1、涼血散淤抗腫瘤研究進展    【摘要】  近年來的一些實驗研究表明，涼血散淤方藥如桃核承氣湯、抵當湯及丹參、丹皮、赤芍、大黃等具有顯著的抗腫瘤作用。其作用機制包括抑制腫瘤細胞增殖、誘導腫瘤細胞凋亡、誘導腫瘤細胞分化、抑制腫瘤細胞轉移以及提高機體免疫力等。 【關鍵詞】  涼血散淤 抗腫瘤 綜述    “淤熱”作為一種新的致病因素越來越受到中醫界的重視。我們通過查閱大量的古今文獻資料，結合多年的臨床實踐，提出淤熱互結是惡性腫瘤的一個重要病機，涼血散淤是腫瘤治療的又一項重要法則。大量的實驗研究也表明具有涼血散淤

2、作用的方藥如桃核承氣湯、抵當湯及中藥丹參、丹皮、赤芍、大黃等具有顯著的抗腫瘤作用。論文論文參考網現就其抗腫瘤作用及作用機制總結如下。1  抑制腫瘤細胞增殖腫瘤細胞的一個重要特點是具有持續的增殖能力，抑制其增殖是抗腫瘤的一個重要靶點。多個實驗證實涼血散淤方藥能使腫瘤細胞的倍增時間延長，倍增倍數減少，G0/G1期細胞增多，S期細胞減少。計春燕等1用不同濃度的丹皮提取物丹皮酚和5-FU，MMC，DDP處理人大腸癌細胞株HT-29。結果發現，丹皮酚在7.81250 mg/L濃度范圍內對HT-29細胞的增殖均有抑制作用，藥物濃度越高，作用時間越長，其抑制作用越強。細胞形態觀察顯示丹皮酚組細胞增

3、殖緩慢，隨著藥物濃度的增大及作用時間延長，細胞逐漸變小、折光率減弱，部分脫落漂浮于培養瓶中。而且低濃度的丹皮酚與上述化療藥物合用，可使化療藥物對細胞增殖的抑制作用增強。袁淑蘭等2在體外用丹參酮處理多種腫瘤細胞人早幼粒白血病(NB4)、維甲酸耐藥的 NB4(MR2)、紅白血病(K562)、腫瘤細胞系肝癌(SMMC-7721)、鼻咽癌(CNE-1)、肺腺癌(SPC-A-1)后，經丹參酮A 處理后的腫瘤細胞生長和增殖受到明顯的抑制，且隨丹參酮A 作用時間的延長，細胞生長抑制越明顯。集落形成試驗結果顯示，經丹參酮A 處理過的腫瘤細胞集落形成明顯被抑制，對 NB4和 MR2 的集落形成抑制率接近和達到

4、100%，而對鱗癌細胞的集落形成抑制率較低。通過流式細胞儀分析，經過丹參酮A處理后的細胞被阻止于G0/G1期，而S期細胞數明顯減少，凋亡細胞明顯增加，細胞增殖指數降低。李家寧等3用不同濃度的大黃素處理人肺腺癌細胞株Anip973，觀察對其增殖的影響，結果顯示在一定范圍內，大黃素的劑量越大、作用時間越長，對腫瘤細胞生長的抑制作用越強。在大黃素作用下，DNA 合成前期Anip973細胞比例增加，DNA 合成期比例減少。本實驗提示大黃素可明顯抑制人肺腺癌Anip973細胞的增殖，其可能的機制之一是通過抑制細胞 DNA 合成，延遲細胞周期的進程，進而抑制了細胞的增殖。2  誘導腫瘤細胞凋亡細

5、胞凋亡是機體生長發育、細胞分化和病理狀態中細胞自主性死亡的過程，是機體保持自穩態的一種重要的方式。對于腫瘤組織而言，不同的凋亡指數，即凋亡細胞占細胞總數的百分比，在一定程度上與其對化療的敏感性、腫瘤分化程度、分級、發展及腫瘤的生物學行為有關。誘導腫瘤細胞發生凋亡是目前進行腫瘤控制與治療的可行方法之一，也是篩選抗癌藥物的指標之一。劉劍波等4應用MTT、軟瓊脂克隆形成、DNAladder凝膠電泳及流式細胞術等方法，研究了中藥單體大黃素對肝癌細胞HepG2生長增殖的影響以及作用機理。結果顯示大黃素在較低濃度即可抑制腫瘤細胞的生長，在軟瓊脂實驗中，大黃素可以濃度依賴的方式抑制細胞克隆的形成。經 DNA

