1、21摘 要目前馬鈴薯用于消炎止痛時一般采取現切現用、以馬鈴薯片敷于患處的方法，但是片狀馬鈴薯久放或貼敷后變色，需頻繁更換，使用不便。本實驗擬提取馬鈴薯中的主要消炎成分、進行定性、定量分析，并將主要消炎成分制成軟膏，以小鼠皮膚炎癥模型比較馬鈴薯軟膏、馬鈴薯片與消炎藥物的療效。關鍵詞 馬鈴薯 消炎 生物堿 水溶性維生素 馬鈴薯提取物軟膏1 前言馬鈴薯又名土豆、洋芋、山藥蛋、薯仔、茨仔等，富含淀粉、蛋白質、多種維生素及礦物質等，一直深受百姓喜愛。同時作為中草藥的一種，馬鈴薯也常被中醫用作和胃健中、解毒消腫的天然藥物。馬鈴薯性平味甘，具有抗感染、解毒、消腫鎮痛、緩解痙攣、促進細胞再生和傷口愈合等作用，

2、對人體無刺激，副作用小。以片狀馬鈴薯貼敷患處的方法來消除紅腫及疼痛已經廣為人知，并有顯著效果。臨床常用馬鈴薯片來緩解腫瘤病人因化療而導致的外周靜脈輸液外滲性損傷，而且效果比50%硫酸鎂更有效，即使長期使用也不會產生消炎止痛膏的毒副作用及依賴性。但是片狀馬鈴薯在使用上存在一定弊端，如必須現切現用、貼敷時需經常更換、水份容易蒸發等，給病人的使用帶來了很大的不便。因此需要尋找一種更好的利用馬鈴薯消炎的替代方法。本實驗擬提取馬鈴薯中消炎的有效成分，并將主要消炎成分以不同配比制成軟膏，以動物模型比較馬鈴薯軟膏、馬鈴薯片與消炎藥膏的消炎效果。2 實驗目的提取馬鈴薯中消炎的主要有效成分并制成軟膏，鑒定馬鈴薯

3、軟膏的消炎效果，為臨床探索一種利用馬鈴薯消炎的最佳方案。3 實驗原理3.1 馬鈴薯中消炎成分分析馬鈴薯中的龍葵堿（茄堿）具有興奮平滑肌和加強血液流通作用。維生素B2 參與糖、蛋白質及脂肪的代謝，可保護皮膚免受炎癥的侵害；維生素B1 能激活膽堿乙酰化酶，有維持神經系統的功能及抗神經炎的作用，從而防止病人皮膚受損，減少醫源性損害。3.2 龍葵堿和水溶性維生素的提取龍葵堿22馬鈴薯中所含的生物堿主要為龍葵堿，其化學結構見圖1。大多數生物堿幾乎不溶于水或難溶于水，易溶于乙醇、甘油等有機溶劑。圖1 龍葵堿的化學結構維生素B1維生素B1 的化學結構見圖2，在酸性溶液中很穩定，在堿性溶液中對熱極不穩定，易被

4、氧化和受熱破壞。維生素B2維生素B2（結構見圖3）能溶于水，可溶于氯化鈉溶液，易溶于稀的氫氧化鈉溶液，在酸性條件下也有一定的溶解度，對空氣、熱穩定，且在酸中非常穩定，即使短時間內高壓加熱亦不至于破壞。但在堿性溶液中則較易被破壞。游離核黃素對光敏感，特別是紫外線，可產生不可逆分解。圖2 維生素B1 的結構 圖3 維生素B2 的結構本實驗選用制藥時常用的提取劑鹽酸一次提取維生素B1 和B2。在酸性條件下維生素B1 和B2 都有一定的溶解度，且化學性質比較穩定。3.3 龍葵堿和水溶性維生素的鑒定龍葵堿的鑒定龍葵堿的鑒定有沉淀反應和顯色反應兩種。但由于馬鈴薯含大量蛋白質及多糖，對沉淀反應影響較大，所以

