1、實驗一 普通光學(xué)顯微鏡的使用及其對微生物一般形態(tài)的觀察一、實驗?zāi)康?了解普通光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造及其各部分的作用。2掌握普通光學(xué)顯微鏡的正確使用和維護方法。3通過低倍鏡、高倍鏡觀察藻類、酵母培養(yǎng)液和新鮮活性污泥中微生物的一般形態(tài)。二、實驗原理普通光學(xué)顯微鏡由機械部分和光學(xué)部分組成。圖1-1 雙目生物顯微鏡1機械部分：（1）鏡筒：位于鏡臂上端的空心圓筒，是光線的通道。鏡筒的上端可插入目鏡，下面與轉(zhuǎn)換器相連。（2）轉(zhuǎn)換器：位于鏡筒下端，是一個可以旋轉(zhuǎn)的圓盤。有34個孔，用于安裝不同放大倍數(shù)的物鏡。（3）載物臺：載物臺是放置標本的方塊平臺，中央有透光孔，載物臺上面有玻片夾持器，側(cè)面有移動手輪，可縱向和橫

2、向移動標本。（4）調(diào)焦手輪：包括粗調(diào)手輪和微調(diào)手輪，可使載物臺上下升降，調(diào)節(jié)物鏡和標本之間的距離。2光學(xué)部分：（1）目鏡：放在鏡筒上，配有10倍（10）、16倍（16）兩種。（2）物鏡：裝在轉(zhuǎn)換器的孔上，有低倍鏡（4、10）、高倍鏡（40）和油鏡（100），是顯微鏡中最主要的部分。各種鏡頭上都刻有放大倍數(shù)和數(shù)值孔徑（）及所要求蓋玻片厚度等主要參數(shù)。物鏡的性能由數(shù)值孔徑?jīng)Q定，并且還依賴于物鏡的分辨率。（3）聚光器：由聚光鏡和孔徑光闌組成。聚光鏡的作用是把光線聚集在標本上，增強照明度。孔徑光闌是用來調(diào)節(jié)對比度的，使物鏡和聚光器的數(shù)值孔徑相符合。當孔徑光闌開啟到物鏡出瞳的7080%時，就可以得到足夠

3、對比度的良好圖象。如果開得太大，超過物鏡的數(shù)值孔徑，就會產(chǎn)生光斑；如果開得太小，則分辨率下降，降低物像的清晰度。（4）電光源：在顯微鏡的下部，提供觀察標本時所用光源。三、實驗器材1普通光學(xué)顯微鏡（雙目生物顯微鏡）2載玻片、蓋玻片若干3玻璃棒、滴管4濾紙、擦鏡紙5藻類、酵母培養(yǎng)液，新鮮活性污泥四、實驗方法低倍鏡的操作（）首先把目鏡放入鏡筒上，將物鏡（4、10、40、100）旋緊在轉(zhuǎn)換器上。（2）標本放在載物臺上，用玻片夾持器挾緊。并用移動手輪移動所要觀察的目的物到圓孔的正中央。（）打開電源開關(guān)，調(diào)整聚光器，使光路對準載物臺中央的光孔，光亮度要適宜。（）旋動轉(zhuǎn)換器，將10倍物鏡對準光孔。（5）用粗

4、調(diào)焦手輪使物鏡與標本距離至最小，同時要側(cè)臉觀察，以免壓壞標本玻片或損壞物鏡。（6）調(diào)節(jié)瞳距。（7）眼睛接近目鏡觀察，左（右）手用移動手輪輕輕移動玻片夾持器，右（左）手用粗調(diào)焦手輪將載物臺下移（向內(nèi)旋轉(zhuǎn)調(diào)焦手輪），如果見到目的物，但不是十分清楚，再用細調(diào)焦手輪調(diào)節(jié)，至目的物清晰為止。（8）如果粗調(diào)焦手輪旋得太快，超過焦點，必須從第（5）步重調(diào)，不要在正視目鏡的情況下調(diào)粗調(diào)手輪，防止沒有把握的旋轉(zhuǎn)使物鏡與載玻片相撞碰壞。注：觀察時兩眼同時睜開，雙眼不感覺疲勞。2高倍鏡的操作（1）使用高倍鏡前，先用低倍鏡觀察（操作方法同低倍鏡的操作）。（2）旋動轉(zhuǎn)換器，換用高倍鏡（40）觀察，如果高倍鏡觸及載玻片應(yīng)

