1、E-cad在中樞神經系統白血病患者骨髓中的表達及意義作者：趙文海 韓樹海 馬琳娜 韓春平 周培清 胡龍虎【摘要】 目的探討急性白血病(AL)患者骨髓血單個核細胞表面上皮型鈣黏蛋白(E-cad)的表達及其在中樞神經系統白血病(CNSL)的發生、發展、浸潤、復發、預后和療效判定中的臨床意義。方法應用流式細胞術(FACS)檢測骨髓血單個核細胞表面E-cad的表達。結果AL組骨髓血單個核細胞(BM-MNC)表面E-cad的表達(%)顯著低于對照組(P<0.01)，非CNSL組又顯著高于CNSL組(P<0.01);AL組治療后顯著高于治療前(P<0.01);非高

2、白細胞血癥組顯著高于高白細胞血癥組(P<0.01)。結論AL患者骨髓血單個核細胞表面E-cad的表達與CNSL發生密切相關，E-cad表達的動態變化是反映AL患者病情及治療效果的重要指標，可作為AL髓外浸潤尤其是CNSL的診斷、鑒別診斷、用藥監督和篩選、判定復發、療效和預后的監測指標之一。 【關鍵詞】 急性白血病;上皮型鈣黏蛋白;高白細胞血癥;中樞神經系統白血病;流式細胞術大多數學者認為上皮型鈣黏蛋白(E-cad)的表達下調與腫瘤的發生、發展及轉移關系密切，是導致腫瘤細胞浸潤、轉移的重要因素14。E-cad被認為是一種重要的抑癌因子，但在血液腫瘤中研究甚少。本文旨在探討E-cad

3、在中樞系統白血病(CNSL)發生、發展、診斷、治療、預后判定的價值和臨床意義。1材料與方法1.1病例選擇與分組實驗組選擇2008年3月至2009年10月在本院血液內科住院的急性白血病(AL)患者45例(男19例，女26例)，年齡565歲;急性髓系白血病(AML) 30例，其中M3型20例、M2型6例、M4型3例、M5型1例，急性淋巴細胞白血病(ALL)15例，其中L2型8例、L1型6例、L3型1例;伴CNSL組17例，未伴CNSL 28例;高白細胞血癥組24例，非高白細胞血癥組21例;治療前30例，治療后15例。對照組取自血液科非白血病的住院病人20例(男8例，女12例)，年齡1255歲，其中

4、血小板減少性紫癜8例、缺鐵性貧血6例、營養不良性貧血2例、發熱4例。1.2方法1.2.1材料分別于初診時、用藥前、用藥后、部分緩解時、完全緩解時、出現CNSL臨床癥狀時、復發后采集骨髓，EDTA抗凝備用。鼠抗人IgG2B單克隆抗體及其同型對照抗體由美國RD Systems Inc公司生產，購自北京尚柏生物制品有限公司。1.2.2步驟取EDTA抗凝骨髓血35 ml，加入等量Ficoll分離液，離心，分離出單個核細胞，計算出原始、幼稚細胞百分率均大于70%。以PBS 調整細胞濃度為4×106/ml，取細胞懸液25 l(包含細胞數為1×105)分別加入PE標記的E-cad單抗10

5、 l及其同型對照抗體10 l，28避光孵育3045 min，PBS液洗滌2次后上流式細胞儀檢測(或加入0.81.0 ml多聚甲醛溶液4保存，34 d內上機檢測)。以FSC、SSC設門于幼稚細胞群，每例檢測104個細胞，分析細胞表面的MFI，計算E-cad的檢測值。1.3統計學處理采用SPSS14.0統計軟件進行分析，兩組樣本均數比較采用獨立樣本t檢驗，多組樣本均數兩兩比較采用單向方差分析，滿足方差齊性要求時應用最小顯著差值法。2結果2.1AL組與對照組E-cad表達比較AL組骨髓血單個核細胞表面E-cad的表達顯著低于對照組(33.405±14.559)% vs (14.558

6、77;13.717)%，P<0.01。2.2CNSL組、非CNSL組與對照組E-cad表達比較CNSL組骨髓血單個核細胞表面E-cad的表達顯著低于非CNSL組和對照組(6.589±8.959)%、(19.396±13.958)% vs(33.405±14.559)%，P<0.01;進一步兩兩比較， CNSL組、非CNSL組、對照組之間差異顯著(均P<0.01)。2.3AL組治療前、治療后與對照組E-cad表達比較AL組治療前骨髓血單個核細胞表面E-cad的表達顯著低于治療后組和對照組(4.631±4.481)%