5、選用顯色反應。在稀硫酸中龍葵堿與甲醛溶液作用生成橙紅色化合23物。水溶性維生素的鑒定利用重氮苯磺酸反應鑒定維生素B1：在碳酸氫鈉存在的堿性條件下，硫胺素可與重氮苯磺酸作用產生紅色。維生素B2 的乙醇中性溶液和水溶液呈黃色，在中性或酸性溶液中經光照射自身可產生黃綠色熒光，在稀溶液中熒光的強度與核黃素的濃度成正比。核黃素能被亞硫酸鹽還原成無色的二氫化物，失去熒光。但此氫化物在空氣中易被重新氧化，恢復熒光。3.4 龍葵堿和水溶性維生素的定量根據Lambert-Beer 定律A=KCL 計算龍葵堿、維生素B1、B2 的質量濃度C (mg/ml) ，并轉化為50g 馬鈴薯中的含量。其中A 為吸光度；L

6、為比色皿厚度單位是cm；K 為吸光系數，在入射光的波長、溶液種類和溫度一定的條件下K 為定值： 530nm 波長處龍葵堿的吸光系數K 為177；246nm 波長處Vit B1 的吸光系數K 為421；444nm 波長處Vit B2的吸光系數K 為323； L(cm)為比色皿厚度。（上述吸光系數為根據已有文獻的實驗數據計算而得到12）。4 實驗設備實驗主要儀器包括離心機、電子天平、臺式酸度計、紫外-可見分光光度計、紫光燈。實驗器材主要包括索氏提取器、抽濾裝置、研缽、一次性皮試點刺針、計時器、直尺等。5 實驗材料及試劑5.1 實驗材料馬鈴薯（新鮮馬鈴薯及發芽馬鈴薯）、小鼠、消炎止痛膏（喜療妥軟膏）

7、。5.2 試劑及其配制試劑95%乙醇、5%稀硫酸、甲醛；0.01mol/L 的鹽酸、碳酸氫鈉、氫氧化鈉、對氨基苯磺酸、濃鹽酸、亞硝酸鈉、2.5%亞硫酸氫鈉溶液（用2%碳酸鈉作溶劑）；甘油、明膠；8%硫化鈉酒精溶液、花生四烯酸。主要試劑的配制碳酸氫鈉堿性溶液：取氫氧化鈉1g 溶于30 ml 蒸餾水中，加碳酸氫鈉1.5 g，混勻后，用水稀釋至50 ml。重氮試劑的配制：溶液A：將對氨基苯磺酸1 g 溶解于15 ml 濃鹽酸中，然后加水稀釋24至100 ml。溶液B：將亞硝酸鈉0.5 g 溶解于水中，稀釋到100 ml。現用現配。需用時，將3 ml 溶液B 加到100 ml 溶液A 中，混勻即得重氮

8、試劑，在冰浴中保存，至少15 min 后方可使用。此溶液配好后，存放時間不能超過24 h。4%花生四烯酸稀釋液：取10%食品級花生四烯酸10g 溶于25ml 無水乙醇中。明膠溶液：稱取20g 明膠，放入盛有70 ml 溫熱（40）的甘油和10ml 蒸餾水的燒杯中，并使其充分溶解后備用。6 實驗操作步驟6.1 龍葵堿的提取、鑒定與定量提取稱取50g 馬鈴薯，切成小塊，用研缽、研杵稍加研磨后裝濾紙筒內。加入35ml 95%乙醇溶液清洗研缽、研杵后洗液轉移入索氏提取器（圖4）中。在圓底燒瓶中倒入80ml 95%乙醇溶液，在索氏提取器中抽提11.5 h 后，得到龍葵堿提取液，測量提取液的體積為V1 ，