6、 ladder及流式細胞儀檢測發現，大黃素能誘導HepG2細胞凋亡，與陰性對照相比，隨著藥物濃度從10g/ml增加到20g/ml，AnnexinV染色細胞顯著增多，由27.3% 增至 59.6%；當藥物濃度增至 40g/ml時，培養液中幾乎無活細胞，由碘化丙啶和 AnnexinV雙重標記的凋亡后期以繼發性壞死細胞為主。提示中藥單體大黃素在體外能抑制肝癌細胞HepG2的生長增殖，并能誘導該細胞凋亡。何金濤等5將體外培養的肺癌SPC-A-1細胞經無毒劑量的丹參酮A(0.5 mg/L)處理5 d，光鏡、電鏡觀察細胞凋亡情況，流式細胞儀檢測凋亡指數及凋亡相關基因的蛋白表達，并以全反式維甲酸及順鉑作為對

7、照。結果顯示SPC-A-1細胞經丹參酮A處理后，電鏡觀察可見多量凋亡細胞。流式細胞儀檢測丹參酮組凋亡指數顯著高于順鉑組，而與維甲酸組比較無顯著差異。丹參酮組促凋亡基因p53，Fas，Bax表達水平明顯升高，而凋亡抑制基因Bcl-2的表達水平則顯著降低。提示丹參酮A具有誘導肺癌SPC-A-1細胞凋亡的作用，其分子機理可能是上調p53、Bax、Fas及下調Bcl-2的表達。許惠玉等6用赤芍總苷作用于荷S180肉瘤小鼠，觀測細胞調亡、Bcl-2蛋白及c-myc mRNA的表達。實驗結果顯示，赤芍總苷可以促進荷瘤小鼠體內腫瘤細胞發生凋亡，凋亡峰提前出現，峰值增高，且誘導細胞凋亡作用于細胞周期G1期和S

8、期。實驗組Bcl-2蛋白和c-myc mRNA表達水平降低，說明赤芍總苷誘導調亡的機制可能與下調Bcl-2和c-myc mRNA表達水平密切相關。3  誘導腫瘤細胞分化誘導分化治療不殺傷腫瘤細胞，而是通過藥物誘導腫瘤細胞向正常細胞轉化，同時對正常細胞無殺傷作用，且少有骨髓抑制等副作用。故誘導分化是目前腫瘤治療的新途徑。梁勇等7研究了丹參酮A對初治、復發及耐藥人急性早幼粒細胞白血病細胞體外誘導分化作用。將11例APL患者（初治5例、復發3例、對ARTA耐藥3例）白血病細胞分別與0.5g/ml（初治、復發病例）或1.0g/ml（對ARTA耐藥病例）丹參酮A一起原代培養。結果顯示，丹參酮A

9、處理了7 d的APL細胞，其形態及功能都趨向成熟和正常，表現為較高的誘導分化率及NBT還原能力。同時粒細胞表面抗原CD33表達下降，CD11b表達升高，統計學分析顯示丹參酮A對初治、復發APL原代細胞誘導分化能力與ATRA相當。由此說明，丹參酮A不僅對初治、復發病例在體外具有與ATRA相當的誘導原代APL細胞向終末細胞分化的作用，而且對ATRA繼發耐藥的病例亦具有良好的誘導分化能力。論文參考網4  抑制腫瘤細胞的轉移轉移是惡性腫瘤的一個重要標志，也是癌癥病人死亡的重要原因，因此，抑制腫瘤細胞的轉移也是抗腫瘤的一個重要方面。曹科等8采用小鼠結腸癌細胞脾移植肝轉移模型，造模的同時開始給藥

10、，給藥組給予活血化淤經典方抵當湯煎液灌胃，連續3周。并以模型組、空白組給予生理鹽水灌胃作為對照，觀察抵當湯對小鼠肝臟重量、肝轉移灶數目、抑瘤率及對酪氨酸激酶受體信號轉導系統EGFR的影響。結果顯示，模型組小鼠肝臟重量增加，肝轉移灶數目明顯增多，酪氨酸激酶受體信號轉導系統EGFR高度表達，抵當湯能夠減輕實驗小鼠肝臟重量，減少肝轉移灶數目，使酪氨酸激酶受體信號轉導系統EGFR低表達。提示抵當湯對小鼠腫瘤轉移有一定的抑制作用。研究表明，腫瘤轉移過程中，腫瘤細胞要與各種宿主細胞(內皮細胞、血小板和淋巴細胞等)或(和)細胞外基質、基底膜成分發生相互粘附，這一過程增加了腫瘤細胞生存、俘獲和侵襲的能力，是轉

