1、復(fù)方生物黃酮致突變實驗               作者：王舒然，謝友祥，栗新年 【摘要】  目的  為了研究復(fù)方生物黃酮（圣安泰牌百力康片）的潛在致突變性。方法  我們對該產(chǎn)品進行了Ames實驗、小鼠骨髓細胞微核實驗和小鼠精子畸形實驗。結(jié)果  Ames實驗，小鼠骨髓細胞微核實驗，小鼠精子畸形實驗等結(jié)果均為陰性，均未見毒性改變。結(jié)論  復(fù)方生物黃酮在服用劑量內(nèi)未見致突變性。   

2、;     【關(guān)鍵詞】  復(fù)方生物黃酮；Ames實驗；小鼠骨髓細胞微核實驗；小鼠精子畸形實驗        【Abstract】  In order to study the potential mutation genesis of compound flavine， we have performed Ames tests， rat marrow osteocyte micronuclear tests and rat sperm deformation tests. T

3、he results are all negative， no toxic changes have been observed. It is concluded that no mutation genesis effects of compound bio-flavine have been discovered in feeding dosage.        【Key words】  compound bio-flavine；Ames tests；rat marrow osteocyte micronuclear

4、tests；rat sperm deformation tests        隨著生命科學(xué)的不斷發(fā)展，人們對生物黃酮有了廣泛的研究，發(fā)現(xiàn)黃酮類化合物具有良好的抗氧化性能1和清除自由基的能力2；具有抗腫瘤作用3；植物雌激素樣作用；減少體內(nèi)膽固醇的合成，降糖作用4和降低血清膽固醇濃度和對心腦血管的保護作用5；對細胞免疫功能和非特異性免疫功能均有提高作用。生物黃酮的種類眾多，其來源不同，所發(fā)揮的生物活性也不同。根據(jù)傳統(tǒng)中醫(yī)理論以枸杞、黃芪、銀杏葉為主要原料，輔以其他輔料制成的復(fù)方生物黃酮，可以更好的發(fā)揮黃酮的提高免疫作用，盡管這些主要原

5、料均來源于“既食又藥”的物質(zhì)，但是關(guān)于復(fù)方成分的致突變性研究較少。為了研究復(fù)方生物黃酮（圣安泰牌百力康片）可能對人體造成的潛在致突變性，我們對該產(chǎn)品進行了Ames實驗、小鼠骨髓微核實驗和小鼠精子畸形實驗，以期為今后開發(fā)利用我國“既食又藥”的醫(yī)藥寶庫提供科學(xué)依據(jù)。        1  材料與方法        1.1  樣品  復(fù)方生物黃酮的商品名稱為圣安泰牌百力康片，由哈爾濱圣安泰生物科技有限公司提供。樣品以枸杞、黃芪、銀杏葉為主要原料，輔以其他

6、輔料制成，功效成分為總黃酮。        1.2  材料  昆明種小白鼠（批準(zhǔn)證號：醫(yī)動字第09-2-7號），購自黑龍江省腫瘤研究所實驗動物中心。TA97a、TA98、TA100和TA102四種菌株引自美國加州大學(xué)Ames實驗室。        1.3  方法        1.3.1  鼠傷寒沙門氏菌/哺乳動物微粒體酶實驗（Ames實驗）  TA97a、TA98、

7、TA100和TA102四種菌株引自美國加州大學(xué)Ames實驗室。經(jīng)菌株特性鑒定均符合實驗要求。活化系統(tǒng)為PCB-五氯誘導(dǎo)的雄性Wistar大鼠肝s-9液。按1：9加入輔助因子（Ames1983年配方）配成10s-9混合液，經(jīng)陽性誘變劑活性鑒定符合實驗要求。實驗樣品經(jīng)XAD-11樹脂柱過濾及洗脫預(yù)處理，最后以DMSO為溶劑，劑量設(shè)計分別為5mg/皿、1mg/皿、0.2mg/皿、0.04mg/皿和0.008mg/皿受試物。除上述5個劑量組外，又設(shè)未處理對照組、溶劑對照組（DMSO）和陽性對照組加s-9用2-AF（TA102用1，8-二羥蒽醌），不加s-9用DEXON（TA100用疊氮鈉）。采用平板滲

8、入法進行實驗。在保溫的頂層培養(yǎng)基中依次加入測試菌株新鮮增菌液0.1ml，混勻；加受試物或?qū)φ瘴?.1ml需活化時加入10s-9混合液0.5ml（含s-95l），再混勻，迅速傾入底層培養(yǎng)基上，轉(zhuǎn)動平皿使頂層培養(yǎng)基均勻分布在底層上，平放固化，37培養(yǎng)48h觀察結(jié)果。每個劑量平行做了3皿，并重復(fù)一次，最后以3皿平均值報告實驗結(jié)果。        1.3.2  小鼠骨髓細胞微核實驗  昆明種小白鼠，體重2530g，共50只，在本實驗室適應(yīng)環(huán)境7天后，隨機分成5組，每組10只，雌雄各半。高劑量組劑量為10g/kg bw；中劑

9、量組為5g/kg Bw；低劑量組為2.5g/kg bw；陰性對照組經(jīng)口灌胃蒸餾水；陽性對照組灌胃給予環(huán)磷酰胺，劑量為40.0mg/kg bw。按20ml/kg bw灌胃容積進行灌胃。采用30h給受試物法，即二次給受試物間隔24h，第二次給受試物后6h頸椎脫臼處死小鼠，取股骨，常規(guī)制片。顯微鏡雙盲法閱片，每只小鼠觀察1000個嗜多染紅細胞（PCE），記錄有微核的嗜多染紅細胞數(shù)，計算出微核率。每只動物計數(shù)200個嗜多染紅細胞，觀察嗜多染紅細胞與成熟紅細胞比值。        1.3.3  小鼠精子畸形實驗  昆明種小白

