1、酶工程技術(shù)復(fù)習(xí)題考試題型：選擇題、填空題、名詞解釋、判斷題、簡(jiǎn)答題第一章知識(shí)點(diǎn)1. 酶2 SOD3 限制性核酸內(nèi)切酶4 酶的活性中心5 酶工程6 酶催化反應(yīng)的特點(diǎn)7 米氏方程（包括Km的知識(shí)）8 不可逆抑制劑、可逆抑制劑9 可逆抑制劑的種類10有無抑制劑存在時(shí)酶促反應(yīng)進(jìn)行的速度和Km值11酶的命名原則和六大類酶第二章知識(shí)點(diǎn)1.轉(zhuǎn)錄和翻譯2.操縱子學(xué)說3.乳糖操縱子和色氨酸操縱子4.末端產(chǎn)物阻遏5.微生物發(fā)酵產(chǎn)酶的優(yōu)點(diǎn)6.產(chǎn)酶微生物的分離和篩選7.活化和擴(kuò)大培養(yǎng)8.六大營養(yǎng)要素9.酶生物合成的模式？哪種是最理想的模式？為什么？10.生物反應(yīng)器11.發(fā)酵罐的設(shè)計(jì)原則第三章知識(shí)點(diǎn)1. 微生物細(xì)胞壁的

2、主要成分2. 細(xì)胞破碎的常用方法3. 常用離心方法4. 鹽析法的原理5. 等電點(diǎn)沉淀的原理6. 萃取的原理7. 表面活性劑8. 透析的原理9. 微濾、超濾、反滲透10. 層析的原理11. 層析法的種類和原理12. HPLC13. 酶的濃縮14. 酶的結(jié)晶15. SDS-PAGE的原理和注意事項(xiàng)第四章知識(shí)點(diǎn)1. 單純酶、結(jié)合酶、全酶、金屬酶、金屬激活酶2. 輔酶和輔基的區(qū)別3.單體酶、寡聚酶、多酶復(fù)合體4. 活性中心5. 活性中心的共性6. 三個(gè)酶的作用機(jī)理學(xué)說7. 酶活力、比活力8. 酶活力測(cè)定方法酶工程復(fù)習(xí)題選擇題：1. 酶促反應(yīng)試驗(yàn)中所用的酸性磷酸酯酶原酶液來源于 cA雞蛋 B.黃豆 C.

3、萌發(fā)好的綠豆芽 D.豬血2 有無抑制劑存在時(shí)酶促反應(yīng)的速度與Km值的變化情況，下列說法正確的是： bA存在競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑時(shí)，Vmax不變，Km減小B存在非競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑時(shí)，Vmax減小，Km不變C存在反競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑時(shí)，Vmax不變，Km減小D存在競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑時(shí)，Vmax減小，Km不變3.SDS-PAGE實(shí)驗(yàn)中，在配膠的過程中，五號(hào)液（過硫酸銨溶液）是在什么時(shí)候加入 bA膠溶液所有其他成分都配好之前，第一個(gè)添加的溶液B膠溶液所有其他成分都配好了后，將膠溶液注入玻璃板之前 C膠溶液所有其他成分都配好了后，將膠溶液注入玻璃板之后D在樣品槽模板（梳子）插入之后填空題：1.酶的活性中心的必需基團(tuán)包括： 結(jié)合

4、集團(tuán) 和 催化集團(tuán)2. 米氏方程是：3. 可逆抑制作用可分為競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用、 反競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用 、 非競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用 。4. 酶的六大類型：1.氧化還原酶類(oxidoreductases)：催化氧化還原反應(yīng)2.轉(zhuǎn)移酶類(transferases)：催化功能基團(tuán)的轉(zhuǎn)移3.水解酶類(hydrolases)：催化水解反應(yīng) 4.裂合酶類(lyases)：催化水,氨或co2 的去除或加入5.異構(gòu)酶類(isomerases)：催化各種類型的異構(gòu)作用6.合成酶類(ligases)：催化消耗ATP的成鍵反應(yīng)5.酶的催化作用特點(diǎn)包括： 專一性 、 高效性 、 條件溫和 、 環(huán)境敏感性 、 可調(diào)控性 。 .判斷

5、題：1.酶的本質(zhì)是蛋白質(zhì)，所有的酶都是由蛋白質(zhì)構(gòu)成。 錯(cuò)2.氧化還原酶主要包括氧化酶和還原酶。 錯(cuò)3.有意義鏈?zhǔn)侵笩o轉(zhuǎn)錄功能的一條DNA鏈. 是DNA雙鏈中按堿基配對(duì)規(guī)律能指引轉(zhuǎn)錄生成RNA的一股單鏈，又稱編碼鏈. 錯(cuò)4.大多數(shù)細(xì)菌的最適PH值是。 對(duì)名詞解釋：1.酶的比活力：指每毫克酶蛋白所含的酶活力單位數(shù).2.酶的激活劑; 凡是能增加酶的催化活性或使酶的催化活性顯示出來的物質(zhì)都稱為激活劑（activator).3.狹義發(fā)酵： 微生物在無氧條件下，分解各種有機(jī)物質(zhì)產(chǎn)生能量的一種方式。4. 調(diào)節(jié)基因： 是調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)合成的基因。它能使結(jié)構(gòu)基因在需要某種酶時(shí)就合成某種酶，不需要時(shí)，則停止合成，它對(duì)