5、立即停止旋動，說明原來低倍鏡觀察沒有調(diào)準焦距，目的物沒有找到，須用低倍鏡重新調(diào)節(jié)。如果調(diào)節(jié)正確，換用高倍鏡時基本可以看到目的物，如果模糊，用微調(diào)焦手輪稍微調(diào)節(jié)一下就清晰可見。3微生物形態(tài)觀察取一干凈的載玻片，用滴管或玻璃棒在培養(yǎng)液內(nèi)沾一滴菌液，用干凈的蓋玻片覆蓋在滴液上（注意不要有氣泡）即成標本片，用低倍鏡和高倍鏡觀察。記錄微生物的形態(tài)特征。四、實驗記錄及結(jié)果表1-1微生物的形態(tài)觀察記錄項 目放大倍數(shù) 低倍鏡觀察 高倍鏡觀察五、思考題1鏡檢標本時，為什么要先用低倍物鏡觀察？2畫一個細胞結(jié)構(gòu)的示意圖。實驗二 微生物的計數(shù)（酵母菌的顯微鏡直接計數(shù)）一、實驗?zāi)康?了解并掌握常用的血球計數(shù)板的構(gòu)造。2

6、學(xué)會一般的顯微鏡直接計數(shù)方法。二、實驗原理測定微生物數(shù)量方法很多，通常采用的有顯微鏡直接計數(shù)法和平板計數(shù)法。鏡檢計數(shù)法適用于各種含單細胞菌體的純培養(yǎng)懸浮液，如有雜菌或雜質(zhì)常不易分辨。菌體較大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球計數(shù)板；一般細菌則采用彼得羅夫霍澤（Petroff Hausser）細菌計數(shù)板。兩種計數(shù)板的原理和部件相同，只是細菌計數(shù)板較薄，可以使用油鏡觀察。而血球計數(shù)板較厚，不能使用油鏡，故細菌不易看清。血球計數(shù)板是一塊特制的厚載玻片，載玻片上有4條槽而構(gòu)成3個平臺。中間的平臺較寬，其中間又被一短橫槽分隔成兩半，每個半邊上面各有一個方格網(wǎng)（圖2-1）。每個方格網(wǎng)共分9大格，其中間的一大格（

7、稱為計數(shù)室）常被用作微生物的計數(shù)。計數(shù)室的刻度有兩種：一種是大方格分為16個中方格，而每個中方格又分成25個小方格；另一種是一個大方格分成25個中方格，而每個中方格又分成16個小方格。但是不管計數(shù)室是哪一種構(gòu)造，它們都有一個共同特點，即每個大方格都由400個小方格組成（圖2-2）。每個大方格邊長為1mm，則每一大方格的面積為1mm2，每個小方格的面積為1400mm2，蓋上蓋玻片后，蓋玻片與計數(shù)室底部之間的間隙為0.1mm，所以每個計數(shù)室（大方格）的體積為0.1mm3。使用血球計數(shù)板直接計數(shù)時，先要測定每個小方格（或中方格）中微生物的數(shù)量，再換算成每毫升菌液（或每克樣品）中微生物細胞的數(shù)量。 圖

