1、強心苷的提取與分離提取 分離 色譜鑒定 紙色譜 薄層色譜強心苷的分離提純通常比較復雜與困難，因為它在植物中的含量一般都比較低（1% 以下），而且同一中藥中所含的強心苷類成分不僅種類多、 結構性質相近， 還易受植物體內酶、 酸的影響生成相應的次生苷，從而增加了成分的復雜性，同時共存的糖類、鞣質、皂苷、色 素等，往往能影響或改變強心苷的溶解性，這些都增加了提取分離工作的難度。提取時還需考慮強心苷在植物體中的存在形式。如需提取原生苷，要注意抑制酶的活性，防止酶水解的發生。措施諸如原料采收后要低溫（50C60C）通風快速干燥、保存期間注意防潮、用乙醇提取以破壞酶的活性。同時還要注意在提取過程中避免酸或

2、堿的影響。 如需提取次生苷，則要利用酶的活性，如采用發酵法進行酶解等。（一）提取 提取強心苷通常用 70% 80%的乙醇為溶劑，若原料為種子類藥材或含脂類雜質較多 時，需先用石油醚或汽油脫脂處理后再提取； 若原料為葉或全草， 含葉綠素較多時，可用析 膠法， 將醇提液濃縮后靜置，使葉綠素等脂溶性雜質成膠狀沉淀析出，濾過除去， 也可用活性炭吸附法除去稀醇提取液中的葉綠素。提取液中共存的糖、水溶性色素、鞣質、皂苷、酸 性及酚性等物質可用氧化鋁、 聚酰胺吸附法或鉛鹽沉淀法除去， 但需注意強心苷也有可能被 吸附而損失。提取液經上述初步除雜后，可用氯仿和不同比例的氯仿 -甲醇（乙醇）溶液依次萃取， 將強心

3、苷按極性大小不同分為若干部分， 但每一部分仍為極性相似強心苷的混合物， 需做進 一步分離（二）分離混合強心苷的分離可用萃取法、 逆流分溶法和色譜法， 并對其中含量較高的組分選用適 當溶劑反復結晶以獲得單體。 多數情況下， 由于混合強心苷的組成復雜， 往往需要幾種方法 配合使用，尤其結合各種色譜法進一步分離。常用的色譜法有吸附色譜和分配色譜。分離親脂性強心苷（如單糖苷、次生苷）和苷 元時， 一般選用吸附色譜，吸附劑用硅膠或中性氧化鋁，洗脫劑可用氯仿 -甲醇、酯酸乙酯 -甲醇、苯、丙酮等。分離弱親脂性強心苷時，宜用分配色譜，常用支持劑為硅膠、硅藻土、 纖維素，洗脫劑為不同比例的醋酸乙酯-甲醇-水或

4、氯仿 -甲醇-水。（三）色譜鑒定 紙色譜強心苷的紙色譜常用的溶劑系統多由氯仿、 醋酸乙酯、 苯、 甲苯等有機溶劑與水混合而 成，但因水在這些溶劑中的溶解度較小， 可通過加入適量乙醇的方法來增加溶劑系統的含水 量，以利于弱親脂性強心苷的分離。通常強心苷的親脂性較強時，多將濾紙預先用甲酰胺或丙二醇浸漬數分鐘作為固定相， 以苯或甲苯（用甲酰胺飽和）為移動相。當強心苷的親脂性較弱時，仍可以前者為固定相， 只是將移動相改為極性較大的溶劑， 如用二甲苯和丁酮的混合液， 或氯仿、 苯和乙醇的混合 液，或用氯仿-四氫呋喃-甲酰胺（50 : 50 : 6.5）、丁酮-二甲苯-甲酰胺（50 : 50 : 4）等溶

5、劑 系統作移動相。親水性較強的強心苷，宜用水浸透濾紙作固定相，用水飽和的丁酮或乙醇 甲苯 -水（ 4: 6: 1）、氯仿 -甲醇 -水（ 10: 4: 5 或 10: 8: 5）作移動相。薄層色譜在強心苷的薄層色譜中， 以分配色譜的分離效果較好。 不但所得色斑顏色清晰、 色澤集 中，而且薄層上能承載的樣品量也較大， 因此樣品量稍大時也不會出現拖尾現象。 分配色譜 主要用于分離極性較強的強心苷類化合物， 常用硅藻土、 纖維素粉作支持劑， 固定相可用甲 酰胺、二甲基甲酰胺、乙二醇等，移動相用氯仿-丙酮（ 4: 1）、氯仿 -正丁醇（ 19: 1）等溶劑系統。強心苷的薄層色譜鑒定也可用吸附色譜， 但

