1、    重癥肌無力患者血清IgG-乙酰膽鹼 受體抗體亞型研究        【摘要】目的 探討重癥肌無力(MG)患者血清IgG-乙酰膽鹼受體抗體(AChRAb)亞型的分布規律及其臨床意 義。方法 采用ABC-ELISA法檢測43例MG組和25例臨床對照組、20例正常對照組血清中IgG-AChRAb亞 型IgG1-4。結果 MG組與兩對照組相比IgG1和IgG4亞型抗體無顯著差別，IgG2亞型抗體顯著升高(P <0.05)，IgG3亞型抗體顯著降低(P<0

2、.05)；MG組各臨床類型間各亞型抗體無顯著 差別。結論 IgG-AChRAb亞型以IgG2活性為主，但未顯示與MG臨床類型有關。【關鍵詞】 重癥肌無力乙酰膽鹼受體抗體IgG亞型 Study on the subclasses of IgG-AChR antibodies in serum in patients with myasth enia g ravisLi JiminLiu DaokuanLü Chuanzhenet al（Department of Neurology, Brain Hospital Affiliated to Nanjing Medical Univer

3、sity,Nanjing 210029）【Abstract】Objective To investigate the role and its clinical signific ance on the subclasses of IgG-AChR ant ibodies in serum in patients with myasthenia gravis.Methods ABC-ELISA technique was used to detect the subclasses IgG1-4 of IgG-AChR antibodies in sera from 43 patients w

4、ith MG, 25 clinical controls and 20 normal controls.ResultsThe re was no obvious difference on IgG1 and IgG4 subclass antibodies b etween MG group and two control groups.IgG2 subclass antibodies increased significantly (P0.05), IgG3 sub class antibodies decreased significantly(P0.05).There were no d

5、i fferences the various subclass antibodies among various clinical types in MG gro up.Conclusion IgG-AChR antibodies subclasses might take IgG2 activity as the dominant facto r,but there was no any correlation with the clinical types of the disease.【Key words】 Myasthenia gravisAcetylcholine receptor

6、 antibodyIgG subclass重癥肌無力(MG)是目前論證最清楚的自身免疫性疾病。乙酰膽鹼受體抗體(AChRAb)被認為是 MG主要的致病因子。IgG型AChRAb是AChRAb的主要抗體，IgG是由IgG1-44種亞型組 成，故有必要進一步研究IgG-AChRAb亞型抗體。我們采用ABC-ELISA法檢測了43例MG患者 血清中IgG-AChRAb亞型，以探討其在MG中的分布規律及在MG發病機理中的意義。1資料與方法1.1一般資料MG組43例，男26例，女17例，年齡563歲，平均33.8歲。依據病史、體征 和疲勞試驗、新斯的明試驗診斷，部分病人經肌電、胸腺影像學檢查、AChRA

7、b檢測進一步 證實。根據Osserman法分型：型20例，a型11例，b型5例，型4例，型2例和型1 例。臨床對照組25例，男11例，女14例，年齡1665歲，平均35.8歲，均為同期住院病人 ，多發性硬化17例，癲癇7例，多發性肌炎1例。正常對照組20名，男8名，女12名，年齡22 43歲，平均34歲，均為正常獻血員。1.2方法均取外周靜脈血3 ml，分離血清，-30保存備用。IgG-AChRAb亞型抗體測定 采用ABC-ELISA法。首先將5 g/ml的-銀環蛇毒素(廣西醫學院蛇毒研究所提供)按 每孔100 l 包板(聚苯乙烯微量反應板，上海塑料三廠生產)，37，2小時，加10%小牛血 清

8、封 板，4過夜；加1:25稀釋肌肉粗提液(按Lindstnom法1改良提取)，37，2小時 ；加1:10稀釋待測血清，37，1小時；加1:400鼠抗人單克隆IgG1-4(Sigma公司生 產)，37，1小時；加1:1000辣根過氧化物酶聯羊抗鼠IgG(Sigma公司生產)，37，1小時 ，加鄰苯二胺為底物顯色，室溫5分鐘，用4N硫酸終止反應后立即在511酶標儀(上海分析儀 器三廠生產)上比色，波長為429 nm，自動打印結果。直接以實際測得的OD值為各標本的結 果。1.3統計學處理各組檢測數據用方差分析進行處理。2結果2.1MG組及臨床對照組、正常對照組血清IgG-AChRAb亞型抗體檢測結果

9、見表1。 表1 3組IgG-AChRAb亞型抗體檢測結果(±s) 例數IgG-AChRAb亞型抗體IgG1IgG2IgG3IgG4MG組430.0782±0.02790.1830±0.1609*0.0522±0.0140*0.0895±0.0951臨床對照組250.0815±0.02270.0798±0.01710.0766±0.02330.0721±0.0284正常對照組200.0773±0.01630.0719±0.01400.0808±0.02500.0737±

10、;0.0131 與正常對照組比較*P<0.05 結果表明：正常對照組 和臨床對照組組內4種亞型抗體檢測結果方差分析無顯著性差別(P>0.05)，而MG組組內 4種亞型抗體有極顯著性差別(P<0.01)；3組之間相互比較發現，IgG1和IgG4兩種 亞型抗體組間均無顯著性差別(P>0.05)，而IgG2和IgG3兩種亞型抗體組間均有顯 著性差別(P<0.05)，其中MG組中IgG2亞型抗體顯著高于其它兩組，IgG3亞型抗體 則是顯著低于其它兩組，在正常對照組與臨床對照組間無顯著性差別(P>0.05)。2.2MG組臨床各型IgG-AChRAb亞型抗體檢測結果見表

