1、精品文檔實驗一薄層板的制備、活度測定及應(yīng)用1. 目的要求1.1掌握薄層板的制備及薄層層析的操作方法1.2掌握吸附劑活度測定的原理及方法1.3應(yīng)用薄層層析法檢測以中草藥化學(xué)成分2. 實驗原理2.1薄層層析是一種微量、快速的層析方法。它不僅可以用于純物質(zhì)的鑒定，也 可用于混合物的分離、提純及含量的測定。還可以通過薄層層析來摸索和確定柱 層析時的洗脫條件。根據(jù)分離的原理不同，薄層層析可以分為兩類：用吸附劑鋪 成的薄層所進(jìn)行的層析為吸附薄層層析； 用纖維素粉、硅膠、硅藻土為支持劑鋪 成的薄層，屬于分配薄層層析。薄層層析中以吸附簿層為多用， 吸附薄層中常用 的吸附劑為氧化銷和硅膠。2.2吸附簿層主要是利

2、用吸附劑對樣品中各成分吸附能力不同，及展開劑對它們 的解吸附能力的小同，使各成分達(dá)到分離。吸附作用主要由于物體表面作用力、 氫鍵、絡(luò)合、靜電引力、范德華力等產(chǎn)生。吸附強(qiáng)度決定于吸附劑的吸附能力， 還受被吸附成分的性質(zhì)影響，更與展開劑的性質(zhì)有關(guān)。2.3分配簿層層析的原理是，用極性溶劑吸附在同體支持劑上所形成的混合物， 鋪成簿層（或裝柱），然后活化、點(diǎn)樣（或上樣），再用極性較弱的展開劑（或洗 脫劑）進(jìn)行展開。在展開過程中，各成分在固定相和流動相之間作連續(xù)不斷的分 配。由于各成分在兩相間的分配系數(shù)不同，因而可以達(dá)到相互分離的目的。2. 4由于化合物的極性不同，吸附能力不相同，在展開劑上移動，進(jìn)行不同

3、程 度的解析，根據(jù)原點(diǎn)至主斑點(diǎn)中心及展開劑前沿的距離，計算比移值 （Rf）:R 溶質(zhì)的最高濃度中心至原點(diǎn)中心的距離f溶劑前沿至原點(diǎn)中心的距離化合物的吸附能力與它們的極性成正比，具有較大極性的化合物吸附較強(qiáng)，因此 R值較小。在給定的條件下（吸附劑、展開劑、板層厚度等），化合物移動的距 離和展開劑移動的距離之比是一定的，即R值是化合物的物理常數(shù)，其大小只與化合物本身的結(jié)構(gòu)有關(guān)，因此可以根據(jù) R值鑒別化合物2.5薄層層析可適用小量樣品（幾到幾十微克甚至0.01 g ）的分離：也可用于多 達(dá)500mg樣品的分離，是近代有機(jī)化學(xué)中用于定性、定量的一種重要手段。特別 適用于那些揮發(fā)性小的化合物，以及在高溫

4、下易發(fā)生化學(xué)變化而不能用氣相色譜 分析的物質(zhì)。精品文檔3 實驗材料3.1材料：硅膠GF254，硅膠（H）,羧甲基纖維素鈉，玻璃片，市售薄層板3.2 溶劑：石油醚，乙酸乙酯，二乙胺等4 實驗步驟4.1硅膠（H）羧甲基纖維鈉（CMC-Na薄層板的制備取0.8%羧甲基纖維納10ml，倒入燒杯中，然后逐步加入薄層層析用硅膠 3.3 克，不斷振搖成均勻的稀糊，把兩塊載玻片面對面結(jié)合在一起，這樣每片只 有一面與硅膠糊接觸，使薄片浸入硅膠稀糊中，然后慢慢取出，分開二塊薄 片，將未粘附硅膠糊的那一面水平放在一張清潔的紙上，讓其自然陰干，100C下烘30分鐘。冷后于干燥器內(nèi)備用。未消耗的硅膠稀糊可貯存在廣口 瓶

5、內(nèi)，以供再用。4.2 吸附劑的活度測定一般選用 三種染料的 薄層 層析法進(jìn)行測定， 即用 0.01%二甲 基黃（Dimethy-yellow. P-Dimethylaminoazobenzene。蘇丹紅（Sudan IH），靛酚藍(lán)（Indophenol blue 4-Tapnthoquinone-4-dimethyl aminoaniline） 的苯溶液各 10 卩1 點(diǎn)滴于硅膠H薄層上，以苯為展開劑，展開10cm （約20分鐘），觀察染料分離 情況。4.3 薄層層析的應(yīng)用4.3.1湖北貝母生物堿成分的TLC檢識分別用毛細(xì)管吸取湖北貝母總生物堿氯仿溶液點(diǎn)滴在硅膠CMC-Na薄層上，以 C6H5

6、-EtoAc-NHE2t（6： 4： 1）的比例配成展開劑展開，待展開劑展開至離薄板上 端邊緣約 1cm 時，取出薄板自然吹干，然后噴灑顯色劑改良碘化鉍鉀噴霧，晾 干，觀察并記錄TLC分離結(jié)果。4.3.2丹參色素的TLC檢識分別用毛細(xì)管吸取丹參乙醚提取液點(diǎn)滴在硅膠CMC-Na薄層上，以石油醚-醋酸乙酯 （9： 1）的比例配成展開劑展開， 待展開劑展開至離薄板上端邊緣約 1cm 時，取出薄板自然吹干，然后噴灑顯色劑改良碘化鉍鉀噴霧，晾干，觀察并記錄 TLC分離結(jié)果。5 實驗結(jié)果及討論5.1實驗制備的硅膠CMC-Nc薄層表面均勻，無明顯氣泡出現(xiàn)，但活化后觸碰薄 層時，容易出現(xiàn)掉粉現(xiàn)象，粘合效果欠佳

7、，這表明薄層板的質(zhì)量仍有待提高。5.2 對薄層板進(jìn)行活度測試， 觀察薄板， 可以看到拖尾現(xiàn)象， 且薄板經(jīng)溶劑浸泡 后有少許地方吸附劑出現(xiàn)明顯脫落現(xiàn)象， 這可能是由于羧甲基纖維鈉加入的量不精品文檔夠引起的。5.3用0.01%二甲基黃、蘇丹紅川，靛酚藍(lán)的苯溶液各10卩點(diǎn)滴于硅膠H薄層上， 以苯為展開劑，展開后，三種染料分離明顯：靛酚藍(lán)斑點(diǎn)接近于起始線，二甲基 黃斑點(diǎn)靠近薄層中間位置，蘇丹紅斑點(diǎn)則于兩種染料斑點(diǎn)之間。5.4 取硅 膠 Gf 高效 板對 湖 北貝 母生 物 堿成 分進(jìn) 行 檢識 ， 在 展 開 劑 C6H5-EtoAc-NHEt2（6:4 ：1）展開之后，吹干，觀察薄層板無明顯現(xiàn)象，放在紫外 燈下明顯看到樣品點(diǎn)接近原點(diǎn)， 無展開現(xiàn)象， 而噴灑顯色劑之后， 原點(diǎn)上的兩個 樣品變成黑色。換成展開劑為 C6H5-EtoAc-NHEt2 （3 ：4：1） ，其極性提高，樣品 點(diǎn)有稍微的上升， 說明樣品中生物堿的極性較高， 需要換成極性高的展開劑才能 得到好的分離效果。5.5 取硅膠 Gf 高效板對丹參