6、不同染色體上的結(jié)構(gòu)基因有調(diào)節(jié)作用。5. 結(jié)合酶 ：需要酶蛋白和輔助因子同時(shí)存在時(shí)才能發(fā)揮作用的酶.6. 酶的固定化：采用各種方法，將酶與水不溶性載體結(jié)合，制備固定化酶的過程稱為酶的固定化。7.電泳技術(shù)：是根據(jù)各種帶電粒子在電場(chǎng)中遷移速度的不同而對(duì)物質(zhì)進(jìn)行分離的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。8裂合酶：裂合酶催化底物分子裂解成為兩個(gè)較小的化合物及其逆反應(yīng)。9.密度梯度離心：樣品在密度梯度介質(zhì)中進(jìn)行離心，使沉降系數(shù)比較接近的組分得以分離的一種區(qū)帶分離方法。 常用的密度梯度溶液是蔗糖溶液。10.變構(gòu)效應(yīng)和變構(gòu)酶：調(diào)節(jié)中心可以與小分子的代謝物相結(jié)合，使酶分子的構(gòu)象發(fā)生改變，從而影響酶的活性。這種作用叫變構(gòu)效應(yīng)(又叫別構(gòu)效應(yīng)

7、)；具有變構(gòu)效應(yīng)的酶叫變構(gòu)酶，引起變構(gòu)的小分子物質(zhì)叫變構(gòu)劑(調(diào)節(jié)物)。11表面活性劑：表面活性劑(surfactant)，是指具有固定的親水親油基團(tuán)，在溶液的表面能定向排列，并能使表面張力顯著下降的物質(zhì)。表面活性劑的分子結(jié)構(gòu)具有兩親性：一端為親水基團(tuán)，另一端為憎水基團(tuán)；12分解代謝物阻遏：指細(xì)胞內(nèi)同時(shí)有兩種分解底物（碳源或氮源）存在時(shí)，利用快的那種分解底物會(huì)阻遏利用慢的底物的有關(guān)酶合成的現(xiàn)象。簡(jiǎn)答：1. 19SDS-PAGE中SDS的作用原理是什么？SDS是一種陰離子去污劑，帶有大量負(fù)電荷，與蛋白質(zhì)結(jié)合后使蛋白質(zhì)所帶負(fù)電荷大大超過了天然蛋白質(zhì)原有的負(fù)電荷，因而消除或掩蓋了不同種類蛋白質(zhì)間原有電

8、荷的差異。 SDS破壞蛋白質(zhì)氫鍵、疏水鍵，巰基乙醇使二硫鍵打開，引起蛋白質(zhì)構(gòu)象改變，使蛋白質(zhì)SDS復(fù)合物形狀近似橢圓形，短軸相同（1.8nm），長軸與蛋白質(zhì)分子量成正比。 因此，蛋白質(zhì)SDS復(fù)合物(SDS-denatured protein)在凝膠中的遷移率不受蛋白質(zhì)原有電荷和形狀的影響，只與橢圓棒長度（蛋白質(zhì)分子量）有關(guān)。2. 簡(jiǎn)述誘導(dǎo)契合學(xué)說當(dāng)?shù)孜锱c酶相遇時(shí)，可誘導(dǎo)酶活性中心的構(gòu)象發(fā)生相應(yīng)的變化，其上有關(guān)的各個(gè)基團(tuán)達(dá)到正確的排列和定向，因而使底物和酶能完全契合。當(dāng)反應(yīng)結(jié)束產(chǎn)物從酶分子上脫落下來后，酶的活性中心又恢復(fù)成原來的構(gòu)象。3. RNA聚合酶有幾個(gè)亞基？其中因子的作用是什么？RNA聚合

9、酶全酶形式為2，共5個(gè)亞基。其中亞基與RNA聚合酶的四聚體核心（2）的形成有關(guān)；亞基含有核苷三磷酸的結(jié)合位點(diǎn)；亞基含有與DNA模板的結(jié)合位點(diǎn)；而因子只與RNA轉(zhuǎn)錄的起始有關(guān)，與鏈的延伸沒有關(guān)系，一旦轉(zhuǎn)錄開始，因子就被釋放，而鏈的延伸則由四聚體核心酶（core enzyme）催化。所以，因子的作用就是識(shí)別轉(zhuǎn)錄的起始位置，并使RNA聚合酶結(jié)合在啟動(dòng)子部位。4.發(fā)酵罐的示意圖5.發(fā)酵罐的設(shè)計(jì)原則 穩(wěn)定性 控制性 操作性 安全性 可視性6. 什么是啟動(dòng)子 啟動(dòng)子上有兩個(gè)位點(diǎn)： （1）RNA聚合酶的結(jié)合位點(diǎn)（2）cAMP-CAP的結(jié)合位點(diǎn)。 只有cAMP-CRP復(fù)合物結(jié)合到啟動(dòng)子的位點(diǎn)上，RNA聚合酶才