8、2-1 血球計數(shù)扳的構(gòu)造a.平面圖（中間平臺分為兩半，各刻有一個方格網(wǎng))） 圖2-2 血球計數(shù)板計數(shù)網(wǎng)的分區(qū)和分格b.側(cè)面圖（中間平臺與蓋玻片之間有0.1毫米的間隙）三、實驗器材1雙目生物顯微鏡1臺2血球計數(shù)板1塊3新鮮酵母培養(yǎng)液4蓋玻片、擦鏡紙、濾紙四、實驗方法1取潔凈的血球計數(shù)板一塊。2將酵母菌液搖勻，用滴管吸取少許，將菌液直接滴加在計數(shù)室上，然后加蓋蓋玻片(勿使產(chǎn)生氣泡)。3靜置約5分鐘，先在低倍鏡下找到計數(shù)室后，再轉(zhuǎn)換高倍鏡觀察計數(shù)。4計數(shù)時用16中格的計數(shù)板，按對角線方位，取左上、左下、右上、右下的4個中格(即100小格)的酵母菌數(shù)。如果是25中格計數(shù)板，除數(shù)上述四格外，還需數(shù)中央1

9、中格的酵母菌數(shù)(即80小格)。由于菌體在計數(shù)室中處于不同的空間位置，要在不同的焦距下才能看到，因而觀察時必須不斷調(diào)節(jié)微調(diào)手輪，方能數(shù)到全部菌體，防止遺漏。如菌體位于中格的雙線上，計數(shù)時則數(shù)上線不數(shù)下線，數(shù)左線不數(shù)右線，以減少誤差。5凡酵母菌的芽體達到母細胞大小一半時，即可作為兩個菌體計算。每個樣品重復(fù)分數(shù)2次，取其平均值，按下述公式計算出每毫升菌液所含酵母菌細胞數(shù)。每毫升菌液含菌數(shù)400101000（稀釋倍數(shù)）6血球計數(shù)板用后，在水龍頭上用水柱沖洗干凈，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免損壞網(wǎng)格刻度。洗凈后自行晾干。表2-1實驗記錄 項目計次各 中 格 菌 數(shù)每毫升菌液總菌數(shù)1234512平 均五、實

10、驗結(jié)果及分析按上面的公式求出每毫升菌液總菌數(shù)和平均值，分析產(chǎn)生誤差的原因。實驗三 微生物的大小測定一、實驗?zāi)康?.加深幾大類微生物實際大小的概念2.掌握測量微生物的大?。ㄩL寬）的一般技術(shù)二、實驗原理微生物細胞的大小是微生物重要的形態(tài)特征之一，也是分類鑒定的依據(jù)之一。由于菌體很小,只能在顯微鏡下來測量。用于測量微生物細胞大小的工具有目鏡測微尺和鏡臺測微尺。目鏡測微尺是一塊圓形玻片，其中央刻有精確等分的刻度。測量時，將其放在目鏡中的隔板上來測量經(jīng)顯微鏡放大后的細胞物象。由于不同的顯微鏡放大倍數(shù)不同，同一顯微鏡在不同的目鏡、物鏡組合下，其放大倍數(shù)也不相同，而目鏡測微尺是放在目鏡的隔板上，每格實際表示

11、的長度不隨顯微鏡的總放大倍數(shù)的放大而放大，僅與目鏡的放大倍數(shù)有關(guān)，只要目鏡不變，它就是定值。而顯微鏡下的細胞物象是經(jīng)過了物鏡、目鏡兩次放大成象后才進入視野的。即目鏡測微尺上刻度的放大比例與顯微鏡下細胞的放大比例不同，只是代表相對長度，所以使用前須用置于鏡臺上的鏡臺測微尺校正，以求得在一定放大倍數(shù)下實際測量時的每格長度。三、實驗器材1.雙目生物顯微鏡1臺2.目鏡測微尺1個3.鏡臺測微尺1個4.載玻片、蓋玻片、濾紙5.酵母、綠藻培養(yǎng)液，新鮮活性污泥6.玻璃棒、滴管四、實驗方法1.目鏡測微尺的校正 把目鏡上的透鏡旋下，將目鏡測微尺的刻度朝下輕輕地裝入目鏡的隔板上，把鏡臺測微尺置于載物臺上，使刻度朝上