9、單位ml。圖4 龍葵堿的提取鑒定將少量提取液進行離心，得到濾液，取濾液2ml，加入5 滴5%稀硫酸，震蕩，充分混合后加入甲醛溶液，如溶液顯橙紅色，則證明提取液中含龍葵堿。定量測定530nm 處的吸光度（A530），根據A=KCL，計算龍葵堿的質量濃度C(mg/ml)。530nm波長處龍葵堿的吸光系數K 為為177；L(cm)為比色皿厚度。6.2 水溶性維生素的提取、鑒定與定量提取25在錐形瓶中加入0.01mol/L 的鹽酸100ml，稱取50g 馬鈴薯磨成碎末放入錐形瓶中，用力振蕩5min 并攪拌5min。放置10 min 后，用抽濾裝置抽濾，將濾液離心后取上清液，備用，標記為維生素提取液，測

10、量提取液的體積為V2，單位ml。注意避光保存。鑒定維生素B1 的鑒定：取提取液1 ml，加入碳酸氫鈉堿性溶液1.5 ml，再加入重氮苯磺酸，搖勻后，在10 min 內觀察到深紅色的出現，則為維生素B1。維生素B2 的鑒定：分別取提取液2ml 于A、B 兩試管中，在紫光燈下觀察其黃綠色熒光。在A 試管中加入510 滴亞硫酸氫鈉溶液，比較兩管的熒光。若A 試管熒光消失，則為維生素B2。定量分別測定246nm、444nm 處吸光度（A246、A444），根據A=KCL，分別計算維生素B1、B2 的質量濃度C(mg/ml)。246nm 波長處維生素B1 的吸光系數K 為421；444nm 波長處維生素

11、B2 的吸光系數K 為323；L(cm)為比色皿厚度。6.3 馬鈴薯提取物軟膏的制備按下表分別取生物堿提取液、維生素提取液、明膠溶液若干，混合，在蒸發皿中加熱溶解，再在室溫下冷凝為膠狀，制備不同配比的馬鈴薯軟膏。表1 馬鈴薯提取物軟膏主要成分的配比成分（ml） 1 號軟膏 2 號軟膏 3 號軟膏 4 號軟膏生物堿提取液5 10 5 1095%乙醇 5 - 5 -維生素提取液5 5 10 100.01mol/LHCl5 5 - -明膠溶液 30 30 30 30總體積 50 50 50 506.4 馬鈴薯提取物軟膏與馬鈴薯片、消炎藥膏的療效比較小鼠皮膚炎癥模型的制備選取同種系、同性、年齡、體重等

12、指標相近的小白鼠共10 只，每只小鼠均用8%硫化26鈉酒精溶液脫毛，再在后腰兩側位置上用4%花生四烯酸稀釋液對稱點刺共4 處，并作好記號。30min 后測定紅斑的直徑。消炎處理將10 只皮膚炎癥模型小鼠隨機分成兩組。第一組五只小鼠分別編號為A、B、C、D、E。該組小白鼠點刺部位標記為14 號位置，消炎處理方法為：1 號位置為空白對照，2 號位置敷馬鈴薯片（約1cm1cm，新鮮制備），3 號位置敷馬鈴薯提取物1 號軟膏，4 號位置涂抹消炎止痛膏。比較不同處理對傷口消腫的作用。消炎處理后每隔10min 揭開貼敷處測定紅斑的直徑。6.5 不同配比的馬鈴薯提取物軟膏的消炎作用比較取第二組皮膚炎癥模型小

13、鼠共五只，分別編號為甲、乙、丙、丁、戊。該組小白鼠點刺部位標記為ad 位，消炎處理方法：a 位敷1 號軟膏，b 位敷2 號軟膏，c 位敷3 號軟膏，d 位敷4 號軟膏。敷上馬鈴薯提取物軟膏后用保鮮膜包裹貼敷處。在確定的消炎處理療效顯著的時間點，測定紅斑的直徑，比較不同配比的馬鈴薯提取物軟膏的消腫效果。7 結果及計算7.1 龍葵堿、維生素B1、B2 的定性結果龍葵堿的鑒定結果與原因分析；維生素B1 的鑒定結果與原因分析；維生素B2 的鑒定結果與原因分析；7.2 龍葵堿、維生素B1、B2 的定量結果龍葵堿的吸光度A530；馬鈴薯中龍葵堿的含量（mg/50g）= A530/（177L）V1。維生素B