11、2。各型之間均無顯著差別(P >0.05)。表2 MG組臨床各型間IgG-AChRAb亞型抗體檢測結果(±s) 例數IgG-AChRAb亞型抗體IgG1IgG2IgG3IgG4型200.0725±0.02590.1786±0.15970.0508±0.01270.0874±0.0838a+b型160.0823±0.03020.1854±0.16810.0533±0.01390.0907±0.0981+型70.0851±0.03180.1901±0.17320.0537±

12、0.01510.0928±0.10823討論 MG病人AChRAb的特性是多克隆性或異質性。這主要體現在下列幾個方面：(1)分型：AChRA b極大部分是IgG型抗體，其在MG病人血清中檢出陽性率為63%93%26，但也存 在其它類型的抗體。Lefvert5發現2例MG病人在疾病的早期IgG型抗體出現之前有 IgM型抗體存在；Tindall7發現92例MG中有5例IgM型抗體陽性，48例中有2例IgA 型抗體陽性，但同時都伴有IgG型抗體存在；喬健等8報道96例MG檢出IgM型抗體 陽性18例。(2)IgG亞型：根據IgG分子主鏈(r鏈)抗原性差別及二硫鍵數目和位置的不同可 將IgG

13、分為IgG144個亞型，它們在正常人體 中含量分別為65%、23%、8%和4%左右。在MG的各個病例中AChRab也是由不同的IgG亞型組 成的7，9，10，其中以IgG1和IgG2占優勢。有研究表明IgG亞型與全身型M G病人的各種 臨床狀態以及與不同的AChR來源之間不存在相關性，但在眼肌型MG中IgG3亞型抗體顯著增 高 ，且這些抗體對從眼肌和正常肢體肌來源的AChR的反應較去神經來源的AChR明顯11 。在日 本人MG患者IgG亞型分析中12，發現極大部分為IgG1抗體，而IgG2和IgG3 活性很低。(3) 抗-BGT(-Bungarotoxin)結合位點抗體：Whiting等13應

14、用含有飽和-BG T的人AChR親和層析柱分離出抗 -BGT結合位點抗體和結合在AChR其它位點的抗體，并發現分離到的2例病人的抗-BGT 結 合位點抗體全部為IgG3型抗體。(4)單克隆抗體(mAbs)：應用雜交瘤技術已能產生對人ACh R的mAbs14，應用抗主要免疫源區域的mAbs直接注入動物可誘導出實驗性自身免 疫性MG15。本研究結果表明，中國人MG患者AChRAb亞型分布明顯以IgG2為主，IgG1和IgG4活性一 般，而 IgG3活性明顯低于正常，這與國外及日本人的報道不完全一致，可能提示MG的AChRab亞 型 分布存在有種族差異。4種亞型抗體在MG各臨床分型間無明顯差異，說明

15、IgG亞型抗體與MG 的臨床表現無明顯的相關性，與國外報道結果相一致。至于IgG3活性明顯降低，可能提示 少數MG患者存在IgG3量的不足或缺乏。作者單位：李繼民（南京醫科大學附屬腦科醫院神經內科210029）劉道寬（上海醫科大學華山醫院神經病學研究所）呂傳真（上海醫科大學華山醫院神經病學研究所）蔣雨平（上海醫科大學華山醫院神經病學研究所）肖保國（上海醫科大學華山醫院神經病學研究所）喬健（上海醫科大學華山醫院神經病學研究所）參 考 文 獻1，Lindstrom JM,Lambert EH.Content of acetylcholine receptor and antibodies boun

16、d to receptor in myasthenia gravis,experimental autoimmune myasthenia gravis,and Eaton-Lambert syndrome.Neurology, 1978,28:1302，Lindstrom JM,Seybold ME,Lennon VA,et al.Antibody to acetylcholine receptor in myasthenia gravis,prevalence,clinical correlates,and diagnostic value.Neurology, 1976,26:10543

17、，Hinman CL,Hudson RA,Burek CL,et al. An enzymelinked immunosorbent assay for an tibody against acetylcholine receptor.J Neurosci Methods,1983,9:1414，Hinman CL,Ernstoff RM,Montgomery IN,et al.Clinical correlates of enzymeimmunoa ssay versus radioimmumoassay measurements of antibody against acetylchol

18、ine rece ptor in patients with myasthenia gravis.J Neurol Sci,1986,75:3055，Lefvert AK,Bergstrom K,Matell G,et al.Determination of acetylcholine receptor antibody in myasthenia gravis:Clinical usefulness and pathogenic implications.J Neurol Neurosurg Psychiat,1978,41:3946，Vincent A,Newsom-Davis J.Ace

19、tylcholine receptor antibody as a diagnostic test for myasthenia gravis.Results in 153 validated cases and 2969 diagnostic assays .J Neurol Newrosury Psychiat,1985,48:12467，Tindall RSA.Humoral immunity in myasthenia gravis biochemical characteriaztion f acguired anti-receptor antibodies and clinical

20、 correlation.Ann Neurol,1981, 10:4378，喬健，李繼民，肖保國,等.重癥肌無力病人血液中IgM型乙酰膽堿受體，突觸前膜抗體檢測 及臨床意義.臨床神經病學雜志,1998;11:879，Vincent A,Newsom-Davis J,et al.Anti-acetylcholine receptor antibodies.J Neur ol Nourosurg Psychiat,1980,43:59010，Lefvert AK.The human acetylcholine receptor antibody:studies of kinetic prope rties and the reaction with antidiotypic antibodies.Ann NY Acad Sci,1981,377:12511，Vincent A,Newsom-Davis J.Acetylcholine receptor antibody characteristics in myasthenia gravis. I Patients with generalized myasthenia or disease restricted to ocular