12、。鏡臺測微尺是一與載玻片大小相同的玻璃片，中央有一個圓形的蓋玻片，中央刻有1mm長的標尺，等分為100格，每格為0.01mm即為10 um。先用低倍鏡觀察，對準焦距，視野中看清鏡臺測微尺的刻度后，然后轉(zhuǎn)換成高倍鏡，同時轉(zhuǎn)動目鏡，使目鏡測微尺與鏡臺測微尺的刻度平行，移動移動手輪，使兩尺重疊，再使兩尺的“0”刻度完全重合，定位后，仔細尋找兩尺第二個完全重合的刻度。計數(shù)兩重合刻度之間目鏡測微尺的格數(shù)和鏡臺測微尺的格數(shù)。因為鏡臺測微尺的刻度每格長10微米，所以由下列公式可以算出目鏡測微尺每格所代表的長度： 表3-1目鏡測微尺校正記錄 項 目實 驗 數(shù)目鏡測微尺格數(shù)（A）鏡臺測微尺格數(shù)(B)目鏡測微尺每

13、格長度m12平 均10m注：當更換不同放大倍數(shù)的目鏡或物鏡時，必須重新校正目鏡測微尺每一格所代表的長度。2.微生物個體大小的測量校正好目鏡測微尺后，取出鏡臺測微尺放回盒內(nèi) ，放回原處。此時不要再隨意變動目鏡和物鏡放大倍數(shù)，微生物個體大小的測定只能在這特定的情況下進行。取一干凈的載玻片滴一滴水樣，蓋上蓋玻片，首先使用低倍鏡找到目的物，然后轉(zhuǎn)換成高倍鏡進行測量，用目鏡測微尺測出微生物長、寬各占幾格(不足一格的部分估計到小數(shù)點后一位數(shù))，測出的格數(shù)乘上目鏡測微尺每格代表的長度，即等于該微生物的大小，記錄，尋找同類生物個體測量3次，求出平均值。表3-2 微生物個體大小測量記錄 單位：m 項 目次 數(shù)1

14、23平 均五、實驗結(jié)果及分析求出所觀察的微生物個體大小的平均值，討論與理論值的誤差原因。實驗四 培養(yǎng)基的制備及滅菌一、實驗?zāi)康?熟悉玻璃器皿的洗滌和滅菌前的準備工作。2掌握培養(yǎng)基的制備方法。3掌握高壓蒸汽滅菌技術(shù)。二、實驗原理培養(yǎng)基是按照微生物生長發(fā)育的需要，用不同組分的營養(yǎng)物質(zhì)調(diào)制而成的營養(yǎng)基質(zhì)。人工制備培養(yǎng)基的目的，在于給微生物創(chuàng)造一個良好的營養(yǎng)條件。把一定的培養(yǎng)基放入一定的器皿中，就提供了人工繁殖微生物的環(huán)境和場所。自然界中，微生物種類繁多，由于微生物具有不同的營養(yǎng)類型，對營養(yǎng)物質(zhì)的要求也各不相同，加之實驗和研究上的目的不同，所以培養(yǎng)基在組成原料上也各有差異。但是，不同種類和不同組成的培