14、1 的A246；馬鈴薯中維生素B1 的含量（mg/50g）= A246/（421L）V2。維生素B2 的A444；馬鈴薯中維生素B2 的含量（mg/50g）=A444/（323L）V2。7.3 馬鈴薯軟膏與馬鈴薯片、消炎藥膏的療效比較皮膚炎癥程度的判斷表2 花生四稀酸點刺30 分鐘后紅斑直徑（單位：mm）A 小鼠 B 小鼠 C 小鼠 D 小鼠 E 小鼠1 號位272 號位3 號位4 號位結果統計分析：比較紅斑直徑的均值，分析同一只小鼠四個部位的紅斑直徑是否存在差異；五只小鼠之間是否存在差異。三種消炎方法的療效比較表3 不同消炎方法處理后紅斑直徑（單位：mm）時間(min)10 20 30 40

15、 50 60A小鼠1號位B 小鼠1 號位C 小鼠1 號位D 小鼠1 號位E 小鼠1 號位A 小鼠2 號位B 小鼠2 號位C 小鼠2 號位D 小鼠2 號位E 小鼠2 號位A 小鼠3 號位B 小鼠3 號位C 小鼠3 號位D 小鼠3 號位E 小鼠3 號位A 小鼠4 號位B 小鼠4 號位C 小鼠4 號位D 小鼠4 號位28E 小鼠4 號位注：14 號位分別為空白對照、馬鈴薯片、馬鈴薯軟膏、消炎藥膏。結果統計分析：無任何處理時紅斑直徑的變化（炎癥的自愈情況）；每一種消炎方法處理療效最顯著的時間點，尋找三種處理療效均較顯著的時間點。計算療效最顯著的時間點不同消炎方法處理后紅斑直徑與處理前紅斑直徑的差值（見

16、表4），以F 檢驗進行統計分析各處理組間是否存在顯著差異。表4 療效最顯著的時間點不同消炎方法處理后紅斑直徑的變化（單位：mm）1 號位（空白對照）2 號位（馬鈴薯片）3 號位（馬鈴薯軟膏）4 號位（消炎止痛膏）A 小鼠B 小鼠C 小鼠D 小鼠E 小鼠均值方差7.4 不同配比的馬鈴薯軟膏消炎作用的比較皮膚炎癥程度的判斷表5 花生四稀酸點刺30 分鐘后紅斑直徑（單位：mm）甲小鼠 乙小鼠 丙小鼠 丁小鼠 戊小鼠a 位b 位c 位d 位結果統計分析：比較紅斑直徑的均值，分析同一只小鼠四個部位的紅斑直徑是否存在差異；五只小鼠之間是否存在差異。不同配比的馬鈴薯軟膏處理后的紅斑直徑在前一實驗確定的療效最顯著的時間點，以四種不同配比的軟膏處理紅腫部位，記錄29處理后五只小鼠各四個部位的紅斑直徑（表6）。表6 馬鈴薯軟膏處理后紅斑直徑（單位：mm）甲小鼠 乙小鼠 丙小鼠 丁小鼠 戊小鼠a 位b 位c 位d 位注：a、b、c、d 號位分別敷14 號軟膏。計算馬鈴薯軟膏處理后與處理前紅斑直徑的差值（見表7），以F 檢驗進行統計分析各處理組間是否存在顯著差異。表7 不同配比的軟膏處理后紅斑直徑的變化（單位：mm）a 位（1 號軟膏）b 位（2 號軟膏）c 位（3 號軟膏）d 位（4 號軟