7、、(30.600±8.565)% vs(33.405±14.559)%，P<0.01;進一步兩兩比較，骨髓血單個核細胞表面E-cad的表達治療前低于治療后，治療后低于對照組(P<0.01)。2.4高白細胞血癥組、非高白細胞血癥組與對照組E-cad表達比較高白細胞血癥組骨髓血單個核細胞表面E-cad的表達明顯低于非高白細胞血癥組(P<0.01)，高白細胞血癥組和非高白細胞血癥組骨髓單個核細胞表面E-cad的表達低于對照組(4.693±6.640)%、(25.338±11.092)% vs(33.405±1

8、4.559)%，均P<0.01。3討論E-cad基因的缺失可導致造血細胞與基質細胞或造血細胞與細胞外基質間黏附的破壞，影響細胞間的相互作用、造血細胞間的分化5、發育、成熟及釋放入血機制，使得白血病患者不成熟細胞釋放入血，表明其黏附機制遭到破壞，造血微環境發生改變。Acs等6研究顯示紅白血病患者均無E-cad的表達，而健康自愿者的紅系造血祖細胞E-cad的表達卻強陽性，這說明E-cad在從原始紅細胞發育成為成熟紅細胞的過程中和紅白血病發生、發展、浸潤過程中扮演了重要角色。Paul等7應用巢式PCR檢測了白血病患者和白血病細胞株E-cad5CPG島甲基化狀況，結果發現白血病細胞株(K

9、G1A，U937，HL-60，A301)100%發生了甲基化，AML 53%、 ALL 32%發生甲基化。證明E-cad甲基化在白血病中可能常見，E-cad的下調可能參與了白血病的發生和發展過程。Chim等8研究提示E-cad基因下調是通過甲基化來實現的，P15甲基化的結果可用于白血病的預后判定。Corn等9，10應用RT-PCR方法也證明了白血病細胞株E-cad 100%發生甲基化，從而得出了相同的結論。由此證明了E-cad 5CPG島甲基化是E-cad表達減少的重要原因，而E-cad的表達下調是導致AL發生和發展的重要分子病理學機制之一，說明E-cad可以抑制白血病細胞的生長、浸潤和轉移，

10、是一種新型的抑癌因子，與本文的檢測結果一致。目前，對于AL患者骨髓血中單個核細胞表面E-cad表達的下調與CNSL及高白細胞血癥發生關系的研究尚未見報道。E-cad蛋白表達下調導致白血病細胞之間、細胞與基質之間黏附能力降低，從而使白血病細胞獲得了從骨髓中遷移出去的動力，白血病細胞釋放到外周血中，進一步發生發展，導致高白細胞血癥的發生和白血病細胞的髓外浸潤，導致CNSL發生。本研究表明，E-cad蛋白表達下調可能是導致高白細胞血癥發生的重要分子病理學機制之一。高白細胞血癥可使血液淤滯且白血病細胞具有浸潤性，可浸潤人體主要臟器，是導致顱內出血和死亡的高危因素11。CNSL的發生也是導致AL患者預后

11、不良和早期復發、死亡的重要原因之一。BM-MNC表面E-cad的表達與血液中sE-cad的表達是密切相關的，二者呈反比。進一步說明由于BM-MNC表面E-cad的脫落、進入血循環后即降解為sE-cad而使細胞間黏附機制的破壞導致CNSL的發生，二者都可能作為CNSL診斷、判斷預后的關鍵指標。本實驗初步揭示了E-cad作為一種重要黏附分子和新型的抑癌因子與高白細胞血癥及CNSL的發生、發展關系密切，骨髓血中單個核細胞表面E-cad的表達能否作為CNSL早期診斷、鑒別診斷、判斷浸潤、轉移、復發、預后和療效觀察、臨床用藥的篩選指標尚需更多的病例和臨床觀察。能否找到一種有效藥物使E-cad脫甲基化使E

12、-cad的上調，防止白血病細胞的進一步浸潤、轉移，從而改善白血病的預后,有待于進一步的研究和探討。【參考文獻】 1孫淑明，盧曉峰，吳麗娥，等.E-鈣黏蛋白在胃癌浸潤、轉移中的作用J.汕頭大學醫學院學報，2008;21(3)：146-8.2Uchikado Y，Natsugoe S，Okunura H,et al.Slug expression in the E-cad preserved tumors is related to prognosis in patients with esophageal squamous cell carcinomaJ.CLin Cancer Res，2005

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