10、能結(jié)合到其在啟動(dòng)子的位點(diǎn)上，酶的合成才能開始。7. 請(qǐng)說出下列縮寫的中文名稱：SDS-PAGE、Acr、Bis、Tris、APS、TEMEDSDS-PAGE十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳Acr丙烯酰胺Bis甲叉雙丙烯酰胺Tris三羥甲基氨基甲烷APS過硫酸銨TEMEDN,N,N,N-四甲基乙二胺8. 請(qǐng)說出在血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活性測(cè)定中， 2,4-二硝基苯肼的作用。丙酮酸可與2,4二硝基苯肼發(fā)生加成反應(yīng)，生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙，該產(chǎn)物在堿性環(huán)境中可轉(zhuǎn)化成紅棕色的苯腙硝醌化合物，其顏色的深淺與丙酮酸的生成量，亦即與谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性的高低成正比。通過標(biāo)準(zhǔn)曲線可以查出丙酮酸的生成量。9.

11、各種酶固定化法比較的優(yōu)缺點(diǎn)10.菌種保藏的方法有哪些低溫保藏蒸餾水保藏法斜面?zhèn)鞔２胤ㄒ后w石蠟保藏法干燥載體保藏法寄主保藏法基因工程菌的保藏（重組質(zhì)粒）11.請(qǐng)闡述乳糖操縱子學(xué)說乳糖操控子是大腸桿菌中控制半乳糖苷酶誘導(dǎo)合成的操縱子。包括調(diào)控元件P(啟動(dòng)子)和O(操縱基因)，以及結(jié)構(gòu)基因lacZ(編碼半乳糖苷酶)、lacY(編碼通透酶)和lacA(編碼硫代半乳糖苷轉(zhuǎn)乙酰基酶)。1、無乳糖時(shí)，調(diào)節(jié)基因lacI 編碼阻遏蛋白，與操縱基因O 結(jié)合后抑制結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄,不產(chǎn)生代謝乳糖的酶。2、只有乳糖存在時(shí),乳糖可與lac阻遏蛋白結(jié)合，而使阻遏蛋白不與操縱基因結(jié)合，誘導(dǎo)結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄，代謝乳糖的酶產(chǎn)生以代謝

12、乳糖。3、葡萄糖和乳糖同時(shí)存在時(shí)，葡萄糖的降解產(chǎn)物能降低cAMP含量，影響CAP與啟動(dòng)基因結(jié)合，抑制結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄，抑制代謝乳糖的酶產(chǎn)生。 12. 簡(jiǎn)述產(chǎn)酶微生物的分離和篩選 1)樣品的采集:從富含該酶作用底物的場(chǎng)所采集樣品 2)富集培養(yǎng): 投其所好，取其所抗 3)分離獲得微生物的純培養(yǎng)（pure culture）。 4)初篩：選出產(chǎn)酶菌種，以多為主。5)復(fù)篩：選出產(chǎn)酶水平相對(duì)較高的菌株，以質(zhì)為主。13.根據(jù)本圖講述蛋白質(zhì)合成的過程;14.根據(jù)本圖簡(jiǎn)述色氨酸操縱子學(xué)說15. 酶的合成模式中最理想的是哪種？為什么？酶所對(duì)應(yīng)的mRNA的穩(wěn)定性以及培養(yǎng)基中阻遏物的存在是影響酶生物合成模式的主要因素。其中，mRNA穩(wěn)定性好的，可以在細(xì)胞生長進(jìn)入平衡期以后，繼續(xù)合成其所對(duì)應(yīng)的酶；mRNA穩(wěn)定性差的，就隨著細(xì)胞生長進(jìn)入平衡期而停止酶的生物合成；不受培養(yǎng)基中存在的某些物質(zhì)阻遏的，可以伴隨著細(xì)胞生長而開始酶的合成；受到培養(yǎng)基中某些物質(zhì)阻遏的，則要在細(xì)胞生長一段時(shí)間甚至在平衡期后，酶才開始合成并大量積累。在酶的發(fā)酵生產(chǎn)中， 為了提高產(chǎn)酶率和縮短發(fā)酵周期，最理想的合成模式應(yīng)是延續(xù)合成型。因?yàn)閷儆谘永m(xù)合成型的酶，在發(fā)酵過程中沒有生長