6、因強心苷分子中常含有較多的極性基團 （如 多糖苷或苷元上的極性基團多） ，因而不宜用吸附性能強的吸附劑如氧化鋁，而多用硅膠， 展開劑系統有二氯甲烷 -甲醇 -甲酰胺（ 80: 19: 1）、醋酸乙酯 -甲醇 -水（ 80: 5: 5）等含有 少量水或甲酰胺的混合溶劑，可有效減輕拖尾現象。強心苷的紙色譜和薄層色譜中常用的顯色劑有：2%3,5-二硝基苯甲酸乙醇溶液與2mol/L氫氧化鉀水溶液等體積混合，噴后強心苷顯紅色，幾分鐘后褪色。1%苦味酸水溶液與10%氫氧化鈉水溶液（95 : 5）混合，噴后于 95C左右烘約5分鐘，強心苷顯橙紅色。2%三氯化銻的氯仿溶液，噴后于100C烘5分鐘即顯色，顏色隨

7、強心苷及苷元結構的不同而不同。氧化鋁是一種極性吸附劑，對極性大的成分吸附力 強，故成分的極性越大，由于被吸附力越強，在色譜中的 移動速度越慢，在柱內保留時間越長，就越后被洗脫。因 此混合物中的各成分將按極性由小至大的順序依次被洗脫 下來。黃花夾竹桃中強心苷類化學成分的提取分離技術黃花夾竹桃（Thevetia Peruviana）為夾竹桃科植物。性寒味苦，有毒，具有強心利尿、 祛痰定喘、祛瘀鎮痛功效。臨床用于治療心力衰竭、喘息咳嗽、跌打損傷、腫痛等。從黃花夾竹桃果仁中可提制強心靈，方法是以脫脂后的果仁粉末為原料，先進行發酵酶解處理，再以乙醇為溶劑從中滲漉提取總次生苷，提取液于60C以下減壓濃縮，

8、放冷，即得強心靈粗品，繼而用乙醇溶解粗品，活性炭脫色，重結晶，即得強心靈純品， 黃花夾竹桃中強心苷的提取工藝流程：若要繼續分離強心靈中的 5 種單體成分，可用柱色譜，以中性氧化鋁為吸附劑，用苯-氯仿（1 : 1 、 1: 3、 1 : 4）、氯仿、氯仿 -甲醇（ 99.5: 0.5、 99: 1 、 98: 2）、甲醇依次洗脫，可 先后得到極性由小到大的各個成分，即：單乙酰黃夾次苷乙、黃夾次苷乙、黃夾次苷甲、黃 夾次苷丙、黃夾次苷丁。黃花夾竹桃杲仁粉I苯或石汕能連儀回流脫脂脫詼術加I入5倍晴的水及25%«甲苯加塞f7 354冗恒溫稱中誨解24小吋酶解后的粉末肌入15倍牡tOH攪拌15

9、2。分徽浸泡12小時陸 滲瓠再加入10倍量ElOH讎續滲邇藥請F4OH滲漉液601C下減吐回收EtOH壟1:25（生藥;滲漉初 然后加水便成1:12.5.放置，析甜”過濾濾液加入40倍量95臨ElOHjn熱溶解,再加入粗品 量15%的活性炭惻強半小時脫色.過濾活性炭（棄去）減壓濃縮至1：5加入3倚疑水,放置抽濾濾液結聶乙瞇詵茨？（rc干燥強心靈毛地黃中強心苷化合物的提取分離技術毛花洋地黃（Digitalis lanata）是玄參科植物，應用于臨床已有百年歷史，至今仍是治 療心力衰竭的有效藥物。毛花洋地黃是制備強心藥西地蘭（cedilanid，又稱去乙酰毛花洋地黃苷丙）和地高辛（digoxin，

10、又稱異羥基洋地黃毒苷）的主要原料。西地蘭的提制：西地蘭是毛花洋地黃苷丙的去乙酰化物。其提制工藝分為提取總苷、分 離苷丙、苷丙去乙酰基三步。1 .提取總苷根據溶解性用乙醇提取原料藥，濃縮后經析膠、氯仿洗滌除去脂雜，最后用含醇氯仿萃取出總苷。由于要提取的總苷均為原生苷，可溶于乙醇，且乙醇還可抑制酶的活性，防止酶水解的發 生，故選用乙醇為提取溶劑。又因強心苷對酸堿不穩定，故醇提液需調至中性再減壓回收。 繼而用氯仿洗除去脂雜（苷丙因在苷甲、乙、丙三者中極性最大，最難溶于氯仿而留在水 層）,最后利用苷甲、乙、丙均可溶于氯仿-乙醇（3 : 1或2 : 1）用含醇氯仿萃取出總苷同時與停留在水層中的水雜分離。