15、養(yǎng)基中，均應(yīng)含有滿足微生物生長發(fā)育的水分、碳源、氮源、無機鹽和生長素以及某些特需的微量元素等。此外，培養(yǎng)基還應(yīng)具有適宜的酸堿度(pH值)和一定緩沖能力及一定的氧化還原電位和合適的滲透壓。根據(jù)制備培養(yǎng)基對所選用的營養(yǎng)物質(zhì)的來源，可將培養(yǎng)基分為天然培養(yǎng)基、半合成培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基三類。按照培養(yǎng)基的形態(tài)可將培養(yǎng)基分為液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基。根據(jù)培養(yǎng)基使用目的，可將培養(yǎng)基分為選擇培養(yǎng)基、加富培養(yǎng)基及鑒別培養(yǎng)基等。固體培養(yǎng)基是在液體培養(yǎng)基中添加凝固劑制成的，常用的凝固劑有瓊脂、明膠和硅酸鈉，其中以瓊脂最為常用，其主要成份為多糖類物質(zhì)，性質(zhì)較穩(wěn)定，一般微生物不能分解，故用凝固劑而不致引起化學(xué)成份變化。瓊脂

16、在95的熱水中才開始融化，融化后的瓊脂冷卻到45才重新凝固。因此用瓊脂制成的固體培養(yǎng)基在一般微生物的培養(yǎng)溫度范圍內(nèi)(25-37)不會融化而保持固體狀態(tài)。滅菌是用物理或化學(xué)的方法來殺死或除去物品上或環(huán)境中的所有微生物。消毒是用物理或化學(xué)的方法殺死物體上絕大部分微生物(主要是病原微生物和有害微生物)。消毒實際上是部分滅菌。在微生物實驗、生產(chǎn)和科研工作中，需要進行純培養(yǎng)，不能有任何雜菌，因此，對所用器材、培養(yǎng)基要進行嚴格滅菌，對工作場所進行消毒，以保證工作順利進行。三、實驗器材1培養(yǎng)皿（90mm）5套2試管（15150mm）5支，（18180mm）2支，試管架3吸量管（10mL）2支，（1mL）8支

17、4錐形瓶（250mL）3個5燒杯（500mL）1個，50mL1個6吸耳球，玻璃棒，滴管7紗布、脫脂棉、報紙、精密pH試紙8漏斗、漏斗架910% NaOH溶液、10% HCl溶液10牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉、瓊脂、蒸餾水11高壓蒸氣滅菌器12電熱恒溫培養(yǎng)箱13天平、電爐、鑷子、牛角勺四、實驗方法1玻璃器皿的洗滌和包裝（1）洗滌玻璃器皿在使用前必須洗滌干凈。培養(yǎng)皿、試管、錐形瓶等可用洗衣粉加去污粉洗刷并用自來水沖凈。移液管先用洗液浸泡，再用自來水沖洗干凈。洗刷干凈的玻璃器皿自然晾干或放入干燥箱中烘干，備用。（2）包裝培養(yǎng)皿由一底一蓋組成一套，用包裝紙將5套培養(yǎng)皿包好。移液管的吸端用細鐵絲將少許棉花塞

18、入構(gòu)成11.5cm長的棉塞，將塞好棉花的移液管的尖端，放在45cm寬的長紙條的一端，移液管與紙條約成30夾角，折疊包裝紙包住移液管的尖端，左手將移液管壓緊，在桌面上向前搓轉(zhuǎn)，紙條螺旋式包在移液管外面，余下的紙頭折疊打結(jié)。按實驗需要，可單只包裝或多只包裝，待滅菌。用棉塞將試管管口和錐形瓶瓶口部塞住棉塞的制作：按試管口和錐形瓶瓶口大小估計用棉量，將棉花鋪成中心厚，周圍逐漸變薄的圓型，對折后卷成卷，一手握粗端，將細端塞入試管或錐形瓶口內(nèi)，棉塞不宜過松或過緊，用手提棉塞，管、瓶不掉下為準。棉塞四周應(yīng)緊貼管壁，不能有皺折，以防空氣中的微生物沿棉塞皺折侵入。棉塞插入2/3，其余留在管口外，便于拔塞。試管、

