angiogenesis J. Nature Med, 1998, 4(3):336340.6Krupski T, Harding MA, Herce ME, et al. The role of vascular endothelial growth factor in the tissue specific in vivo growth of prostate cancer cells J. GrowthFactor, 2001,18(14):287302.7Linderholm B,Lindh B, Tavelin B, et al. p53 and vascularendothelialgrowth factor (VEGF) exp