11、G花洋地黃叫粗粉5倍hl70%熱么醇（609）浸漬或潔渡“潘淞近 左全時再加2倍M70%乙幡灣漉醉提取液加碳酸訥闊屮空中性住60匕以F減壓I收乙酸至育牌駄 10%-20%.于15"CLU卜沖宣析膠.過液，次I I吸取上帖液股狀物（葉録瓠樹脂等）上清液減壓回收乙曹至無醇味 濃縮液放冷用0蟲倍吊氯優洗滌1次氯仿層（樹脂r色壺等）歡層川I乙醇至含醉錄22%*再用0.3倍量氮仍華取2次水層（館零水濬性余曬）氣仿熄I回枚氯仿.抽松抽松物I加適吐甲醇熱濟，回收甲購空|剩余雖為抽松物的0 304倍濃縮液I丿川入抽松物車屋0,04倍星的蒸諸水及空星胡腫 搖勻，靜翌48小時以 ' 析晶濾取結晶

12、結晶（總牢主含無花泮地黃存叩r乙、內）2 分離苷丙根據苷甲、乙、丙三者的極性和溶解度的差別，可從總苷中分離出苷丙。三者溶 解度見表7-1粗總酉按粗總琵甲庫IMtS水（1 ：100 : 500 : 500）的 比例，先將總騎于甲鶴血 再向勵中加入氮仿 和水振按轉麒分層鼠仿層稀甲輾冋收默減壓濃縮至小體秋冷址析晶,抽濾殘渣粗京晶住箭我昔乙）（主含師綢分昔乙）按上述溶劑比例進行第二孵取分鳥氯仿層稀甲輾冋收剜y減壓濃縮甫議析臥眥殘渣結晶住紂乙）住紬兩由于三者的苷元上所含羥基的數目和位置不同，決定了極性由大至小順序為：苷丙苷乙 苷甲。其中極性小的化合物（苷甲、乙）在非極性溶劑（氯仿）中溶解度大，極性較大

13、者（苷丙）則在極性溶劑（稀甲醇）中溶解度大，據此可用甲醇-氯仿-水混合溶劑萃取，使毛花洋地黃苷甲、乙、丙得以分離。3 去乙酰基毛花洋地黃苷丙的去乙酰基比較容易，利用氫氧化鈣即可水解去掉乙酰基。毛花洋地黃昔丙按昔丙-甲醇-包氧化鈣-蒸懈水（1窘：33ml : 50-70mg :伽nl）的v比例，先將甘內洛十屮醉、氯氧化鈣溶十水中.分別過濾，混合 混合液（反應汶）I靜置過俊，測卩比至水解液稍顯械性.pH接近陽上水解完畢，|用1%1（CL調至中性，過濾濾液J減壓濃縮至小體枳.放置過夜析晶粗晶| /msofsni® '2結品結晶（占乙他丟崔洱地黃甘丙）堿性試劑可使強心苷分子中的酰基水

14、解、內酯環開裂，但強心苷分子中的苷鍵不會被堿水 解破壞，而且氫氧化鈣只能水解去掉酰基，并不能破壞強心苷分子中的內酯環。鈴蘭中強心苷化合物的提取分離技術鈴蘭（Convallaria keiskei ）是百合科植物，具有強心、利尿的功效。鈴蘭含多種強心苷類化 學成分，有的強心作用極強，如鈴蘭毒苷的強心作用約為G-毒毛旋花子苷效價的 1.22倍,約為洋地黃毒苷效價的3.53倍，作用迅速，可用于治療克山病，但毒性性也較大。從鈴蘭中提取鈴蘭毒苷的工藝流程如下：1溶劑法鈴蘭卒草粗粉|苯-乙醇（9：1）回流提取液1減壓回收溶汕加水折膠膠質沉淀水湃液（14麻肝綠盍零氯仿-乙醇（9： 1）準取水層氯仿層冰落性雜劇 體積,用水萃取數次氮仿層水層械圧濃縮至小體枳，靜置15-20口抽:濾粗晶甲鉞結晶結晶2 活性炭吸附法從鈴蘭草中提取分離鈴蘭毒苷還可采用下列方法：各種強心苷的提取多以醇或稀醇為提取溶劑，雖提取率較高，但提取物中雜質也較多，進一步分離和純化比較困難。有報道以苯-乙醇、氯仿-乙醇、乙醇-水等混合溶劑以及水分別作溶劑提取鈴蘭毒苷，并對實驗結果進行了比較，結果顯示乙醇-水（1 : 5、1 : 9）提取率最高，但水溶性雜質最多。苯