19、錐形瓶塞好棉塞后，用包裝紙包好，放在滅菌桶內(nèi)待滅菌。2培養(yǎng)基的配制（1）培養(yǎng)基配方牛肉膏：1g；蛋白胨：2g；氯化鈉：1g；瓊脂：4g；蒸餾水：200mL；pH：7.47.6（2）操作方法取一個500mL的燒杯，裝入200mL的蒸餾水。用天平依次稱取配方中各成分，放入水中加熱溶解，待瓊脂完全融化后停止加熱，補足蒸發(fā)損失的水量。用10NaOH或10HCl調(diào)節(jié)pH至7.47.6。分裝試管，將培養(yǎng)基分裝2支試管中，其余倒入250mL的錐形瓶中，分別塞上棉塞，包扎好待滅菌。3-1 培養(yǎng)基的分裝裝置與棉塞A：培養(yǎng)基的分裝圖B：棉塞的做法1：正確；2：管內(nèi)太短，外部太長；3：整個棉塞太松；4：管內(nèi)太緊，外

20、部太短松3滅菌滅菌的方法：滅菌的方法很多，一般可分為加熱、過濾、照射和使用化學(xué)藥品等方法。加熱滅菌是最主要的，加熱滅菌法有兩種：干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌。高壓蒸汽滅菌比干熱滅菌優(yōu)越，因為濕熱的穿透力和熱導(dǎo)傳導(dǎo)都比干熱強。濕熱時微生物吸收高溫水分，菌體蛋白很容易凝固變性，所以濕熱滅菌效果好。濕熱滅菌的溫度一般是在121滅菌15-30分鐘，而干熱滅菌的溫度則是160滅菌2小時才能達到濕熱滅菌121的同樣效果。干熱滅菌法培養(yǎng)皿、移液管及其它玻璃器皿可用干熱滅菌。現(xiàn)將已包裝好的上述物品放入干燥箱中，將溫度調(diào)至160后維持2小時，關(guān)掉加熱開關(guān)，待溫度降至50左右，將物品取出。注：滅菌時溫度不得超過170，

21、以免包裝紙燒焦。滅菌好的器皿應(yīng)保存好，切勿弄破包裝紙，否則會染菌。高壓蒸汽滅菌法此法使用高壓蒸汽滅菌器，微生物實驗所需的一些器皿、器具、培養(yǎng)基（不耐高溫者除外）等都可用此法滅菌。滅菌的操作過程實驗室中常用的高壓蒸汽滅菌鍋有立式、臥式和手提式等幾種。本實驗介紹手提式高壓蒸汽滅菌器的使用方法。手提式高壓蒸汽滅菌鍋的使用操作方法：1首先將內(nèi)層滅菌桶取出，再向外層鍋內(nèi)加入適量的水，使水面與三角擱架相平為宜。2放回滅菌桶，并裝入待滅菌物品。注意不要裝得太擠，以免防礙蒸汽流通而影響滅菌效果。三角燒瓶與試管口端均不要與桶壁接觸，以免冷凝水淋濕包口的紙而透入棉塞。3加蓋，并將蓋上的排氣軟管插入內(nèi)層滅菌桶的排氣

22、槽內(nèi)。再以兩兩對稱的方式同時旋緊相對的兩個螺栓，使螺栓松緊一致，勿使漏氣。4用電加熱，并同時打開排氣閥，使水沸騰以排除滅菌器內(nèi)的冷空氣。待冷空氣完全排盡后，關(guān)上排氣閥，讓鍋內(nèi)的溫度隨蒸汽壓力增加而逐漸上升。當鍋內(nèi)壓力升到所需壓力時，控制熱源，維持壓力至所需時間。本實驗用1.05kg/cm2，121，20分鐘滅菌。5滅菌所需時間到后，切斷電源，讓滅菌鍋內(nèi)溫度自然下降，當壓力表的壓力降至0時，打開排氣閥，旋松螺栓，打開蓋子，取出滅菌物品。如果壓力未降到0時，打開排氣閥，就會因鍋內(nèi)壓力突然下降，使容器內(nèi)的培養(yǎng)基由于內(nèi)外壓力不平衡而沖出燒瓶口或試管口，造成棉塞沾染培養(yǎng)基而發(fā)生污染。6將取出的滅菌培養(yǎng)基

