1、12345678 一種限制酶只能識別一種特定的核苷酸一種限制酶只能識別一種特定的核苷酸序列，并在特定的切割點上將序列，并在特定的切割點上將DNA DNA 分子切斷。分子切斷。目前已發(fā)現(xiàn)的限制酶有目前已發(fā)現(xiàn)的限制酶有200200多種。多種。9101112131415 目前被較廣泛提目前被較廣泛提取使用的目的基因有：取使用的目的基因有：蘇云金桿菌抗蟲基因、蘇云金桿菌抗蟲基因、人胰島素基因、人干人胰島素基因、人干擾素基因、種子貯藏擾素基因、種子貯藏蛋白基因、植物抗病蛋白基因、植物抗病基因等。基因等。16q 直接分離基因鳥槍法 將供體生物的將供體生物的DNADNA用限制酶用限制酶切割為許多片段，再用運

2、載體將切割為許多片段，再用運載體將這些片段都運載到受體生物的不這些片段都運載到受體生物的不同細胞中去。只要有一個細胞獲同細胞中去。只要有一個細胞獲得了需要的目的基因并得以表達，得了需要的目的基因并得以表達，基因工程就算成功了。基因工程就算成功了。該法最大的缺點是帶有很大該法最大的缺點是帶有很大的盲目性，工作量大，成功率低。的盲目性，工作量大，成功率低。且不能將真核生物的基因轉移到且不能將真核生物的基因轉移到原核生物中去。原核生物中去。17q 人工基因合成法1.1. 逆轉錄法：以信使逆轉錄法：以信使RNARNA為模板，在逆轉錄酶的為模板，在逆轉錄酶的作用下將脫氧核苷酸合作用下將脫氧核苷酸合成合成

3、成合成DNA(DNA(基因基因) )。2.2. 直接合成法：根據(jù)蛋白直接合成法：根據(jù)蛋白質的氨基酸順序推算出質的氨基酸順序推算出信使信使RNARNA核苷酸順序，核苷酸順序，再據(jù)此推算出基因再據(jù)此推算出基因DNADNA的脫氧核苷酸順序。用的脫氧核苷酸順序。用游離脫氧核苷酸直接合游離脫氧核苷酸直接合成相應的基因。成相應的基因。DNA合成儀PCR擴增儀181920 前三步的處理十分繁鎖，為保證目的基因得前三步的處理十分繁鎖，為保證目的基因得到有效利用，通常用大量的受體細胞來接受不多到有效利用，通常用大量的受體細胞來接受不多的目的基因。這樣，處理的受體細胞中真正攝入的目的基因。這樣，處理的受體細胞中真

4、正攝入了目的基因的很少，必須將它從中檢測出來。了目的基因的很少，必須將它從中檢測出來。 細菌的檢測，將每個受體細胞單獨培養(yǎng)形成細菌的檢測，將每個受體細胞單獨培養(yǎng)形成菌落，檢測菌落中是否有目的基因的表達產(chǎn)物。菌落，檢測菌落中是否有目的基因的表達產(chǎn)物。淘汰無表達產(chǎn)物的菌落，保留有表達產(chǎn)物的進一淘汰無表達產(chǎn)物的菌落，保留有表達產(chǎn)物的進一步培養(yǎng)、研究。步培養(yǎng)、研究。無表達產(chǎn)物無表達產(chǎn)物無表達產(chǎn)物無表達產(chǎn)物有表達產(chǎn)物有表達產(chǎn)物無表達產(chǎn)物無表達產(chǎn)物21q 多細胞生物的檢測，將每個受體細胞單獨培養(yǎng)并誘導多細胞生物的檢測，將每個受體細胞單獨培養(yǎng)并誘導發(fā)育成完整個體，檢測這些個體是否攝入目的基因，發(fā)育成完整個體，檢測這些個體是否攝入目的基因，攝入的基因是否表達（是否表現(xiàn)出相應的性狀）。淘攝入的基因是否表達（是否表現(xiàn)出相應的性狀）。淘汰無變化的個體，保留有相應變化的個體進一步培養(yǎng)、汰無變化的個體，保留有相應變化的個體進一步培養(yǎng)、研究。研究。例：用棉鈴飼喂棉例：用棉鈴飼喂棉鈴蟲，如蟲吃后不出現(xiàn)鈴蟲，如蟲吃后不出現(xiàn)中毒癥狀，說明未攝入中毒癥狀，說明未攝入目的基因或攝入目的基目的基因或攝入目的基因未表達。如蟲