10、鼠25只，體重2530g；隨機分成5組，每組5只。設(shè)3個劑量組，劑量設(shè)計同小鼠骨髓微核實驗，即高劑量組為10g/kg bw，中劑量組為5g/kg bw，低劑量組為2.5g/kg bw。陰性對照組給予蒸餾水，陽性對照組給予環(huán)磷酰胺，劑量為40mg/kg bw。所有各組均按20ml/kg bw容積灌胃，每日1次，連續(xù)5天。各組動物均于首次投入檢樣后35天處死。按常規(guī)方法制片，固定，2伊紅溶液染色，每只小鼠鏡檢1000個完整精子，計算畸形率。        2  結(jié)果      &

11、#160; 2.1  鼠傷寒沙門氏菌/哺乳動物微粒體酶實驗（Ames實驗）  圣安泰牌百力康片二次Ames實驗結(jié)果見表1和表2。 表1  圣安泰牌百力康片第一次Ames實驗結(jié)果  (x±s)   注：以上結(jié)果為3皿回變菌落數(shù)的平均值 表2  圣安泰牌百力康片第二次Ames實驗結(jié)果  （x±s）   注：以上結(jié)果為3皿回變菌落數(shù)的平均值        實驗結(jié)果表明，受檢樣品對Ames各實驗菌株在加與不加活化系統(tǒng)條件下均呈陰性結(jié)果，即鼠傷寒

12、沙門氏菌/哺乳動物微粒體酶實驗為突變陰性結(jié)果。        2.2  小鼠骨髓細胞微核實驗  圣安泰牌百力康片的小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核實驗結(jié)果見表3。 表3  圣安泰牌百力康片小鼠骨髓細胞微核實驗結(jié)果    注：與陰性對照組相比*P<0.01        對實驗結(jié)果進行泊松分布檢驗，結(jié)果兩個性別小鼠除陽性對照組外，各劑量組微核率與陰性對照組相比均無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05），亦無劑量效應(yīng)關(guān)系，說明受

13、試物小鼠骨髓細胞微核實驗為陰性結(jié)果。此外，各組動物PCE/RBC值經(jīng)方差分析差異無顯著性，說明各組動物均未見到細胞毒性作用。        2.3  小鼠精子畸形實驗  圣安泰牌百力康片的小鼠精子畸形實驗結(jié)果見表4。 表4  圣安泰牌百力康片對小鼠精子畸形發(fā)生率的影響   注：與陰性對照組相比*P<0.01     從表4可見，各組小鼠均可見到一定數(shù)量的畸形精子，除陽性對照組外各實驗組小鼠的精子畸形與陰性對照組相比，均沒有超過2倍，且無劑量效應(yīng)關(guān)系，亦無統(tǒng)計學(xué)

14、意義，說明受試物對小鼠精子畸形發(fā)生率無影響。        3  討論        復(fù)方生物黃酮的主要來源為枸杞、銀杏葉和黃芪。研究證實這幾種成分未見致突變毒性結(jié)果。枸杞的Ames實驗（TA97、TA98、TA100、TA1024個菌株）結(jié)果為無論加S9與不加S9回變菌落數(shù)均未超過空白對照的兩倍。雌性和雄性動物的微核率分別為1.6與1.2，與陰性對照組微核率相比，差異不顯著。小鼠精子畸形實驗精子畸形率均在正常范圍內(nèi)，與陰性對照組精子畸形率相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義6。

15、對銀杏葉的遺傳毒性實驗研究也未見致突變作用7，目前尚未見黃芪的突變性研究。本文在急性毒性實驗的基礎(chǔ)上進行了復(fù)方生物黃酮的Ames實驗、小鼠精子畸形實驗和小鼠精子畸形實驗，結(jié)果表明復(fù)方生物黃酮對Ames各實驗菌株在加與不加活化系統(tǒng)條件下均呈陰性結(jié)果。各劑量組微核率與陰性對照組相比均無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05），亦無劑量效應(yīng)關(guān)系，說明受試物小鼠骨髓細胞微核實驗為陰性結(jié)果。各組小鼠均可見到一定數(shù)量的畸形精子，除陽性對照組外，各實驗組小鼠的精子畸形與陰性對照組相比，均沒有超過2倍，且無劑量效應(yīng)關(guān)系，亦無統(tǒng)計學(xué)意義，說明受試物對小鼠精子畸形發(fā)生率無影響。總之，本研究結(jié)果說明實驗劑量的復(fù)方生物黃酮沒

16、有致突變性。 【參考文獻】     1  姚平，劉烈剛，賈文波，等.銀杏黃酮對小鼠急性酒精攝入后抗氧化系統(tǒng)的影響.衛(wèi)生研究，2005，34（3）：303-306.        2  彭珊珊，于化泓，趙哲霞.具有抗氧化效果的植物性食品.食品科技，2005，1：44-48.        3  杜鳳英.植物雌激素抗癌作用的研究進展.預(yù)防醫(yī)學(xué)情報雜志，2005，21（2）：153-155 .        4  曹群華，瞿偉菁，牛偉，等.沙棘黃酮對鏈脲佐菌素致糖尿病大鼠降糖作用.營養(yǎng)學(xué)報，2005，27（2）：151-154.        5  朱