23、放入電熱恒溫培養(yǎng)箱于溫度37下培養(yǎng)24小時，經(jīng)檢查若無雜菌生長，即可待用。注：每次使用高壓蒸汽滅菌器前，認真察看滅菌器內(nèi)的水位是否合適。五、思考題1培養(yǎng)基根據(jù)什么原理配制成的？基礎(chǔ)培養(yǎng)基中不同的成分各起到什么作用？2說明濕熱滅菌比干熱滅菌的優(yōu)越性。實驗五 活性污泥法污水處理過程中細菌菌落總數(shù)（CFU）的測定一、實驗?zāi)康?了解細菌總數(shù)指標的意義。2掌握稀釋平板法。3掌握細菌菌落總數(shù)的計數(shù)方法。二、實驗原理細菌種類很多，有各自的生理特性，必須用適合他們生長的培養(yǎng)基才能將他們培養(yǎng)出來。但在實際工作中不易做到，通常用一種適合大多數(shù)細菌生長的培養(yǎng)基培養(yǎng)腐生性細菌，以它的菌落總數(shù)表明有機物污染程度。活性污

24、泥菌含量（細菌總數(shù)）是微生物指標，是許多行業(yè)運行管理的重要參數(shù)之一。在給水工程中，細菌總數(shù)在一定程度上反映了微生物污染程度。在污水處理過程中，污泥混合菌濃度及進出水的細菌總數(shù)直接反映了活性污泥活性的好壞和水質(zhì)的變化情況。在實際測定中，通常用適合大多數(shù)異養(yǎng)細菌生長的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，以24h、37恒溫培養(yǎng)產(chǎn)生的菌落總數(shù)進行計算。三、實驗器材1培養(yǎng)皿（90mm）5套（已滅菌）2試管（15150mm）5支（已滅菌）、試管架3吸量管（10mL）2支、（1mL）8支）（已滅菌）4錐形瓶（250mL）1個（已滅菌）5營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基1瓶（已滅菌）6無菌水（200mL）1瓶7燒杯（100mL）1個8酒精

25、燈9吸耳球四、實驗方法1稀釋水樣將1瓶90mL和5管9mL的無菌水排列好,按10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6依次編號，在無菌操作條件下，用10mL的無菌移液管吸取10 mL水樣置于第一瓶90mL無菌水（內(nèi)含玻璃珠）中，將移液管吹洗3次，用手搖10分鐘將顆粒狀樣品打散。即為10-1濃度的菌液。用1mL的無菌移液管吸取1 mL10-1濃度的菌液于一9mL無菌水中，將移液管吹洗3次，搖勻即為10-2濃度菌液。同樣方法，依次稀釋到10-6。注：視水體污染程度定稀釋倍數(shù)，取在平板上能長出30300個菌落的水樣稀釋倍數(shù)。2接種用無菌移液管吸取3個適宜濃度的稀釋液1mL加入無菌培養(yǎng)皿內(nèi)，并傾注約15 mL已融化且冷卻至45左右的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，并立即旋搖平皿（順時針或逆時針），使菌液和培養(yǎng)基充分混勻，冷凝后即成平板，翻轉(zhuǎn)平皿，使底面朝上，置于37恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)。3計菌落數(shù)將培養(yǎng)24h的平板取出計菌落數(shù)。五、菌落計數(shù)及報告方法用肉眼觀察，計平板上的細菌菌落數(shù)，也可用菌落計數(shù)器計數(shù)，記下同一濃度的三個平板的菌落總數(shù)，計算平均值，再乘以稀釋倍數(shù)得出1mL水樣中細菌菌落總數(shù)。各種不同情況的計算方法如下：1