11、移發生的重要因素之一，因此抗粘附治療是抗轉移的一個新方向。孫婧等9研究了丹參對SMMC-7721肝癌細胞株(7721細胞)侵襲粘附能力和對裸鼠人肝癌切除術后轉移復發的影響。結果顯示丹參可抑制7721細胞的侵襲能力，促進已粘附細胞的脫落，可抑制7721與7721細胞、淋巴細胞、內皮細胞的粘附。早期切除丹參組肝內轉移灶數目和轉移灶累及的肝葉數均少于對照組。晚期切除丹參組肝內轉移灶數目減少，與對照比較并無明顯統計學差異，但轉移累及肝葉數明顯少于對照組。實驗結果表明，丹參可通過抑制腫瘤細胞的侵襲粘附能力，降低裸鼠人肝癌切除術后的轉移復發。5  提高機體免疫功能現代醫學認為機體的免疫功能與腫瘤

12、的發生和發展密切相關，當宿主免疫功能低下或受抑制時，腫瘤發病率升高，而在腫瘤進行性生長時，腫瘤患者的免疫功能也受到抑制。大量的研究表明活血化液的抗腫瘤作用與其調節機體免疫功能也有密切的關系。吳焱森等10以肉瘤S180腫瘤細胞株接種昆明小鼠制成荷瘤模型，觀察中藥抵當湯對荷瘤小鼠外周血白細胞數、免疫器官重量以及血清溶血素的影響，結果顯示抵當湯能明顯升高肉瘤S180小鼠的白細胞數，增加胸腺、脾的重量以及顯著提高血清溶血素，表明抵當湯能通過提高機體的免疫力發揮抗腫瘤作用。許洪霞等11給荷S180肉瘤小鼠灌服桃核承氣湯8d，發現桃核承氣湯可使小鼠的瘤重減輕，T淋巴細胞增殖能力及NK細胞活性增強。與化療藥

13、物環磷酰胺合用，可使環磷酰胺的抑瘤率增強并可拮抗環磷酰胺的抑制免疫作用。李坤珍等12的研究發現牡丹皮能刺激大量的B細胞活化、增殖，使脾臟基質細胞大量增生，使免疫器官重量增加，增強巨噬細胞分泌IL-1，IL-2和TNF等細胞因子的活性和NK細胞的細胞毒作用。于曉紅等13的研究顯示赤芍總苷能促進CD8分子的表達，恢復CD4+/CD8+平衡。華東等14的研究還顯示赤芍總苷能提高IL-2，TNF-的分泌，糾正荷瘤機體的Th1/Th2漂移現象，維持Th1的優勢狀態，同時對降低了的IL-4也有上調作用。綜上所述，大量的體內外研究表明涼血散淤方藥具有顯著的抗腫瘤作用，其作用機制復雜，包括抑制腫瘤細胞增殖、誘

14、導腫瘤細胞凋亡、促進腫瘤細胞分化、抑制腫瘤細胞轉移以及提高機體免疫力等多個方面。上述的研究成果反證了惡性腫瘤“淤熱”病機的客觀實在性，為臨床上涼血散淤治則的提出及方藥的應用提供了有力的依據?！緟⒖嘉墨I】  1計春燕,譚詩云,劉長青丹皮酚抑制人大腸癌細胞增殖及其與化療藥物的協同作用J.中國腫瘤臨床,2005,32（9）:513.2袁淑蘭,宋 毅,王修杰,等.丹參酮A抑制多種腫瘤細胞生長的體外實驗研究J.華西藥學雜志,2003,18(5):327.3李家寧,呂福禎,肖金玲,等 .大黃素抑制肺癌Anip973細胞增殖作用的量效關系J.中國臨床康復，2005,9(18):140.4劉劍波,高

15、學崗,連 濤,等.大黃素在體外誘導人肝癌細胞發生調亡的初步研究J.癌癥,2003,22(12):1280.5何金濤,周清華,袁淑蘭,等.丹參酮誘導人肺癌細胞凋亡及其分子機理J.中國肺癌雜志,2002,5(4):257.6許惠玉,汪廣蔭,陳志偉.赤芍總甙對Bcl-2、c-myc基因表達影響及誘導細胞凋亡機制研究J.中國免疫學雜志,2005,21:778.7梁 勇,井麗萍,王 ?B,等.丹參酮對初治、復發及耐藥人急性早幼粒細胞白血病細胞體外誘導分化作用J.中華血液學雜志,2006,27（1）:62.8曹 科,潘艷芳,陳佩禪,等.抵當湯對小鼠腫瘤轉移及酪氨酸激酶受體信號傳導系統EGFR的影響J.中醫藥學刊,2004,22(11):2026.9孫 婧,周信達,劉銀坤.丹參對肝癌轉移復發防治作用的研究J.中國中西醫結合雜志,1999,19(5):292.10吳焱森,謝則平. 抵當湯對荷瘤小鼠免疫功能影響的實驗研究J.湖北省衛生職工醫學院學報，2001,14（2）;6.11許洪霞,王雅賢,許艷霞.桃核承氣湯對荷瘤小鼠影響的實驗